铁线透骨草中槲皮素的提取条件优化及含量测定

目的利用正交试验研究铁线透骨草中槲皮素的最佳提取条件,测定不同批次铁线透骨草中槲皮素的含量。方法设置L9(34)正交试验,安排提取温度、溶媒(甲醇)量、提取时间、加盐酸量4个因素,HPLC法检测;色谱柱:Hypersil C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:甲醇-0.1%乙酸(50∶50);流速:1.0mL·min-1;柱温:25℃;检测波长:375nm。结果最佳提取条件为:样品量约2.0g,加入35mL甲醇、10mL浓盐酸,浸泡0.5h,于40℃超声震荡提取40min。在此条件下测定的8个批次铁线透骨草中槲皮素的含量为0.109 9~0.880 3mg·g-1。结论提取方法效率高、时间短、温度低,是提取铁线透骨草中槲皮素较好的方法。不同批次铁线透骨草中槲皮素的含量相差较大。

东北地区铁线透骨草药材的HPLC指纹图谱研究

目的:建立铁线透骨草药材的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱。方法:采用HPLC法。色谱柱为Hedera ODS-2 C18,流动相为乙腈-0.5%磷酸溶液(梯度洗脱),流速为1.0 m L/min,检测波长为338 nm,柱温为30℃,进样量为20μL。以芦丁为参照物,测定10批铁线透骨草药材的HPLC图谱,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2004A版)进行共有峰确定和相似度评价。结果:10批铁线透骨草药材有16个共有峰,相似度均>0.9。经验证,10批药材样品HPLC图谱与对照指纹图谱具有较好的一致性。结论:所建指纹图谱可为东北地区铁线透骨草药材的鉴别和质量评价提供参考。

基于分子对接技术研究铁线透骨草提取物通过Ca2+/NFATc1信号通路对骨质疏松性骨折大鼠骨折愈合的影响

目的基于分子对接技术研究铁线透骨草提取物通过Ca2+/活化T细胞核因子(NFAT)c1信号通路对骨质疏松性骨折大鼠骨折愈合的影响。方法40只SPF级SD雌性大鼠随机分为对照组、模型组、低剂量组、高剂量组各10只,除对照组外均构建骨质疏松大鼠模型,对所有大鼠行骨折造模,造模结束后低、高剂量组分别给予不同剂量铁线透骨草提取液灌胃(100、400 mg/kg),对照组及模型组均给予生理盐水溶液灌胃(5 ml/kg)。给药结束后,观察大鼠骨折端愈合情况并进行评分;检测骨密度水平;苏木素-伊红(HE)染色观察骨痂组织病理结构;采用酶联免疫吸附试验试剂盒检测血清Ca、白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;取骨折部位肌肉组织采用Western印迹检测磷酸化(p)-NFATc1蛋白表达。对铁线透骨草提取物中所含活性成分收集与筛选,并对有效成分-靶点进行分子对接。结果相较于对照组,模型组骨质疏松骨折愈合评分、骨密度明显降低,Ca、TNF-α、IL-6水平及p-NFATc1蛋白表达均明显升高(P<0.05);而经不同剂量铁线透骨草提取物给药后,骨折愈合评分、骨密度均明显提高,Ca、TNF-α、IL-6水平及p-NFATc1蛋白表达明显降低(P<0.05)。铁线透骨草提取物中主要活性成分为谷甾醇(sitosterol)、山奈酚(kaempferol)、槲皮素(quercetin),分子对接结果显示与Ca2+靶点对接较好的成分是sitosterol,结合能为-6.24,与NFATc1靶点对接较好的成分是sitosterol,结合能为-6.81。结论铁线透骨草提取物能够显著改善骨质疏松大鼠骨折的愈合情况,并且可能通过调节Ca2+/NFATc1通路,进一步影响炎症反应。

基于HPLC多成分、化学计量学联合熵权TOPSIS法的铁线透骨草综合质量评价

目的采用HPLC多指标成分、化学计量学联合熵权优劣解距离(EW-TOPSIS)法对铁线透骨草质量进行综合评价。方法收集全国7省18批铁线透骨草样品,采用HPLC法同时测定铁线透骨草中木犀草苷、芦丁、金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素、木犀草素、芹菜素和山柰酚含量,运用化学计量学方法对含量测定结果进行综合分析,分析影响铁线透骨草产品质量的主要潜在标志物,并对不同产地铁线透骨草质量进行评价。结果8个成分分别在一定范围内线性关系良好(r≥0.9991),准确度良好(RSD<2.0%);化学计量学方法显示,18批铁线透骨草可聚为3类,呈现一定的产区差异;芦丁、金丝桃苷和木犀草苷是影响铁线透骨草化学成分差异的标志性成分;EW-TOPSIS法分析结果显示,内蒙古和辽宁地区铁线透骨草质量最优,河北、山西和陕西产品质量次之,青海和甘肃地区产品质量较差。结论所建立的HPLC法操作便捷、结果准确,结合化学计量学及EW-TOPSIS方法可用于铁线透骨草质量的综合评价。