兔多杀性巴氏杆菌铁调节外膜蛋白的小鼠免疫效果分析

【目的】本试验以小鼠为动物模型,比较了兔多杀性巴氏杆菌铁调节外膜蛋白(IROMPs)的免疫原性及分析交叉免疫保护效果。【方法】分别以正常培养基和限铁培养基增殖兔多杀性巴氏杆菌C51-12和C51-3,采用Sarcosyl沉淀—超离法提取IROMPs和OMPs,并用SDS-PAGE比较两株之间的差异,同时用正常培养基增殖该菌制备灭活全菌抗原。免疫原性分析,将清洁级小鼠20只随机分成4组,5只/组,以C51-12株的全菌、IROMPs和OMPs作抗原分别免疫,采用间接ELISA检测免疫小鼠的相应抗体动态变化;免疫保护试验,分别采集经4次免疫后小鼠的抗血清,作1﹕10稀释腹腔注射小鼠,每组6只,18h后用C51-12和C51-3分别攻毒,比较上述抗血清所提供的交叉免疫保护力。【结果】前21d,抗体滴度以全菌免疫组抗体滴度较高,随后IROMPs免疫组反超。最终抗体滴度:IROMPs组>OMPs组>全菌组。被动免疫时全菌抗血清和OMPs抗血清能够抵抗C51-12株攻毒,但对C51-3株提供的保护力较差;C51-12株攻毒,IROMPs抗血清组能够全部保护,C51-3株攻毒,5/6获得保护。【结论】IROMPs在小鼠动物模型中具有一定的交叉保护力,为进一步研究交叉保护因子奠定基础。

兔多杀性巴氏杆菌铁调节外膜蛋白(IROMPs)抗原交叉性试验

分别以含铁培养基和限铁培养基培养 4株兔多杀性巴氏杆菌JS、C5 1 2、C5 1 3及C5 1 17株 ,用刚果红结合试验初步分析铁调节外膜蛋白 (IROMPs)表达情况 ,同时破碎菌体 ,提取外膜蛋白 ,经SDS PAGE比较这 4株细菌在正常培养条件、富铁培养条件及限铁培养条件时外膜蛋白的表达差异 ,结果表明 :限铁培养时 ,细菌表现出对刚果红染料较强结合性 ,且这 4株巴氏杆菌均表达数种高分子量的IROMPs,主要有 14 7kD、135kD、99kD、94kD、82kD及 72kD蛋白带 ,4株之间存在一定的差异 ,而正常或富铁条件培养时均不表达上述条带。免疫印迹结果显示 ,正常条件培养的全菌 (C5 1 17株 )抗血清中不含有针对IROMPs的抗体 ,限铁培养的C5 1 17株IROMPs可诱导机体产生相应抗体 ,并且能与JS、C5 1 2及C5 1 3株的IROMPs发生抗原交叉性反应。同时用间接ELISA检测C5 1 17株 3种IROMP(99kD、94kD和 87 6kD)的交叉抗体效价 ,结果这 3种抗血清均与其它 3株的产生较高的交叉抗体滴度。

副猪嗜血杆菌铁调节外膜蛋白的免疫原性研究

副猪嗜血杆菌感染已对世界养猪业造成巨大损失,作为一新发的细菌传染病,目前对其致病及免疫机理研究较少,故应用蛋白质组学及反向疫苗学技术有助于开发其新型疫苗.通过研究,鉴定出副猪嗜血杆菌的3种铁调节外膜蛋白IROMP1,IROMP B和HbpB.选择这3种蛋白进行免疫原性和攻毒保护试验研究,结果表明其中的HbpB能诱导明显的混合抗体(IgG1和IgG2a)应答,其高免血清具有明显的调理吞噬活性,HbpB能在小鼠攻毒试验中提供90%保护率,因此HbpB可成为开发副猪嗜血杆菌亚单位疫苗的候选免疫原性蛋白.

鳗弧菌L-18株的限铁条件和铁调节外膜蛋白的免疫效果

利用Western-blot技术,对鳗弧菌L-18株的OMPs和IROMPs的免疫反应性进行了分析,并通过免疫牙鲆比较二者免疫保护力的差异,以期从IROMPs方向探索开发鳗弧菌新型鱼用疫苗,并为研究其免疫原理提供重要的科学依据。结果表明,培养基中加入不同浓度的联铁剂,鳗弧菌L-18株的生长和铁载体的表达出现规律性变化,其中加入100～130μmol·L^-12,2′-联吡啶为最适合限铁条件,此时铁载体的表达量最高且生长受抑制程度较小。在此条件下,菌株表达出74.3 ku和77.4 ku的IROMPs,其中77.4 ku蛋白具有免疫反应性,为重要抗原。用全菌灭活疫苗、OMPs、IROMPs分别腹腔注射免疫牙鲆7周后攻毒,IROMPs疫苗的相对免疫保护力达到75.9%,远高于OMPs疫苗的51.8%。相对于OMPs,IROMPs的抗体效价显著提高,接近全菌疫苗组的水平,而血清杀菌活力没有显著变化。