四君子汤多糖对IEC-6细胞迁移、钾通道蛋白及膜电位的影响

目的:观察四君子汤多糖对小肠上皮IEC-6细胞迁移及多胺调控信号通路钾通道蛋白和膜电位的影响,探讨四君子汤修复胃肠黏膜损伤的作用机制。方法:划痕法建立IEC-6细胞迁移模型,观察正常培养及α-二氧甲基乌氨酸(DFMO,多胺合成抑制剂)或4-氨基吡啶(4-AP,钾通道抑制剂)负荷下四君子汤多糖对IEC-6细胞迁移的影响;分别以荧光定量PCR法和Western blot法检测四君子汤多糖对IEC-6细胞钾通道蛋白kv1.1 mRNA和蛋白表达的影响;流式细胞仪检测四君子汤多糖对IEC-6细胞膜电位的影响。结果:与空白对照组比较,四君子汤多糖(40、80、160 mg/L)可促进IEC-6细胞迁移,提高IEC-6细胞kv1.1 mRNA和蛋白表达水平及细胞膜电位超极化水平(P<0.05或P<0.01);与DFMO模型组比较,四君子汤多糖(40、80、160 mg/L)可逆转DFMO所致细胞迁移数减少、kv1.1 mRNA和蛋白表达的降低以及细胞膜电位去极化(P<0.05或P<0.01);与4-AP模型组比较,四君子汤多糖(20、40、80 mg/L)可逆转4-AP所致细胞迁移的抑制、kv1.1 mRNA和蛋白表达的降低(P<0.05或P<0.01)。结论:四君子汤多糖可促进IEC-6细胞迁移,作用机制与影响多胺调控信号通路钾通道蛋白表达和细胞膜电位有关。

慢性心衰大鼠下丘脑室旁核瞬时外向钾通道蛋白Kv4.2和Kv4.3低表达促进肾交感神经兴奋性

目的:观察慢性心衰大鼠下丘脑室旁核内瞬时外向钾通道蛋白Kv4.2和Kv4.3的变化及其对交感神经活性的影响。方法:采用冠状动脉左前降支结扎术建立大鼠心衰模型或假手术模型,造模4周后超声心动图测定心功能;酶联免疫吸附法测定血浆去甲肾上腺素(NE)及血清N端前脑钠肽(NT-pro BNP)含量;Western blot和real-time PCR法测定室旁核内Kv4.2和Kv4.3的表达情况;室旁核部位注射钾通道阻滞剂4-氨基吡啶(4-AP),电生理记录仪记录血压、心率和肾交感神经放电的变化。结果:与假手术组比,心衰组大鼠心功能明显降低,血浆NE及血清NT-pro BNP明显升高,室旁核内Kv4.2和Kv4.3表达明显下调;注射4-AP后导致血压、心率和交感神经放电升高,但心衰组的升高幅度小于假手术组。结论:心力衰竭时室旁核内Kv4.2和Kv4.3表达下调并伴有交感神经放电增加,促进心衰进展。

间斑寇蛛毒致痛大鼠脊髓神经元细胞中钙离子激活的内向整流钾通道蛋白表达

目的分析不同浓度间斑寇蛛毒致痛大鼠脊髓灰质神经元细胞中钙离子激活的内向整流钾通道（IK1）的蛋白表达变化。方法选取36只雄性sD大鼠，采用分层随机抽样法分为对照组（4只）和毒素组（32只），毒素组分别于右后足趾部皮下注射10、40、100、300μl／kg间斑寇蛛粗毒液，每种浓度各8只。观察毒素组大鼠注射毒液后的缩足反应。对照组不做处理。24h后将所有大鼠断颈处死，取样第4—5腰椎脊髓样本，采用苏木精一伊红（HE）染色法观察脊髓神经元细胞结构，采用链霉菌抗生物素蛋白一过氧化物酶连结（SP）法观察神经元细胞中IKl蛋白的表达情况，采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测IK1 mRNA的表达水平。分析不同浓度下IK1 mRNA及蛋白表达的变化。采用Pearson相关性检验分析大鼠缩足次数与毒液浓度的相关性。结果注射间斑寇蛛毒15min后毒素组大鼠1h内的缩足次数分别为（44±16）、（64±9）、（69±19）、（91±35）次，Pearson相关性分析显示不同浓度下的1h缩足次数与毒液浓度呈正相关（F2=0．548，P〈0．05）。对照组及10、40、100、300μl／kg毒素组大鼠脊髓神经元细胞中平均IK1蛋白阳性细胞数分别为（2．0±1．0）、（5．0±2．0）、（6．0±1．0）、（6．0±2．0）、（7．0±1．0）个；各毒素组平均阳性细胞数均明显高于对照组，40、100、300μl／kg毒素组明显高于10μl／kg毒素组（均P〈0．05），40、100、300μl／kg毒素组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。对照组及10、40、100、300bd／kg毒素组大鼠脊髓中IK1 mRNA的相对表达量分别为（0．56±0．16）、（0．62±0．27）、（1．27±0．10）、（1．53±0．29）、（1．61±0．86）；各毒素组IK1 mRNA表达水平均明显高于对照组，40、100、300bd／kg毒素组明显高于10μl／kg毒素组（均P〈0．05），40、100、300μl／kg毒素组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论问斑寇蛛毒具有急性致痛作用，与毒素呈浓度依赖性；其疼痛传递机制依赖于钙离子激活的IK1 mRNA及蛋白在脊髓神经元细胞中的表达。

钙激活钾通道蛋白4在甲状腺乳头状癌组织的表达及临床意义

目的探讨钙激活钾通道蛋白4(KCNN4)在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达情况、其与患者临床病例特征及预后的关系。方法收集2021年1月至2021年6月在华中科技大学同济医学院附属同济医院甲状腺乳腺外科手术切除的PTC及癌旁甲状腺组织共116例,通过免疫组织化学实验检测KCNN4的表达水平,并分析不同KCNN4表达水平的患者之间的临床病例特征及预后的差异;通过细胞计数试剂盒(CCK-8)实验和划痕愈合实验检测KCNN4对PTC细胞增殖和迁移能力的影响。组间比较采用非配对t检验;KCNN4与患者临床病理特征的关系采用χ^(2)检验或Fisher精确检验,生存分析采用Kalpan-Meier法。结果KCNN4在PTC中的表达显著高于癌旁组织(免疫组织化学评分:8.17±2.46比3.26±0.72,t=8.44,P<0.05);KCNN4的表达与肿瘤多灶性情况[低表达比高表达(下同),单灶为31比50,多灶为6比29,χ^(2)=2.24,P<0.05]、肿瘤TNM分期(Ⅰ~Ⅱ期为35比60,Ⅲ~Ⅳ期为2比19,χ^(2)=2.43,P<0.05)及甲状腺外侵犯显著相关(无腺外侵犯为34比59,有腺外侵犯为3比20,χ^(2)=2.17,P<0.05),而与患者年龄(≤55岁为12比28,>55岁为25比51,χ^(2)=0.32,P>0.05)、性别(男为5比16,女为32比63,χ^(2)=0.88,P>0.05)、是否合并有桥本甲状腺炎无关(无桥本甲状腺为23比56,有桥本甲状腺炎为14比23,χ^(2)=0.94,P>0.05)。KCNN4高表达患者的无复发生存率低于低表达组患者(复发率:8.86%比0%,HR=2.42,P<0.05);CCK-8实验表明,敲减KCNN4后的KTC-1和BCPAP细胞的增殖能力低于对照组细胞[KTC-1对照组比短发卡RNA(shRNA)转染组,72 h:1.28±0.11比0.47±0.06,t=8.28,P<0.05;96 h:1.82±0.24比0.61±0.10,t=10.45,P<0.05;BCPAP对照组比shRNA转染组,72 h:1.37±0.19比0.51±0.07,t=6.14,P<0.05;96 h:2.03±0.47比0.84±0.20,t=3.99,P<0.05]。划痕愈合实验显示,敲降KCNN4后的KTC-1和BCPAP细胞划痕愈合能力低于对照组细胞[KTC-1对照组比shRNA转染组24 h划痕愈合百分比:(66.47±7.60)%比(33.41±3.76)%,t=6.28,P<0.05;BCPAP对照组比shRNA转染组24 h划痕愈合百分比:(71.25±9.06)%比(43.32±5.83)%,t=12.10,P<0.05]。结论KCNN4与PTC发生、发展密切相关。

小麦钾离子通道蛋白基因TaPC1介导植株抵御低钾逆境功能研究

【目的】钾离子通道(potassium channel, PC)蛋白通过介导离子跨膜转运,增强低钾胁迫下植株对钾素的吸收和利用能力。本研究以采用RNAseq鉴定小麦应答低钾基因获得的PC家族基因TaPC1为对象,对该基因分子特征、应答低钾表达模式及其介导植株抵御低钾逆境的能力进行研究。【方法】采用生物信息学工具分析TaPC1分子特征,采用溶液培养法培养丰钾(K2O 6 mmol/L)、低钾(K2O 0.06 mmol/L)处理小麦和转化株系幼苗,采用DNA重组技术构建TaPC1亚细胞定位和表达质粒,利用农杆菌介导法遗传转化烟草。采用常规植株形态、生理和qPCR方法测定植株生长、生理指标和基因表达。【结果】TaPC1与植物种属PC家族基因具有较高的同源性,该基因编码蛋白具有植物种属PC蛋白跨膜域保守特征,翻译蛋白经内质网分选后定位于细胞质膜。低钾(0.06 mmol/L)处理下,根、叶中TaPC1表达增强;将低钾处理植株转入丰钾(6 mmol/L)营养液进行恢复处理后,根、叶中该基因表达下调,表明TaPC1呈低钾应答表达模式。基因遗传转化结果表明,与野生型(WT)对照相比,低钾处理下,超表达TaPC1烟草株系植株干物质积累量增多,细胞活性氧累积量减少,细胞保护酶(SOD、CAT和POD)活性提高,丙二醛含量降低。基因表达分析表明,低钾处理下,转化株系内细胞保护酶编码基因NtSOD1、NtCAT1;1、NtPOD1;2及NtPOD1;6的转录本丰度较野生型(WT)显著增多,表明上述基因通过增强表达,在改善转化株系低钾处理下细胞活性氧稳态中发挥重要作用。此外,与WT相比,低钾处理下转化株系的钾累积量显著增多,光合碳同化能力增强。【结论】TaPC1呈低钾胁迫增强表达模式,上调表达该基因能显著增强植株钾素吸收,有效维持低钾逆境下的细胞活性氧稳态特征,在改善植株光合物质生产和抵御低钾逆境能力中发挥重要作用。

甘蔗(Saccharum species hybrid)钾通道蛋白基因SsAKT1的克隆及对胁迫的响应

钾通道蛋白是植物吸收钾的主要途径之一。本研究利用RT-PCR技术从低钾胁迫的甘蔗根系中克隆得到钾通道蛋白基因,命名为SsAKT1,全长为3119bp,开放阅读框为2658bp,包含885个氨基酸。SsAKT1基因编码的蛋白与其他作物中AKT1基因具有高度的同源性,一致的氨基酸比例在61%~94%之间。该基因编码的蛋白具有6个跨膜结构域、中央孔道结构域、锚定蛋白结构域等AKT基因家族所具有的全部功能结构域,属于AKT家族。蛋白的进化树分析表明：SsAKT1与禾本科植物玉米、粟米、水稻等中的AKT1亲缘关系较近,而与双子叶植物中的AKT1关系较远。实时荧光定量PCR检测低钾、干旱及盐胁迫24h后基因表达的变化显示,SsAKT1基因在三种胁迫下,表达均上调,其中以盐胁迫对该基因表达影响最大。由此可见SsAKT1基因对甘蔗耐低钾、干旱、盐胁迫具有一定的作用。

12种真菌钾离子通道蛋白生物信息学分析

利用生物信息学对真菌钾离子通道蛋白进行序列分析,推断并预测其结构和功能。本文筛选了酿酒酵母、黄曲霉、烟曲霉、禾谷镰刀菌、玉米黑粉菌、布拉克须霉等12种真菌的钾离子通道蛋白,综合采用Blast、Prot Param、Signal P和Swiss-Model等生物信息学网站和软件对这些蛋白的理化性质、系统进化、蛋白结构和功能域等进行了分析。结果表明:所选择的钾离子通道蛋白氨基酸序列长度在659~928 aa之间,理论等电点在5.45~9.54之间,主要定位在质膜、液泡上。二级结构分析表明,真菌钾离子通道蛋白均由α-螺旋、β-折叠、无规则卷曲和延伸链等结构元件组成,其空间结构高度相似,且12种钾离子通道蛋白都拥有保守的Tx GYGD钾离子选择器特征片段。

检测心肌细胞钾离子通道蛋白活化水平方法的优化

介绍了一种如何合理的利用蛋白质免疫沉淀和蛋白质免疫印迹相结合的方法检测大鼠心肌细胞钾离子通道蛋白Kv1.2和Kv1.5的表达与活化水平。实验结果表明,与单独利用免疫印迹的方法相比较,本实验是对钾离子通道蛋白及其它亚家族的钾通道蛋白磷酸化表达水平检测方法的一种优化,从而获得一套可行、简单、合理的实验方案,同时也提高了检测的准确性,敏感性及特异性。

G蛋白耦联的内向整流型钾通道4基因多态性与新疆维吾尔族人群血脂异常的相关性

目的研究G蛋白耦联的内向整流型钾通道4(GIRK4)基因多态性与新疆维吾尔族血脂异常的相关性。方法采用TaqmanPCR方法,对GIRK4基因rs2604204、rs4937391、rs6590357、rs11221497多态性在维吾尔族自然人群中进行基因分型,按常规方法测定血脂水平并进行比较分析。结果 50岁以下人群中,三酰甘油异常组和正常组rs6590357位点的基因型分布差异有统计学意义(P=0.005),总胆固醇异常组和正常组rs11221497位点的基因型分布差异有统计学意义(P=0.011)。采用Logistic回归方法校正性别、肥胖等因素后,50岁以下人群中rs6590357位点与TG异常、rs11221497位点与TC异常仍然为阳性关联。rs6590357位点CT+TT基因型组中TG水平明显高于CC组(P=0.014),rs11221497位点CC基因型组中TC水平明显高于CG+GG组(P=0.006)。对其进行单体型分析后发现,H3单体型频率在TG异常组与正常组间差异有统计学意义(P=0.007)。结论 GIRK4基因rs11221497和rs6590357位点多态性可能与新疆维吾尔族血脂异常相关。

G蛋白激活的内向整流型钾通道4基因研究进展

G蛋白激活的内向整流型钾通道4(GIRK4)是G蛋白偶联内向整流型钾通道家族成员之一,由KCNJ5编码,广泛分布于哺乳动物心、脑等组织器官。近年研究发现,GIRK4基因异常表达与心房纤颤相关,而且可能与肥胖、代谢综合征等众多其他临床疾病的发生、发展密切相关,阐明GIRK4基因在临床疾病中的病理生理机制对探讨一些临床疾病新的诊治思路具有重要的开拓性意义。

马铃薯钾离子通道蛋白SKT1的原核表达与纯化

克隆马铃薯(Solanum tuberosum L.)钾离子通道蛋白SKT1基因片段后原核表达并纯化SKT1蛋白,为进一步研究SKT1的晶体结构与功能,以及与其它钾离子通道蛋白的相互作用奠定基础.以马铃薯试管苗总RNA反转录出的cDNA为模板,PCR扩增SKT1蛋白的胞内区,基因片段为1758bp,构建原核表达载体pET30-SKT1,转化大肠杆菌BL21表达株菌,IPTG诱导表达.经SDS-PAGE检测发现SKT1蛋白主要是以包涵体的形式存在.利用6M盐酸胍对SKT1包涵体进行溶解,利用Ni柱亲和纯化,最后在复性缓冲液中复性.获得了SKT1蛋白,复性得率大于40%,纯度达到95%以上,Western Blotting鉴定正确.

G蛋白偶联内向整流钾通道亚基2mRNA在颞叶癫大鼠海马内的表达

目的 探讨G蛋白偶联内向整流钾通道亚基 2 (GIRK 2 )在颞叶癫疒间 大鼠海马内的表达变化。方法 应用腹腔注射海人酸致疒间 大鼠 ,采用原位杂交法检测大鼠海马GIRK 2mRNA的表达。结果 GIRK 2mR NA在癫疒间 大鼠海马齿状回表达增加 ,与正常对照组相比差异有显著性 (P <0 0 1)。结论 癫疒间 大鼠海马内GIRK 2增高是机体对神经元网络过度兴奋的代偿反应。

G蛋白偶联的内整流型钾通道在哮喘模型大鼠肺组织的表达

目的检测G蛋白偶联的内整流钾通道（G protein-coupled inwardly rectifying potassium channels,GIRK）在哮喘模型中的表达改变,并寻找调节其表达变化的因素。方法用卵清蛋白和铝佐剂致敏E3大鼠14d后,用卵清蛋白进行攻击以诱导哮喘模型,用磷酸盐缓冲液致敏并攻击的大鼠作为对照,通过观察肺组织病变、总IgE水平的改变等手段评价哮喘模型。用RT-PCR检测GIRK亚基1-4的mRNA水平,用Western blot等手段检测大鼠肺组织中GIRK1和GIRK3的蛋白水平,并用免疫组化确定肺组织中GIRK表达的解剖部位。根据免疫组化的结果,选用A549细胞株作为模型,用IL-4刺激,用PCR、Western blot等手段检测IL-4对GIRK表达的影响。结果与对照组相比,哮喘模型组肺组织中GIRK的mRNA水平下降,哮喘模型组肺组织中GIRK蛋白水平也下降。免疫组化结果显示,GIRK在大鼠主要表达于气道上皮。随IL-4浓度的升高,在A549细胞中GIRK的所有的亚基的表达均呈剂量依赖性下降趋势;选择50ng/mL IL-4刺激A549细胞,GIRK的所有的亚基的表达均呈刺激时间依赖性的下降。结论在E3大鼠哮喘模型中,IL-4下调气道上皮中GIRK的表达。

钾离子通道相互作用蛋白1与γ-氨基丁酸能神经元在戊四唑致癫痫大鼠海马部位的改变

目的研究钾离子通道相互作用蛋白1(KChIP1)在癫痫发生过程中的变化及其与γ-氨基丁酸(GABA)能神经元的关系。方法成年大鼠制作急性戊四唑癫痫模型,免疫组织化学法结合激光扫描共聚焦显微镜技术观察大鼠脑中KChIP1免疫阳性神经元与GABA能阳性神经元在海马部位的表达及改变。结果急性戊四唑癫痫大鼠海马部KChIP1阳性神经元数较对照组明显增加(P<0.05),GABA能阳性神经元、KChIP1/GABA双标阳性神经元数与对照组无显著性差异(P>0.05);KChIP1和GABA能阳性神经元在海马部位的共存率约为63.9%。结论KChIP1在癫痫发生中可能起重要作用;KChIP1与GABA能神经元虽有密切的共存关系,但在功能上并不完全一致。

钾离子通道相互作用蛋白1在大鼠脑中的分布及其与GABA能神经元的关系

目的与方法用免疫组织化学法结合激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察钾离子通道相互作用蛋白1(KChIP1)免疫阳性神经元在大鼠脑中的分布及其与GABA能阳性神经元的定位关系,研究钾离子通道相互作用蛋白1(KChIP1)的功能。结果KChIP1免疫阳性神经元在大鼠皮层、海马均可见,海马部位KChIP1阳性神经元主要分布于锥体细胞层、齿状回颗粒细胞层;KChIP1阳性和GABA能阳性神经元在正常大鼠大脑顶叶皮层和海马部位的共存比例分别为63.94%、63.11%。结论在大鼠脑内,KChIP1主要与抑制性GABA能神经元共存发挥其调节神经元兴奋性的功能。

开郁颗粒对抑郁大鼠模型海马区G蛋白偶联的内向整流型钾通道(GIRK1)mRNA表达的影响

目的:研究慢性不可预见性应激及孤养结合所致抑郁大鼠海马区G蛋白偶联的内向整流型钾通道(GIRK1)mRNA表达的影响。方法:经过21d慢性应激后,观察大鼠行为学改变,用原位杂交的方法测定抑郁大鼠海马CA1、CA3区GIRK1 mRNA表达。结果:慢性应激后,应激大鼠出现同抑郁患者相似的行为改变;开郁颗粒各组大鼠GIRK1 mRNA CA1、CA3区的表达明显与对照组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结论:慢性不可预见性应激同孤养结合可建立较稳定的抑郁症模型;慢性应激可以使抑郁大鼠海马区GIRK1表达下降,而开郁颗粒则可明显增加GRIK1mRNA在海马区的表达。

钾离子通道相互作用蛋白与Kv4

钾离子通道为心肌复极的主要离子通道,其中构成Ito的Kv4主要存在于左心室外膜下心肌。但体外表达研究表明,Kv4通道电流与体内存在的Ito性质并不一致,这表明还存在其他一些辅助亚单位与Kv4共同构成Ito,其中一类最重要的β亚单位为钾离子相互作用蛋白(KChIPs)。KChIPs为一类钙离子结合蛋白,现已发现4种KChIPs基因。KChIPs与Kv4在体外共同表达时,KChIPs可增加Kv4在细胞膜上的表达,减慢失活以及加速复活,这样使产生的电流接近于体内存在的心室Ito。

人钾离子通道调节蛋白的原核表达及纯化

目的:探讨人钾离子通道调节蛋白(KCNRG)的原核表达体系和纯化条件,为该蛋白的功能机制研究提供工具。方法:以pcDNA3.1-KCNRG-2ex重组质粒为模板,采用特异引物扩增KCNRG基因编码区。PCR 产物双酶切后克隆入pET28a-MBP-His和pGEX-4T-1 载体中。重组的pET28a-KCNRG-MBP-His和pGEX-4T-1-KCNRG质粒转化Top10感受态细胞。鉴定阳性克隆,并选取测序正确的质粒转化Rosetta(DE3)蛋白表达菌株,IPTG 诱导表达,用SDS-PAGE 及Western blot检测重组融合蛋白的表达。结果: PCR扩增产物长度为819 bp。经双酶切和测序,鉴定重组质粒pET28a-KCNRG-MBP-His和pGEX-4T-1-KCNRG构建成功。SDS-PAGE检测,KCNRG-MBP融合蛋白在菌液的上清中表达,KCNRG-GST融合蛋白主要以包涵体形式表达。Western blot 检测,重组KCNRG-MBP蛋白和重组KCNRG-GST蛋白分别能被抗6×His 抗体和抗GST抗体识别。经镍柱亲和层析纯化,获得纯化的KCNRG-MBP融合蛋白(凝胶成像系统软件分析纯化蛋白的纯度>90%)。结论:成功构建重组质粒pET28a-KCNRG-MBP-His,并实现KCNRG-MBP融合蛋白的可溶性原核表达。

G蛋白门控内向整流钾通道在物质成瘾中的研究进展

G蛋白门控内向整流钾(GIRK)通道在中枢神经系统中广泛分布,具有维持神经元静息电位、调节兴奋性和神经递质释放等重要作用。研究表明,成瘾行为与大脑奖赏系统中GIRK通道的表达和活性关系密切,GIRK通道可能成为成瘾治疗的潜在靶点。本文总结了近年来GIRK通道在结构、脑内分布以及物质成瘾中的研究进展,为深入理解物质成瘾的分子调控机制提供理论基础,也为临床治疗提供新的分子靶标和治疗策略。

内向整流钾2.1通道蛋白对人牙囊细胞成骨分化的影响及其机制研究

目的探讨内向整流钾(Kir)2.1通道蛋白对人牙囊细胞(hDFC)成骨分化的影响及其机制。方法组织块结合酶消化法分离、培养hDFC,流式细胞术鉴定细胞来源,成骨诱导鉴定hDFC成骨分化能力;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Kir2.1编码基因KCNJ2在hDFC中的表达,定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Kir2.1在hDFC成骨诱导前和诱导后KCNJ2基因表达量的变化;膜片钳技术检测hDFC在成骨诱导前和诱导后的细胞膜电位变化;提高细胞外钾离子的浓度(50 mmol·L^(-1))观察膜电位去极化对hDFC成骨分化能力的影响,应用Kir2.1钾通道阻断剂氯化铯(CsCl)和4-甲氧基苄基-1-萘基甲基-胺盐(ML133)观察阻断Kir2.1通道对hDFC成骨分化能力的影响,同时行RT-qPCR检测观察2种干预措施前后成骨分化相关基因[RUNX相关转录因子2(RUNX2)、骨钙素(OCN)]的表达变化情况。降低细胞外钾离子的浓度(2 mmol·L^(-1)),钙离子成像检测膜电位超极化对细胞内钙离子浓度的变化。结果RT-PCR结果显示,hDFC表达Kir2.1通道基因KCNJ2;RT-qPCR结果显示,成骨诱导7 d后,KCNJ2在hDFC中的表达量上调;膜片钳结果显示,成骨诱导7 d后,hDFC膜电位由(-12±3.2)mV超极化为(-47±5.2)mV;茜素红和碱性磷酸酶染色结果显示,提高细胞外钾离子的浓度或阻断Kir2.1通道蛋白的功能,能够明显抑制hDFC的成骨矿化能力;钙离子成像结果显示,膜电位超极化能够引起细胞内钙离子浓度的增高。结论Kir2.1通道蛋白介导的膜电位超极化在hDFC成骨分化的过程中起重要的作用。