铕标记抗癌胚抗原单克隆抗体C_（17）的研究和应用

用合成的Ｎ′－（对－异硫氰基苄基）－二乙三胺－Ｎ￣１，Ｎ￣２，Ｎ￣３，Ｎ￣３－四乙酸铕钠为螫合剂。用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０凝胶柱层析分离标记Ｃ＿１７和过量试剂．分部收集的层析物的光密度图和荧光强度图完全一致。蛋白峰处两管标记Ｃ＿１７的比活性分别为５．２和８．９Ｅｕ￣（３＋）离子每Ｃ＿１７分子，而且Ｃ＿１７的标记回收率为６４％。标国家自然科学基金资助记Ｃ＿１７至少在６个月内是稳定的。用铕标记物得到的时间分辨免疫荧光分析的标准曲线具有良好线性和斜率，表明标记物免疫活性良好，而且已用于血清ＣＥＡ分析。

在时间分辨荧光免疫分析中铕标记技术的初步探讨

本文介绍了稀土元素标记白蛋白和时间分辨荧光测定。采用二步标记法,借助二乙基三胺五醋酸酐将Eu^(3+)标记到白蛋白抗原上的简便方法。用LKB的时间分辨荧光计和紫外分光光度计测得标记率为10Eu^(3+)/白蛋白分子,为建立白蛋白的时间分辨荧光免疫分析法打下基础。

铕标记人血清白蛋白的研究

铕标记人血清白蛋白的研究赵启仁，林汉，张福华，刘洁在时间分辨荧光免疫分析（ＴｒＦＩＡ）技术中，制备比活性高、免疫活性强的Ｅｕ标记物是关键之一．这需要用具有双功能基团的螯合剂将Ｅｕ３＋和抗原连接起来．已有的螯合剂有：１-（对-重氮苯基）-ＥＤＴＡ、氨基苯?..

4,7-(氯磺酸基苯基)-1,10-菲啰啉-2,9-二羧酸-铕标记甲胎蛋白抗体

在合成BCPDA基础上 ,对甲胎蛋白抗体与BCPDA连接及与铕离子螯合条件进行了研究。BCPDA与甲胎蛋白抗体反应后 ,分离纯化最佳淋洗液为pH 9.1的 0 .1mol/L碳酸盐缓冲溶液 ,BCPDA用量为甲胎蛋白抗体量 (mol)的 12 0～ 16 0倍 ;反应时间为 30min。讨论了Eu3 + BCPDA AFP抗体螯合物的荧光光谱 ,最佳温育时间为6 0min ,体系pH值为 7.8的Tris HCl溶液。当Eu3 + 浓度为 10 -6mol/L时 ,BCPDA的检出限为 4 .3× 10 -11mol/L。

蛋白质的铕标记技术

蛋白质的Eu^(3+)标记是TR-FIA 法的关键技术之一。本文综合论述了螫合剂及其用量、抗原和抗体的标记方法、标记率的计算、标记物的使用和保存等问题。

铕标记抗原、激光时间分辨荧光免疫分析尿中白蛋白

放射免疫分析法(RIA)将免疫反应的特效性与放射性测量的灵敏性相结合,是当今最广泛采用的方法之一。但RIA药盒使用寿命受放射性同位素半衰期的限制以及操作放射性对人体和环境可能导致某些危害,促使人们力图改善以非放射性物质标记的其它免疫分析法的灵敏度。1979年Soini和Hemmila提出的时间分辨荧光免疫分析(TR—FIA),以稀土螯合物作标记物连接到抗体或抗原上,免疫反应完成后,用时间分辨技术测荧光,很容易将稀土螯合物的荧光与背景荧光压分开。由于TR—FIA能达到甚至超过RIA灵敏度,标记物没有辐照分解之患,测定动态范围广,方法简便快速,

铕螯合剂 DTTAEuNa 标记流行性出血热单克隆抗体的实验研究

用Ｎ′（对异硫氰基苄基）二乙三胺Ｎ１，Ｎ２，Ｎ３四乙酸铕钠（ＤＴＴＡＥｕＮａ）作为螯合剂，标记不同蛋白浓度的流行性出血热单克隆抗体（ＥＨＦＭｃＡｂ），经ＳｅｐｈａｋｅｘＧ５０凝胶柱分离标记的单抗分子，通过对层析液的紫外吸收峰处的蛋白光密度，时间分辨荧光强度以及免疫活性测定表明：二批Ｅｕ标记单抗的比活性分别为７８和１４７个Ｅｕ３＋／ＥＨＦＭｃＡｂ，标记回收率分别为４１％和４２％，标记物的免疫活性良好。

羊抗兔IgG的铕标记及其应用效果

本文报道羊抗兔IgG铕(Eu)标记条件及其免疫分析效果的研究结果。最适标记条件是PH值9.0～10.0,螯合剂用量为80～320倍,反应时间12～24 h,标记比是11.19～15.30。标记物用于hAFP及兔抗hAFP IgG固相包被量、兔抗hSOD-1抗血清稀释度、竞争法分析hAFP和间接法分析兔抗hAFP IgG的检测,结果均较为满意。

固相时间分辨荧光免疫标记技术研究

通过固相时间分辨荧光免疫分析双功能螯合剂 4 ,7 二氯磺基苯 1,10菲罗啉 2 ,9 二羧酸标记抗 乙型肝炎表面抗体 (HBsAb)IgG实验 ,对于BCPDA标记蛋白质的方法进行了研究。结果表明 :BCPDA在相对温和条件下能与蛋白质反应 ,反应后蛋白质的相对生物活性高于 78% ,标记比为 2 3～ 5 5 ,蛋白回收率达6 0 %以上。在一定条件下与铕离子形成稳定的BCPDA Eu3 + (HBsAb)IgG标记物。利用自建的分析方法 ,测定了标记过程的有关参数。并对标记物的某些光学特性进行了研究。

稀土螯合物BCPDA-Eu^(3+)标记蛋白质研究

通过自制的双功能螯合剂 4 ,7 二氯磺基苯 1,10啡啉 2 ,9二羧酸 (BCPDA)标记牛血清白蛋白(BSA)实验 ,对于BCPDA标记蛋白质的条件进行研究。结果表明 :BCPDA在温和的条件下能与蛋白质反应 ,并在一定条件下与铕离子形成稳定的BSA BCPDA Eu3+ 标记物。利用自建的分析方法 ,测定了标记过程的有关参数。并对标记物的某些光学特性进行了研究。

基于Eu^3＋标记的喹乙醇TRFIA研究

为了评价Eu^(3+)免疫探讨标记喹乙醇克隆抗体的效果,以环化二乙烯三胺五醋酸酐(cy DTPA)为螯合剂,将Eu^(3+)偶联到喹乙醇单克隆抗体(OLA-m Ab)上,制备喹乙醇铕标抗体(Eu^(3+)-OLA-m Ab),并在此基础上进行TRFIA反应条件的优化。结果表明,优化后的直接竞争时间分辨荧光免疫分析(TRFIR)反应条件为包被抗原(OLA-OVA)浓度1.2μg·m L-1、铕标抗体浓度2.0μg·m L-1、CBS浓度0.05 mol·L-1、PBS稀释液0.01 mol·L-1、p H值7.0,采用含5%甲醇的PBS配制喹乙醇标样。反应条件筛选优化后建立标准曲线,其IC50和IC10浓度分别为9.29、0.66 ng·m L-1。以饲料为样品进行添加回收率试验,其回收率处于84.80%~113.60%之间,变异系数小于14%。本研究建立的TRFIA方法具有灵敏度高、稳定性好等特点,为下一步研发喹乙醇TRFIA快速检测试剂盒奠定了基础。

稀土标记轮状病毒抗体的研究

时间分辨荧光免疫分析技术是现代高灵敏度免疫研究的热点领域,适合于生命活性物质的痕量检测。以4,7-二氯磺酰基苯基-1,10-菲咯啉-2,9-二羧酸(BCPDA)作为双功能螯合剂与稀土铕离子标记人轮状病毒抗体RV(Ab),研究其最佳实验条件;根据解离增强原理,采用时间分辨荧光免疫分析技术对Eu3+-BCPDA-RV(Ab)的荧光寿命、荧光光谱等进行了测定。

时间分辨荧光免疫测定技术及其初步实验研究

通过建立HBsAg检测方法,对时间分辨荧光免疫分析技术应用作了实验研究。采用McAb包被微量反应孔条,以二乙烯三胺五醋酸酐两步法将铕(Eu^(3+))和McAb结合制备示踪物。实验结果表明:方法简便,灵敏度较酶联法高,标记物有效期长,无污染环境等优点。

时间分辨荧光免疫法测定血清AFP的方法学评价

对时间分辨荧光免疫法(TRFIA)测定血清AFP的方法学予以评价。评价TRFIA法测定AFP的线性范 围、灵敏度、精密度、回收率及与ELISA法和RIA法的相关性。结果显示:AFP线性范围1-1000 U／mL,检测 下限≤0．1 U／mL,批内及批间变异系数分别为2．3％、5．3％,回收率97．85％,与ELISA法及RIA法高度相关, r值分别为0．982与0．991。正常血清AFP参考值0．8-10．5 U／mL。结论:TRFIA测定AFP线性范围宽,稳 定性好,灵敏度与准确度高,无放射性污染,是当前免疫分析中有发展前途的一项超微量检测技术。

总免疫球蛋白E时间分辨荧光免疫分析法的建立与评价

目的：应用时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）建立总免疫球蛋白E（TIgE）的定量测定方法。方法采用双抗体夹心法建立TIgE TRFIA ，并对其进行方法学评价。结果建立的 TIgE TRFIA批内、批间变异系数（CV）分别为1．59％～1．68％和5．23％～7．33％；检测低限为0．25 IU/mL ；线性范围为1．47～1510．00 IU/mL ；其准确性在允许偏差±10％内；回收率为97．00％～106．75％；交叉反应试验和干扰试验均能满足检测要求；检测TIgE达15000 IU/mL时仍未见 HOOK效应；与欧蒙公司的ELISA法检测40份临床样本结果相关性良好（r＝0．9992，P＜0．01），2种方法间预期偏差在允许范围（±12．5％）内；检测健康成人样本TIgE的参考值为100 IU/mL。结论建立的TIgE TRFIA具有精密度好，灵敏度高，线性范围宽，准确度高，特异性强等优点，能满足临床需要。

时间分辨荧光分析测定细胞活性和破膜法实验研究

采用Eu3+-DTPA标记L-929株靶细胞，经时间分辨荧光仪测定，建立一种崭新的时间分辨荧光分析法来测定细胞活性，此法具有灵敏度高，有效期长，不污染环境等优点。

时间分辨荧光免疫分析法测定沙丁胺醇的含量

采用直接竞争的方式,游离SAL和固相SAL-OVA包被原共同竞争有限的铕标SAL单抗,初步建立SAL时间分辨免疫分析方法。研究发现,优化的TRFIA半抑制量IC_(50)为1.6 ng/mL,检测范围为0.39~12.77ng/mL,最低检测限为0.136 ng/mL。