动脉粥样硬化中钾通道Kv1.3阻断剂对巨噬细胞极化的影响

目的:探讨动脉粥样硬化中钾通道Kv1.3阻断剂抗hKv1.3E314抗体对巨噬细胞分化的影响。方法:培养THP-1单核细胞,给予佛波酯100μg/L诱导72h使其分化为巨噬细胞。将巨噬细胞洗涤后重新接种在6孔板中,分为A组、B组和C组:A组加入LPS 10ng/L和IFN-γ20μg/L诱导24h使其分化;B组给予E314抗体(300nmol/L)在37℃孵育2h后加入LPS 10ng/L和IFN-γ20μg/L诱导24h使其分化;C组细胞不做任何处理。倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化;流式细胞术鉴定巨噬细胞分型;ELLISA检测细胞上清液中IL-10、IL-12表达水平。结果:经流式细胞术鉴定:A组细胞iNOS抗体强阳性,为M1型;B组细胞CD206抗体强阳性,为M2型;C组流式结果为阴性。ELLISA结果显示A组IL-12表达水平高于B组(P<0.05),A组IL-10表达水平低于B组(P<0.05)。结论:体外诱导巨噬细胞分化,炎性因子促使其向M1型分化,具有促进炎症反应的作用;加入Kv1.3通道阻断剂后,炎性因子同样诱导分化的巨噬细胞会向M2型抗炎方向发展。通过阻断巨噬细胞上的Kv1.3通道可以促进巨噬细胞向着具有抗炎作用的M2型巨噬细胞分化。

Kv1.3钾通道在骨肉瘤中的表达及作用研究

目的探讨特异性短发卡RNA(shRNA)抑制Kv1.3钾通道对骨肉瘤MG-63细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应、Western blotting和免疫组化检测骨肉瘤MG-63细胞中Kv1.3钾通道的表达,并分别采用CCK-8法、裸鼠骨肉瘤异种移植模型和流式细胞仪检测MG-63细胞增殖、生长和凋亡的变化,采用Western blotting检测MG-63细胞中多聚ADP核糖聚合酶(PARP)和caspase-3的表达水平。结果 Kv1.3钾通道在骨肉瘤细胞中异常高表达。沉默Kv1.3钾通道的Ad5-Kv1.3-shRNA能从体内外有效地抑制MG-63细胞增殖并促进其早期凋亡。沉默Kv1.3钾通道可明显诱导细胞凋亡相关蛋白caspase-3和PARP的裂解。结论 Kv1.3钾通道参与骨肉瘤细胞增殖和凋亡的过程,有望成为骨肉瘤治疗及诊断的新靶点基因。

Kv1.3钾通道调节人脐静脉内皮细胞LOX-1受体摄取oxLDL

目的观察Kv1.3钾通道在LOX-1摄取oxLDL中的作用,并探讨其机制。方法分别以慢病毒载体shRNA-Kv1.3-LV3-pGLV-h1-GFP-puro和Kv1.3-LV5-EF1a-GFP-Puro转染人脐静脉内皮细胞(HUVECs),以获得HUVECs细胞中下调和上调表达Kv1.3蛋白。利用全细胞膜片钳技术记录Kv1.3蛋白过表达和下调的HUVECs Kv1.3 I/V曲线。以oxLDL与HUVECs共孵育后,分别应用免疫比色法和Fluo-3/AM荧光标记法测定细胞内胆固醇和钙离子相对含量。经Western blot法测定Kv1.3、LOX-1、p38、p38磷酸化水平。结果shRNA950转染组HUVECs Kv1.3 mRNA和蛋白表达量较空白对照组显著降低(P<0.05),过表达转染组Kv1.3 mRNA和蛋白表达量较空白对照组显著升高(P<0.05)。Kv1.3表达上调后,I/V曲线上移,该效应可被奎尼丁抑制;Kv1.3表达下调后,I/V曲线下移。Kv1.3过表达组胆固醇相对水平明显高于对照组(P<0.05),shRNA950+oxLDL组胆固醇的相对含量低于oxLDL组(P<0.05)。Western blot法检测显示,Kv1.3过表达组的LOX-1蛋白表达量较对照组升高(P<0.05),Kv1.3敲低组的LOX-1蛋白水平较对照组减低(P<0.05);Kv1.3过表达组磷酸化p38与p38蛋白水平的比值高于对照组二者的比值(P<0.05),Kv1.3敲低组磷酸化p38与p38蛋白表达量的比值低于对照组两者的比值(P<0.05)。结论Kv1.3钾通道经p38信号通路参与调节HUVECs LOX-1受体摄取oxLDL。该研究为阐明LOX-1结合oxLDL的电荷依赖性机制增添了新的实验依据。

慢性心衰大鼠CD4^+ CD25^+ Treg细胞Kv1.3钾通道电流变化

目的观察慢性心衰大鼠脾脏CD4^+CD25^+调节T细胞(Treg)电压依赖性Kv1.3钾通道电流变化,为心衰发生、发展的免疫学机制提供证据。方法将25只健康雄性SD大鼠随机分为冠脉结扎的慢性心衰组(CHF组,n=18)和不结扎冠脉的对照组(Control组,n=7),手术结扎冠脉前降支建立心衰模型,通过超声心动图、血流动力学、血浆脑尿钠肽(BNP)及心肌Masson染色的检测确定心衰模型,应用免疫磁珠分离两组大鼠脾脏CD4^+CD25^+Treg细胞,采用全细胞膜片钳技术分别记录CHF组与Control组CD4^+CD25^+Treg细胞Kv1.3通道电流变化。结果CHF组左室射血分数(LVEF)为(39.3±10.0)%,较Control组[(84.5±3.7)%]明显降低(P<0.01);左室舒张末压(LVEDP)为(4.4±0.3)mmHg,较Control组[(11.6±1.4)mmHg]显著降低(P<0.01);血浆BNP水平为(562.0±22.0)μg/L,较Control组[(366.2±21.9)μg/L]显著升高(P<0.01)。Masson染色中,Control组红染的心肌细胞较多,细胞条纹清晰,CHF组大量蓝染的胶原纤维取代心肌纤维成条索状。CHF组大鼠CD4^+CD25^+Treg细胞Kv1.3钾通道峰值电流密度为(272.7±27.7)p A/p F,较Control组的(65.6±6.4)p A/p F明显增大(P<0.01)。两组大鼠CD4^+CD25^+Treg细胞膜电容分别为(1.67±0.14)p F和(2.07±0.18)p F,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CHF组CD4^+CD25^+Treg细胞Kv1.3通道峰值电流密度增大,提示其可能参与慢性心衰的发生和发展。

依普利酮对慢性心衰患者免疫应答的改变及对CD4^+CD25^+ Treg细胞Kv1.3钾离子通道的影响

目的通过观察慢性心力衰竭(Chronic heart failure,CHF)患者外周血免疫因子、Th17/Treg比例及CD4^+CD25^+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)电压依赖性Kv1.3钾离子通道电流的变化,为探究心力衰竭发生、发展的免疫学机制提供一定理论依据。方法密度梯度磁性分选Treg细胞后使用流式液相多重蛋白定量技术(Cytometric Bead Array,CBA)测定CHF组与正常对照组外周血血浆中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、TNF、IFN-γ荧光强度(Mean fluorescence intensity,MFI);流式法检测CHF组与正常对照组全血中Th17/Treg比例的变化;使用ELISA法测定TGF-β、IL-10的浓度;膜片钳实验分4组:Psora-4组、CHF组、正常对照组、CHF+EPL组。Psora-4组使用Kv1.3通道阻断剂Psora-4灌流正常对照组细胞,CHF组与正常对照组细胞不做干预直接检测,CHF+EPL组使用依普利酮(eplerenone,EPL)灌流CHF患者Treg细胞,通过全细胞膜片钳技术记录各组Treg细胞Kv1.3钾离子通道的电流变化。结果 CHF组IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、TNF、IFN-γ的MFI明显强于正常对照组(P<0.05);Th17/Treg比例有统计学差异:CHF组vs正常对照组[(2.97±0.86)vs(0.95±0.12)],(P<0.01);CHF组TGF-β、IL-10的浓度明显大于正常对照组(P<0.01);Psora-4组Treg细胞Kv1.3钾离子通道电流密度峰值较正常对照组明显减小[(35.6±3.51)vs(106.11±10.47)]pA/pF,(P<0.01);CHF组外周血Treg细胞Kv1.3钾离子通道电流密度峰值较正常对照组明显增大[(259.57±19.07)vs(106.11±10.47)]pA/pF,(P<0.01);CHF+EPL组CD4^+CD25^+ Treg细胞Kv1.3钾离子通道电流密度峰值较CHF组明显减小[(41.21±3.61)vs(259.57±19.07)]pA/pF,(P<0.01)。结论 CHF组较正常对照组各免疫因子明显增多,Th17/Treg细胞比例变高,CD4^+CD25^+ Treg细胞Kv1.3钾离子通道电流密度增大且依普利酮可降低心衰组电流密度,提示Kv1.3钾离子通道可能参与慢性心力衰竭的发生和发展。

Kv1.3钾离子通道阻断剂抑制NLRP3炎症小体活化的研究

NLRP3炎症小体在炎症反应中发挥重要作用.为了探讨Kv1.3钾离子通道阻断剂对NLRP3炎症小体活化的抑制作用.通过体外培养THP-1细胞,佛波酯诱导其分化为巨噬细胞,LPS联合ATP刺激,试验组提前加入Kv1.3通道阻断剂ADWX-1和不同浓度的PAP-1干预,ELISA检测上清中炎性细胞因子IL-1β分泌,Western blotting检测IL-1β、caspase-1蛋白表达,免疫荧光检测ASC的表达和斑点的形成等试验进行研究.结果显示:浓度为100 pmol/L ADWX-1和不同浓度的Kv1.3通道阻断剂PAP-1(浓度分别为100 nmol/L,1μmol/L,10μmol/L)能够浓度梯度依赖的抑制THP-1细胞上清中细胞炎性因子IL-1β产生.浓度为100 pmol/L ADWX-1处理能够抑制IL-1β成熟片段p17的分泌,浓度为10μmol/L PAP-1处理能够抑制caspase-1切割片段p10的生成.THP-1细胞中LPS,ATP双刺激能够形成ASC斑点,浓度为10μmol/L PAP-1处理能够抑制ASC的表达和斑点的形成.

急性STEMI患者血同型半胱氨酸与Kv1.3通道、肌钙蛋白关系的研究

目的探讨急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者血浆同型半胱氨酸(Hcy)水平与淋巴细胞电压门控性钾通道(Kv1.3通道)、Kv1.3通道与心肌肌钙蛋白I(c Tn I)水平的相关性。方法 80例STEMI患者根据血浆Hcy水平分为STEMI合并高同型半胱氨酸血症(Hhcy)组(STEMI+Hhcy组,Hcy>15μmol/L,n=41)和对照组(STEMI组,Hcy≤15μmol/L,n=39)。抽取血标本后全自动生化仪测定Hcy、c Tn I及血脂等指标,密度梯度离心法提取淋巴细胞,实时荧光定量PCR检测Kv1.3 m RNA表达,Western blot检测Kv1.3蛋白表达。结果 STEMI+Hhcy组c Tn I水平高于STEMI组(μg/L:22.997±5.880 vs.12.881±6.343;P<0.01)。多元线性回归分析显示年龄、性别、高血压病、糖尿病、吸烟史、家族史、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)对Hcy无明显影响(P>0.05)。STEMI+Hhcy组Kv1.3通道m RNA和蛋白相对表达量(1.35±0.14和0.85±0.12)较STEMI组升高(1.00±0.07和0.64±0.05,P<0.05)。Hcy水平与Kv1.3通道m RNA和蛋白表达水平呈正相关(r分别为0.299、0.542,P<0.05);Kv1.3通道蛋白表达水平与c Tn I水平呈正相关(r=0.644,P<0.05)。结论 Hcy可能对淋巴细胞Kv1.3通道表达起着一定的作用,导致血浆c Tn I水平升高。

特异性Kv1.3通道阻断剂对大鼠动脉粥样硬化的影响

目的研究特异性Kv1.3通道阻断剂对高脂喂养大鼠主动脉动脉粥样硬化(AS)发生的影响。方法构建AS大鼠模型,Wistar大鼠被随机分为正常对照(Control)组,AS组,AS药物治疗〔AS+Sh K(L5)〕组(n=10)。利用组织病理学方法观察三组大鼠主动脉组织病变;通过实时荧光定量PCR、Western印迹法检测大鼠主动脉组织Kv1.3通道和相关炎症因子表达水平;通过ELISA法检测大鼠外周血炎症因子水平。结果与Control组比较,AS组总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和甘油三酯(TG)水平均显著增高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平显著降低,而AS组和AS+Sh K(L5)组之间血脂水平均无差异(P>0.05)。大鼠主动脉组织HE染色显示AS组大鼠主动脉内膜增厚,中层平滑肌排列紊乱,炎症细胞浸润;AS+Sh K(L5)组较AS组主动脉组织病变有所减轻。mRNA水平,AS组Kv1.3道通和炎症因子干扰素(IFN)-γ、白介素(IL)-2、IL-10、IL-4、IL-1β的表达量明显高于Control组,而在AS+Sh K(L5)组的表达量明显低于AS组。蛋白水平中AS组Kv1.3道通和炎症因子(IFN-γ、IL-2和IL-10)的表达量明显高于Control组,而AS+Sh K(L5)组的表达量明显低于AS组。AS组大鼠外周血炎症因子(IL-2、IFN-γ和IL-10)的水平较Control组升高,而AS+Sh K(L5)组较AS组有所降低。结论特异性Kv1.3通道阻断剂Sh K(L5)能有效地抑制免疫细胞的活化,降低炎症因子的表达水平,从而减轻病变血管组织的炎症反应,同时可降低外周血炎症因子的水平,特异性Kv1.3通道阻断剂Sh K(L5)对AS的发生有一定的抑制作用。

电压依赖性钾通道和钙激活钾通道在高血压大鼠外周血淋巴细胞的变化

目的研究自发性高血压大鼠(SHR)外周血淋巴细胞电压依赖性钾通道(Kv)、钙激活钾通道(KCa)mRNA表达的变化,探讨淋巴细胞Kv1.3、KCa3.1在高血压病中的变化。方法使用密度离心法采集10只SHR和10只正常Wistar大鼠外周血淋巴细胞,运用实时荧光定量PCR技术检测外周血淋巴细胞Kv1.3、KCa3.1 mRNA表达水平。结果 (1)SHR组Kv1.3 mRNA表达水平高于对照组(P<0.05);(2)与对照组相比,SHR组KCa3.1 mRNA表达水平增高,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)SHR收缩压和淋巴细胞Kv1.3、KCa3.1基因表达呈正相关:相关系数为r=0.830,P=0.003;r=0.674,P=0.03。结论 SHR淋巴细胞Kv1.3、KCa3.1 mRNA表达增高,推测淋巴细胞钾通道增多可能与高血压病的发生发展相关。

钾通道阻滞剂对多发性硬化患者细胞因子分泌的影响

目的研究多发性硬化(multiple sclerosis,MS)患者髓鞘反应性CD4+T淋巴细胞分泌γ干扰素(INF-γ)和白细胞介素-4(IL-4)的水平,并探讨钾通道阻滞剂对其分泌的影响。方法采用酶联免疫斑点方法(ELISPOT)对12例急性期MS患者、12例缓解期MS患者(经INF--β1b治疗)和10名健康对照的CD4+T淋巴细胞在有无髓鞘抗原和钾通道阻滞剂作用下分泌细胞因子INF-γ和IL-4的变化进行比较。结果 MS急性期外周血CD4+T细胞以分泌IFN-γ为主;MS急性期及缓解期的CD4+T淋巴细胞经髓鞘碱性蛋白(MBP)刺激后分泌IFN-γ的水平较未加抗原组均增高(P<0.05),加入Kv1.3通道阻滞剂海葵毒素(Stichodactyla helianthustoxin,SHK)后,MS急性期和缓解期的MBP反应CD4+T淋巴细胞IFN-γ分泌明显减低(P<0.05),而对IL-4无明显影响。结论 Kv1.3钾通道阻滞剂SHK能减少MS患者MBP反应CD4+T细胞分泌IFN-γ,提示髓鞘反应性CD4+T细胞上Kv1.3通道有可能作为治疗MS的新靶点。

新疆哈萨克族高血压患者外周血淋巴细胞Kv1.3钾离子通道蛋白与左心室肥厚相关

目的研究淋巴细胞Kv1.3钾离子通道蛋白与新疆哈萨克族高血压患者左心室肥厚（LVH）的关系。方法选取2010年01月至2012年12在新疆医科大学第一附属医院心脏中心住院,未经降压药物治疗的新疆哈萨克族高血压患者100例（男48例,女52例）,年龄（55±14）岁。行心脏彩色多普勒超声检查和淋巴细胞Kv1.3钾离子通道蛋白测定,根据左心室质量指数（LVMI）分为LVH组和非LVH组。Pearson相关分析和多元线性回归分析淋巴细胞Kv1.3钾离子通道蛋白与高血压LVH的相关性。结果 LVH组淋巴细胞Kv1.3钾离子通道蛋白高于非LVH组（P〈0.01）。淋巴细胞Kv1.3钾离子通道蛋白预测LVH最佳临床分界点为7.462×100,敏感度为68.2%,特异度为98.2%,曲线下面积为0.852（95%CI0.714-0.900,P〈0.01）。淋巴细胞Kv1.3钾离子通道蛋白与室间隔厚度、左心室后壁厚度和LVMI呈正相关（分别为r=0.331、0.291和0.218,均P〈0.01）,且淋巴细胞Kv1.3钾离子通道蛋白为室间隔厚度、左心室后壁厚度和LVMI的独立影响因素（分别为β=0.412、0.512和0.319,均P〈0.01）。结论淋巴细胞Kv1.3钾离子通道蛋白为哈萨克族高血压患者LVH的独立影响因素。

中性粒细胞哮喘与嗜酸性粒细胞哮喘小鼠中Kv1.3钾离子通道表达及电流改变

目的 Kv1.3钾离子通道在与T细胞介导相关疾病的发生有一定的联系.该研究旨在研究Kv1.3钾离子通道在中性粒细胞及嗜酸性粒细胞哮喘模型中的表达及功能变化.方法 选择24只Balb/c小鼠,随机分成3组:正常对照组、中性粒细胞性哮喘组、嗜酸性粒细胞哮喘组.应用卵清蛋白联合内毒素建立哮喘模型,无创肺功能仪测定小鼠气道反应性、肺组织HE染色观察肺部炎症改变、免疫组织荧光检测Kv1.3钾离子通道在肺组织的定位、Western blot检测肺组织中Kv1.3钾离子通道蛋白表达量、全细胞膜片钳技术Kv1.3钾离子通道电流强度.结果 Kv1.3钾离子通道在哮喘气道及肺泡上皮区域表达增高,在中性粒细胞哮喘模型中表达强于嗜酸性粒细胞哮喘模型.中性粒细胞哮喘模型及嗜酸性粒细胞哮喘模型中肺泡灌洗液淋巴细胞上Kv1.3电流强度增加,且中性粒细胞哮喘模型增幅强于嗜酸性粒细胞哮喘模型.结论 Kv1.3钾离子通道在哮喘气道及肺泡上皮区域表达增高,电流强度增高.且在中性粒细胞哮喘模型中表达强于嗜酸细胞哮喘模型,为哮喘的治疗提供新的靶点.

Kv1.3钾离子通道在卵巢癌细胞株中的表达及活性(英文)

目的:研究Kv1.3钾离子通道在SKOV3卵巢癌细胞中的表达及其在细胞增殖和细胞周期中的作用。方法:应用RT-PCR和免疫细胞化学鉴别Kv1.3钾离子通道在SKOV3卵巢癌细胞中的表达。应用MTT和流式细胞技术观察KV1.3钾离子通道对SKOV3卵巢癌细胞增殖及细胞周期的影响。结果:4-氨基吡啶是Kv1.3钾离子通道特异性阻滞剂。不同浓度的4-氨基吡啶可以明显抑制SKOV3细胞的增殖,并且细胞周期也受到影响。G0/G1细胞比例增加,S期和G2/M期细胞比例下降。结论:Kv1.3钾离子通道在SKOV3卵巢癌细胞中表达,并且在细胞增殖及细胞周期变换中扮演着重要的角色。

替米沙坦对高血压患者外周血T淋巴细胞Kv1.3钾通道表达的抑制作用

目的研究替米沙坦对高血压患者T淋巴细胞电压依赖性钾通道(Kv1.3)mRNA和蛋白表达的影响。方法于2012年8月至12月在新疆医科大学第一附属医院高血压门诊随机入选未经降压药物治疗的新疆哈萨克族高血压患者30例,随机分为空白对照组、替米沙坦组及4-氨基吡啶(钾通道阻断剂)组3组,每组10例,男女各半。采用免疫磁珠法分离各组患者外周血T淋巴细胞进行体外培养活化增殖,给予相应分组处理[空白对照组不作任何处理,替米沙坦和4-氨基吡啶溶解后分别加入替米沙坦组和4-氨基吡啶组培养液],继续培养0、24、48h,并使用实时荧光定量PCR技术和Western blot检测哈萨克族高血压患者T淋巴细胞Kv1.3钾通道mRNA和蛋白的表达变化。结果替米沙坦组及4-氨基吡啶组T淋巴细胞Kv1.3钾通道mRNA和蛋白的表达较空白对照组减少(均P<0.05);替米沙坦对其mRNA表达的抑制率分别为50.0%、73.5%,对其蛋白表达的抑制率分别为49.3%、67.9%。结论替米沙坦能有效抑制高血压患者T淋巴细胞Kv1.3钾通道mRNA和蛋白的表达。

Kv1.3钾通道在Th17/Treg细胞诱导的自身免疫病中的作用

钾离子在人体的多种生命活动中起着非常重要的作用，其功能的实现首先要通过细胞膜上的钾离子通道进入胞浆后与相应的位点结合或激活某些分子之后发挥一系列的生理生化效应。钾离子通道是镶嵌在脂质双分子层中可形成水性孔道的糖蛋白，是钾离子进出细胞的必经之路，对细胞功能的调节具有重要作用。钾离子通道广泛表达在多种细胞的表面，这些通道又根据细胞行驶的功能、细胞的兴奋性和膜电位的不同在细胞膜上有选择性的分布。

替米沙坦对电压依赖性的Kv1.3和Kv1.5通道电流阻断作用的实验研究

目的通过观察替米沙坦对电压依赖性的Kv1.3和Kv1.5的阻断作用，探讨替米沙坦对此类通道的阻断可能具有的临床作用。方法使用双电极电压钳技术记录表达于非洲爪蟾卵母细胞的Kv1.3和Kv1.5钾通道电流，不同浓度灌流观察其对电流影响。结果（1）替米沙坦浓度依赖性的阻断Kv1.3通道，其阻断的IC50是2.05μmol／L。替米沙坦对Kv1.3电流的阻断具有电压依赖性。（2）替米沙坦浓度依赖性的阻断Kv1.5通道，其阻断的IC50是2.37μmol／L。替米沙坦对Kv1.5电流的阻断具有更显著的电压依赖性。结论替米沙坦阻断开放状态的Kv1.3可能是其发挥免疫调节和抗动脉粥样硬化作用的机制之一。替米沙坦对开放状态的Kv1.5钾通道的阻断可能是其减少心房颤动发生率的作用机制之一。

酮色林对表达在卵母细胞上的Kv1.3通道的抑制作用

目的:研究酮色林(KT)对表达在卵母细胞上的Kv1.3通道的作用,探讨其作为心血管药物的潜在免疫效应。方法:在非洲爪蟾卵母细胞表达Kv1.3cRNA通道基因,使用双电极电压钳技术记录通道电流,并用药物干预。结果:KT对Kv1.3通道产生浓度依赖性和可逆性抑制效应,其抑制钾通道50%时的浓度(IC50)为(14.3±1.4)μmol/L。在10μmol/L浓度下,KT降低Kv1.3电流幅值达(43.1±3.2)%;在20μmol/L时降低达(54.1±3.2)%。KT的主要效应是降低电流幅度,对激活曲线和失活曲线无显著影响。对稳态激活曲线,在对照条件下,50%最大激活时的膜电位(V1/2)和曲线斜率(k)分别是(-23.8±0.4)mV和(7.2±0.3);应用10μmol/LKT后,V1/2和k分别是(-22.6±0.5)mV和(8.0±0.4);应用20μmol/LKT后,V1/2和k分别是(-22.3±0.5)mV和(8.1±0.5)。对失活曲线,在对照条件下,V1/2和k分别是(-46.7±0.7)mV和(9.0±0.6);应用10μmol/LKT后,V1/2和k分别是(-48.4±0.7)mV和(8.9±0.7);应用20μmol/LKT后,V1/2和k分别是(-49.2±0.6)mV和(8.8±0.5)。结论:KT在临床相关浓度内,对表达在卵母细胞上的Kv1.3通道有显著的抑制作用。其可能通过抑制淋巴细胞Kv1.3通道,从而抑制淋巴细胞的激活,而在心血管疾病的治疗中有潜在的免疫调节作用。

阻断Kv1．3和KCa3．1钾通道对单核／巨噬细胞增殖和趋化功能的影响

电压门控钾通道Kv1.3和钙激活钾通道KCa3.1是单核/巨噬细胞上的两种钾通道。本文旨在研究阻断Kv1.3和KCa3.1钾通道对于单核/巨噬细胞增殖和趋化功能的影响。用趋化实验检测单核/巨噬细胞对Ly-6Chi单核细胞(炎症型单核细胞)的趋化作用,用CCK8试剂盒检测单核/巨噬细胞的增殖情况,用ELISA法检测趋化因子CCL7的浓度变化,用趋化实验检测趋化因子CCL2和CCL7对炎症型单核细胞的趋化作用。结果显示,结果显示,分别用KCa3.1特异性阻断剂TRAM-34和Kv1.3强效阻断剂Sh K阻断这两种钾离子通道后,单核/巨噬细胞对Ly-6Chi单核细胞的趋化能力降低;Sh K使单核/巨噬细胞增殖受到显著抑制。用TRAM-34和Sh K孵育过的Ly-6Chi单核细胞对CCL2的敏感性下降。以上结果提示,Kv1.3和KCa3.1钾通道在单核/巨噬细胞活化、增殖和趋化过程起重要作用,这两种钾通道有望成为自身免疫性疾病和急性心肌梗死后心肌重塑调节的靶点。

胺碘酮对Kv1．3通道电流的阻断和体外激活T淋巴细胞表型的影响研究

目的:研究胺碘酮对体外表达的Kv1.3通道的作用及对体外激活的CD3+CD4+和CD3+CD8+T淋巴细胞的作用,以阐明胺碘酮免疫调节的可能机制之一。方法:使用双电极电压钳技术记录表达于非洲爪蟾卵母细胞的Kv1.3钾通道电流,并观察胺碘酮对电流的影响。取分离的人外周血淋巴细胞分为正常未激活组、离子霉素和佛波酯激活组、激活后胺碘酮处理组,双抗体标记后流式细胞仪测定CD3+CD4+和CD3+CD8+相应比例。结果:胺碘酮可浓度依赖性阻断Kv1.3通道,阻断的半数有效浓度为3.43μmmol·L-1,阻断作用具有电压非依赖性;与正常未激活组比较,激活组CD3+CD4+/CD3+CD8+值无显著性差异(P>0.05)。与激活组比较,激活后胺碘酮处理组CD3+CD4+/CD3+CD8+值显著降低(P<0.01)。结论:胺碘酮阻断失活状态的Kv1.3通道,可能是其发挥调节免疫功能的机制之一。

新疆哈萨克族不同级别高血压患者外周血 T淋巴细胞电压依赖性钾通道的差异

目的探讨血压级别不同的新疆哈萨克族原发性高血压患者T淋巴细胞上电压依赖性钾通道(Kv1.3钾通道)表达的差异。方法从2018年1-8月,在新疆医科大学第一附属医院、乌鲁木齐市友谊医院和乌鲁木齐市达坂城区柴窝堡社区卫生服务中心选取初诊且未经治疗的哈萨克族高血压患者90例,其中高血压1级组30例,年龄(49.2±9.1)岁,高血压2级组30例,年龄(53.2±8.3)岁,高血压3级组30例,年龄(53.1±9.9)岁;血压正常的哈萨克族健康体检者30名(男女各15名)为对照组,年龄(49.0±9.8)岁。收集静脉血,分离T淋巴细胞,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和Western blot技术检测T淋巴细胞Kv1.3钾通道的基因和蛋白表达量及T淋巴细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α),白细胞介素6(IL-6)基因表达量。结果与对照组相比,高血压1、2、3级组的Kv1.3钾通道mRNA相对表达量逐渐增高[(1.55±0.54)、(1.75±0.72)、(3.12±1.40)比(1.08±0.49),P<0.05];与对照组相比,高血压1、2、3组的Kv1.3钾通道蛋白相对表达量逐渐增高[(0.17±0.04)、(0.18±0.06)、(0.40±0.17)比(0.11±0.04),P<0.05];与高血压1、2级组相比,高血压3级组Kv1.3钾通道mRNA及蛋白相对表达明显增加(P<0.05)。与对照组(0.42±0.21)相比,高血压2级组(1.82±0.71)、高血压3级组(2.33±1.02)TNF-αmRNA相对表达增高(P<0.05);与对照组(0.27±0.11)相比,高血压1级组(1.10±0.64)、高血压2级组(2.68±1.26)、高血压3级组(2.99±1.57)IL-6 mRNA相对表达增高(P<0.05)。结论 T淋巴细胞上的Kv1.3钾通道在新疆哈萨克族不同级别高血压患者中的表达都增加,其中在高血压3级患者当中的表达增加更为明显。