黄连解毒汤联合阿奇霉素对铜绿假单胞菌的体外抑菌效果

目的探讨黄连解毒汤联合阿奇霉素对铜绿假单胞菌的体外抑菌效果。方法以铜绿假单胞菌标准质控菌株ATCC27853及开封市第二中医院临床分离的98株铜绿假单胞菌(包括非黏液型32例、黏液型66例)为研究对象,采用肉汤稀释法测量黄连解毒汤、阿奇霉素的最小抑菌浓度(MIC),并以棋盘法作联合测试,通过计算部分抑菌浓度指数(FICI)明确相互作用关系,应用结晶紫染色法评估生物膜抑制的效果,再采用实时荧光定量PCR测定相关密度感应基因的表达。结果铜绿假单胞菌标准质控菌株ATCC 27853、临床黏液型及非黏液型经阿奇霉素、黄连解毒汤单一及联合处理后,整体MIC值呈下降趋势,且FICI值以0~1之间居多;铜绿假单胞菌标准质控菌株ATCC 27853、临床黏液型及非黏液型经阿奇霉素、黄连解毒汤单一及联合处理后,经F分析显示,4组OD值比较,差异有统计学意义(P<0.05),且阿奇霉素组、黄连解毒汤组及联合组OD值均低于空白对照组,不同处理组别内铜绿假单胞菌非黏液型OD值均高于黏液型(P<0.05);铜绿假单胞菌ATCC 27853临床黏液型及非黏液型于阿奇霉素、黄连解毒汤在抑制浓度下单一及联合处理下,LasB基因的mRNA相对表达水平随浓度升高呈下降趋势,但LasR基因、rhIR基因的mRNA相对表达水平不随浓度升高呈线性变化。结论黄连解毒汤可通过抑制生物膜生长用以增强铜绿假单胞菌体外活性,与阿奇霉素发挥协同或相加作用,且非黏液型强铜绿假单胞菌耐药性高于黏液型。此外,黄连解毒汤联合阿奇霉素可能对铜绿假单胞菌密度感应基因表达产生影响。

耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌毒力基因的表达与耐药性研究

目的探讨临床检测的耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌中Ⅲ型分泌系统(T3SS)4种毒力基因(exoT、exoY、exoS、exoU)的表达情况及其对抗菌药物的耐药性。方法收集安徽医科大学附属安庆第一人民医院2022-2023年临床检测的各种来源的耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌87株,采用Vitek2-Compact仪器对菌株进行鉴定,并且进行药敏试验,采用聚合酶链反应对T3SS的4种毒力基因(exoT、exoY、exoS、exoU)进行检测,比较不同毒力基因型组合与抗菌药物耐药性之间的关系。结果87株耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌表达exoT与exoY基因的阳性率均为100.00%(87/87),exoS基因阳性率为77.01%(67/87),exoU基因阳性率为27.59%(24/87)。共检出4种类型的T3SS毒力基因型组合,以exoT+/exoY+/exoS+/exoU-基因型组合为主,阳性率为71.26%(62/87),其次是exoT+/exoY+/exoS-/exoU+基因型组合,阳性率为21.84%(19/87)。药敏试验结果显示,exoT+/exoY+/exoS-/exoU+基因型组合对大部分常见抗菌药物,如阿米卡星、妥布霉素、头孢吡肟、头孢他啶、头孢哌酮/舒巴坦、环丙沙星、哌拉西林的耐药率均明显高于exoT+/exoY+/exoS+/exoU-基因型组合,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论该院检出的耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌携带表达的T3SS毒力基因主要以exoT+/exoY+/exoS+/exoU-基因型组合为主,不同毒力基因型组合的耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌对常见抗菌药物的耐药性存在差异。

基于网络药理学及细胞实验探讨扶正透邪解毒方治疗铜绿假单胞菌肺炎作用机制

目的:筛选扶正透邪解毒方抑制铜绿假单胞菌肺炎的中药活性化合物,并通过体外细胞实验研究扶正透邪解毒方治疗铜绿假单胞菌肺炎的作用机制。方法:在GeneCard、OMIM等数据库筛选铜绿假单胞菌肺炎疾病靶点;明确扶正透邪解毒方活性成分与铜绿假单胞菌肺炎的共同潜在靶标;利用String数据库和Cytoscape软件构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,利用DAVID数据库进行基因本体(GO)功能及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;体外细胞实验中采用CD4^(+)T细胞与多重耐药铜绿假单胞菌共培养,以扶正透邪解毒方含药血清干预后,采用RT-PCR检测CD4^(+)T细胞中肿瘤蛋白P53(TP53)mRNA、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)mRNA、白介素-6(IL-6)mRNA、白介素-10(IL-10)mRNA、白介素-1β(IL-1β)mRNA、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达,采用Western blotting检测CD4^(+)T细胞中IL-6、TNF-α、AKT1、IL-1β、TP53、IL-10蛋白表达。结果:筛选出226种潜在活性成分及93个潜在靶点;TP53、AKT1、IL-6、IL-10、IL-1β、TNF-α等是扶正透邪解毒方治疗铜绿假单胞菌肺炎的关键靶点;扶正透邪解毒方主要通过炎症因子、趋化因子、免疫调控等信号通路来发挥治疗铜绿假单胞菌肺炎的作用。扶正透邪解毒方含药血清能降低CD4^(+)T细胞IL-6 mRNA、TNF-αmRNA、AKT1 mRNA、IL-1βmRNA表达(P<0.01),促进CD4+T细胞TP53 mRNA、IL-10 mRNA表达(P<0.01);扶正透邪解毒方含药血清能降低CD4^(+)T细胞IL-6、TNF-α、AKT1、IL-1β蛋白表达(P<0.05),促进CD4^(+)T细胞TP53、IL-10蛋白表达(P<0.05)。结论:扶正透邪解毒方可能是通过调控TNF-α、AKT1、TP53、IL-10等关键因子的表达抑制肺部感染而治疗铜绿假单胞菌肺炎。

羊铜绿假单胞菌感染的分离鉴定及毒力性和耐药性分析

铜绿假单胞菌可产生多种致病因子损害机体组织,给养殖业带来重大损失。目前,铜绿假单胞菌感染动物的报道很多,但有关羊感染该菌的相关资料与调查研究较少。本试验采集保定地区病羊的组织器官,通过对铜绿假单胞菌的分离、培养和鉴定,检测致病性、耐药性、耐药基因和毒力基因的携带情况,以期为羊源铜绿假单胞菌感染的防控和治疗提供依据。1材料与方法1.1病料来源及试验动物病料来自于保定市某羊场。2×Taq PCR MasterMix、DNA Marker购自北京天根生化公司。16SrDNA通用引物购自生工生物工程(上海)公司。6~7周龄SPF级Balb/c小鼠,体重20~24克,购自河北医科大学实验动物中心。

黏液型铜绿假单胞菌76株对常用抗菌药耐药性检测及毒力基因分布

目的探讨76株黏液型铜绿假单胞菌(PA)对常用抗菌药物耐药性检测及毒力基因分布。方法76株黏液型PA均分离于2017年1月至2021年12月浙江省宁海县中医医院住院的患者标本,全自动微生物分析仪鉴定菌株,采用纸片扩散法检测黏液型PA菌株对亚胺培南(IPM)、阿米卡星(AK)、妥布霉素(TOB)、庆大霉素(CN)、头孢吡肟(FEP)、哌拉西林/他唑巴坦(TZP)、左氧氟沙星(LEV)、头孢他啶(CAZ)、环丙沙星(CIP)和美罗培南(MEM)的敏感度,聚合酶链反应(PCR)法检测菌株Ⅲ型分泌系统(T3SS)效应蛋白基因exoS、exoT、exoU、exoY的分布。分析76株黏液型PA的来源及对常用抗菌药物耐药性分析、T3SS毒力基因的分布特征;比较ExoT^(+)/ExoY^(+)/ExoS^(+)/ExoU^(-)及ExoT^(+)/ExoY^(+)/ExoS^(-)/ExoU^(+)基因型与常用抗菌药物的关系。结果76株黏液型PA来源以痰液最多(68%);黏液型PA对AK、TOB、CN、TZP、LEV、CAZ的耐药率较低,对IPM、MEM、FEP和CIP的耐药率较高;黏液型PA在48 h对常见抗菌药物的耐药率为7%~14%,与24 h药敏结果(0~9%)差异有统计学意义(P<0.05);PA分离株中ExoT毒力基因的阳性率最高(100%),其次为ExoY(92%)、ExoS(70%),ExoU(26%)最低;T3SS毒力基因分型中,ExoT^(+)/ExoY^(+)/ExoS^(+)/ExoU^(-)(67%)和ExoT^(+)/ExoY^(+)/ExoS^(-)/ExoU^(+)占比最高(22%);ExoT^(+)/ExoY^(+)/ExoS^(+)/ExoU^(-)基因型对LEV、IPM、CIP的耐药率分别为37%、22%和41%,低于ExoT^(+)/ExoY^(+)/ExoS^(-)/ExoU^(+)基因型的100%、76%和100%(P<0.05);ExoT^(+)/ExoY^(+)/ExoS^(+)/ExoU^(-)基因型对FEP、TZP的耐药率为84%、78%,高于ExoT^(+)/ExoY^(+)/ExoS^(-)/ExoU^(+)基因型的35%、41%(P<0.05)。结论黏液型PA对碳青霉烯类抗菌药物IPM、MEM耐药率较高,T3SS毒力基因ExoT、ExoY在黏液型PA中普遍存在,不同毒力基因型组合与黏液型PA对常见抗菌药物的耐药率有关。

咖啡酸对铜绿假单胞菌群体感应抑制探究

世界范围内,病原菌对抗生素的耐药性日趋严峻,但药物研发效率日趋缓慢,迫切需要新的抗感染药物或药物作用靶点。铜绿假单胞菌群体感应系统(quorum sensing,QS)与其致病性密切相关,寻找靶向QS系统的抑制剂是新型抗感染药物新策略。前期研究发现,以咖啡酸为主要成分的大血藤提取物对铜绿假单胞菌的群体感应具有转录抑制作用。进一步探究了咖啡酸对铜绿假单胞菌的QS系统相关基因的表达和毒性因子产生的抑制作用;通过分子对接结合缺失突变体感染白菜模型检测,探究了咖啡酸的作用靶点。结果表明:咖啡酸显著抑制铜绿假单胞菌QS系统相关基因rhlR、rhlI、pqsA、pqsR及其调控的毒性因子的编码基因如phzA 1、lasB等,进一步抑制该类毒性因子的产生和降低了细菌的运动性和生物被膜,最终降低了铜绿假单胞菌的感染性,其可能通过靶向pqs系统发挥其QS抑制作用。

铜绿假单胞菌前噬菌体的生物信息学分析

目的预测分析83株铜绿假单胞菌中前噬菌体携带情况和分布特征,以及鉴定前噬菌体编码的抗生素耐药基因和毒力因子。方法采用Phaster在线工具对菌株基因组序列进行前噬菌体预测,采用Cadr数据库和Vfdb数据库进行耐药基因和毒力基因注释分析。结果83株铜绿假单胞菌中共检测出601条前噬菌体序列,其中完整型304条,不完整型161条,可疑型136条,平均每株铜绿假单胞菌中至少存在3条完整的前噬菌体。平均每株铜绿假单胞菌中携带的所有前噬菌体占其基因组长度比例约为2%~4%。61条前噬菌体预测到125个耐药基因,分别来自23个不同家族,产生7种耐药机制。356条前噬菌体共编码545个毒力基因,归类为119种毒力基因,编码78种相关毒力因子,平均每个前噬菌体携带1~2个毒力因子编码基因,少数前噬菌体携带3条及以上。毒力因子的宿主来源除了铜绿假单胞菌外,百日咳杆菌、微黄分枝杆菌、鸟分枝杆菌及其亚种、肺炎克雷伯菌及其亚种也占有较高来源比例。结论前噬菌体在铜绿假单胞菌中分布广泛且携带多种耐药和毒力基因,对铜绿假单胞菌耐药性获得、传播和致病性演变具有重要影响。

S355J0W钢对脱硫弧菌和铜绿假单胞菌腐蚀的抑制机制

微生物腐蚀(MIC)严重威胁着海洋工程设施的可靠性和安全性,制约着海洋经济的发展。钢中添加合金元素是进行海洋MIC防护的重要策略之一。采用表面分析、失重和电化学测试等方法,以EH36钢为对照,探究由多合金元素组成的S355J0W钢对典型海洋腐蚀性微生物(脱硫弧菌和铜绿假单胞菌)腐蚀的抑制机制。结果表明,S355J0W钢具有更优的耐MIC性能。在含脱硫弧菌的厌氧培养基和含铜绿假单胞菌的有氧培养基中,S355J0W钢的MIC速率均明显低于EH36钢。在脱硫弧菌培养基中,S355J0W钢的失重和最大点蚀深度是EH36钢的56%、70%。在铜绿假单胞菌培养基中,S355J0W钢的失重和最大点蚀深度是EH36钢的54%、47%。相较于EH36钢,S355J0W钢含有Cr、Ni、Nb元素和更多的Cu元素。一方面,S355J0W钢中的合金元素使其表面的产物膜更具有保护性(更高的膜电阻值);另一方面,合金元素导致S355J0W钢表面固着的脱硫弧菌和铜绿假单胞菌数量仅是EH36钢的22%、24%。更少的固着细菌数量直接导致更低的胞外电子传递速率,从而降低S355J0W钢的MIC速率。添加耐蚀和抑菌合金元素能够显著提高材料的耐MIC性能,研究结果为海洋MIC机理的探究提供了理论依据,为海洋结构钢MIC防护方法的设计与开发提供了新见解。

铜绿假单胞菌外毒素A全基因的克隆与分泌性表达

利用PCR技术从铜绿假单胞菌PA103株DNA中扩增到铜绿假单胞菌外毒素A(EPA)全基因,选择合适位点插入pBV221 PLPR启动子下游,构建分泌性表达载体;转化宿主E.coliDH5α、JM109后,热诱导表达;SDS-PAGE分析表明表达产物占菌体总蛋白量的17%左右,分子量69kD左右;分离细胞组分蛋白发现仅有少量重组蛋白以成熟毒素形式分泌到宿主菌的周质间隙,并能检测到Vero细胞毒活性,其余大部分以包涵体形式存在。免疫印迹检测显示,表达产物与兔抗EPA多抗有特异性反应。此项工作为重组EPA的研制建立了有用的技术方法。

复方黄柏液涂剂抑制铜绿假单胞菌毒力因子表达的作用机制

目的:基于网络药理学及体外实验探讨复方黄柏液涂剂抑制铜绿假单胞菌(PAO1)毒力因子表达的作用机制。方法:通过文献检索收集复方黄柏液的有效化学成分,利用STITCH和Pharmmapper数据库进行预测,获得药物抑制PAO1毒力相关的潜在作用靶点,Cytoscape3.7.2构建“中药-成分-靶点”网络;联合STRING数据库构建蛋白质相互作用(PPI)网络图并筛选出核心靶点;利用DAVID对潜在作用靶点进行生物功能与通路富集分析;基于网络分析结果,选择PAO1主要致病毒力因子(碱性蛋白酶、绿脓菌素、细菌生物膜)进行检测,验证复方黄柏液对PAO1毒力因子的影响。结果:复方黄柏液中共筛选出62个抗PAO1的有效成分,潜在作用靶点31个,其中Cynaroside、forsythenside A、Lonijaposide E等为复方黄柏液的主要成分。PPI网络分析得到phnW、lysC、aprA、murC、glmS、gbuA、eta、pvdA、adk、ftsZ共10个核心靶点,KEGG通路注释分析显示与D-丙氨酸代谢、氨基糖和核苷酸糖代谢、代谢途径、精氨酸和脯氨酸代谢和万古霉素耐药信号通路有关。体外实验验证表明,1/2~1/8原液浓度的复方黄柏液对PAO1生长均无影响;与空白对照组比较,1/4~1/8原液浓度复方黄柏液可有效抑制碱性蛋白酶,差异有统计学意义(P<0.05),1/4~1/16浓度复方黄柏液可有效抑制绿脓菌素的产生和成熟期的细菌生物膜,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:复方黄柏液可抑制PAO1多种致病毒力因子,从而治疗临床铜绿假单胞菌所致感染。

亚抑菌浓度的洋葱提取液对铜绿假单胞菌群体感应的抑制作用

目的:为研究洋葱提取液对铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa,PA)群体感应(quorum sensing,Qs)调控性状的抑制作用。方法:首先测定洋葱提取液对PA的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),然后将不同亚抑菌浓度(SUB-MIC)的洋葱提取液与PA共培养,通过分析其对PA的生长、生物膜的形成、胞外蛋白酶和绿脓菌素的产生及运动能力的影响,研究洋葱提取液对PA菌QS系统的抑制作用。结果:SUB-MIC浓度的洋葱提取液在不影响细菌生长的情况下,能抑制PA生物膜的形成,抑制蛋白酶和绿脓菌素的产生,限制细菌的运动,除绿脓菌素外,均呈现浓度依赖性。结论:洋葱提取液对PA菌QS系统调控的细菌生物学性状有抑制作用,有望成为新型的群体感应抑制剂(quorum sensing inhibitor,QSI)。

铜绿假单胞菌耐药机制及治疗进展概况

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是一种机会性病原菌,其对抗生素的耐药性随抗生素使用的增加而增强。新型抗生素研发面临资金和技术难度,使其进度滞后于耐药性的增长。铜绿耐药机制涉及内源性、获得性和适应性因素。现有研究正探索噬菌体疗法、益生菌疗法和纳米技术等非传统治疗策略来应对此问题。本文回顾了铜绿假单胞菌的十数篇文献资料,以期能为临床工作与研究提供一些参考。

芪归银方联合左氧氟沙星对铜绿假单胞菌体外抑菌及血清药理学试验

目的基于中药提取物和含药血清两个层次研究芪归银方(Qiguiyin decoction,QGYD)对铜绿假单胞菌(seudomonas aeruginosa,PA)标准菌株和耐药菌株的抑制作用及OGYD增强左氧氟沙星(levofloxacin,LEV)抗菌活性的作用,为中药联合抗生素防治耐药菌的临床用药提供参考。方法采用肉汤稀释法测定LEV、QGYD对PA的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC);微量棋盘稀释法测定两药联合的MIC,计算抑菌浓度指数(fractional inhibitory concentration index,FICI);制备LEV组、QGYD组、LEV+QGYD组和空白对照组血清,用MHB肉汤将各组血清均稀释成10%~90%12种浓度干预PA,测定血清的抑菌率、MIC_(90)和MBC。结果LEV联用QGYD后药液对PA(标准/耐药)的MIC明显降低,0.5<FICI≤1;各组10%~90%含药血清对PA(标准/耐药)具有一定程度的抑制作用,且呈现随着血清比例的增加抑菌率逐渐升高的趋势;与空白对照组血清相比,QGYD组含药血清的抑菌作用明显增强;LEV组血清对PA标准菌株MIC_(90)为15%,联合QGYD后MIC_(90)下降到10%,MBC均为15%。对PA耐药菌株的MIC_(90)为55%,联合QGYD后MIC_(90)为45%,降低了10%。结论QGYD提取物和QGYD含药血清均能有效抑制PA;LEV联合QGYD后药液和含药血清对PA的MIC或MIC_(90)均明显降低,抗菌活性增强。

耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌血流感染耐药基因及毒力因子分析

目的 分析耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌(CR-PA)血流感染(BSI)耐药基因及毒力因子。方法 选取发生铜绿假单胞菌(PA)BSI的156例住院患者为研究对象,培养其血液、尿液、痰液等标本后获得51株CR-PA,分析CR-PA的抗菌药物药敏试验结果以及耐药基因、毒力基因阳性检出率。结果 51株CR-PA中耐药率≥50%的抗菌药物从高到低依次为头孢吡肟、美罗培南、阿米卡星、复方新诺明、庆大霉素、亚胺培南,而敏感率≥50%的抗菌药物从高到低依次为哌拉西林+三唑巴坦绿脓菌素、环丙沙星、替卡西林,其中哌拉西林+三唑巴坦绿脓菌素是耐药率最低且药敏感率最高的抗菌药物。在51株CR-PA中,ant(2’’)-Ⅰ耐药基因阳性率(58.82%)、plcH毒力基因阳性率(100.00%)最高,其次阳性率超过50.00%的耐药基因分别为aprA(98.04%)、exoS(92.16%)、algD(82.35%)、exoT(82.35%)、exoU(68.63%)。结论 BSI患者CR-PA中耐药基因、毒力基因分布广泛,其中以耐药基因ant(2’’)-Ⅰ与毒力基因plcH的临床分离率较高。

氨溴索对粘液型铜绿假单胞菌生物膜藻酸盐作用的体外研究

目的探讨氨溴索对铜绿假单胞菌临床分离株形成的生物膜(biofilm,BF)主要成分藻酸盐的干预作用,研究其对藻酸盐合成过程中起重要作用的基因表达和合成过程中限速酶活性的影响,以及其对藻酸盐降解的影响。方法建立铜绿假单胞菌临床分离株BF体外模型,培养7d后得到成熟BF。将BF内的细菌振荡下来后,用硫酸-苯酚法检测氨溴索对藻酸盐含量的影响;RT-PCR检测藻酸盐合成过程中重要基因algD、algU、algR和mucA的mRNA表达;分光光度计检测合成过程中限速酶——GDP-甘露糖脱氢酶(guanosine diphospho-D-mannosedehydrogenase,GMD)的活性,并检测藻酸盐的降解情况。结果在氨溴索3.75mg/ml作用下,藻酸盐含量(mg/g)由86.4024±0.8588下降到59.9199±0.5803(F=66.2,P<0.01);其合成重要基因algD、algU、algR和mucA的mRNA的表达分别由1.2994±0.0173、1.0488±0.0457、0.9888±0.0267和0.8731±0.0336变化为1.0253±0.0265、0.9594±0.0106、0.8536±0.0179和1.0770±0.0503(F=91.9,41.1,88.4和56.9,P均<0.05);其合成限速酶GMD活性由0.0989±0.0055下降到0.0558±0.0016(F=121.2,P<0.01);藻酸盐的降解量(△mg/g)由1.4122±0.0073变化为1.4175±0.0019(F=21.81,P>0.05)。1.875mg/ml氨溴索作用下,有同样的趋势但效应不如高浓度明显。结论氨溴索可以降低铜绿假单胞菌BF藻酸盐的含量,影响藻酸盐合成过程中重要基因algD、algU、algR和mucA的mRNA的表达,降低藻酸盐合成限速酶GMD活性,但对藻酸盐的降解无影响。

氨溴索对铜绿假单胞菌生物膜早期黏附及胞外多糖的影响

目的研究氨溴索对铜绿假单胞菌PA01菌株BF早期黏附及胞外多糖复合物(Extracellular Polymer-ic Substances,EPS)的影响。方法利用荧光多功能酶标仪检测各组不同时间点96孔板中pGFPuv转化PA01菌株的荧光强度,计算黏附率以表示干预对不同时间点细菌黏附的影响;利用罗丹明标记的麦胚凝集素(WGA)特异性结合细菌EPS,荧光显微镜下定性观察各组EPS的变化;利用硫酸-苯酚法定量各组细菌EPS的产量。结果8 h组,氨溴索高浓度干预后细菌的黏附率由0.72±0.17下降至0.49±0.08,t=4.03,P<0.05,与克拉霉素阳性对照组黏附率(0.50±0.06)相比,t=-1.19,P>0.05;氨溴索低浓度干预后黏附率也有下降,但不及高浓度组明显;其余时间组趋势与8 h组大致相似。罗丹明标记WGA可使胞外多糖显色,在荧光显微镜下观察可见氨溴索干预后EPS减少,稀薄;EPS定量实验,EPS总量(μg)/细菌干重(g)氨溴索干预组(477.82±7.90)较生理盐水对照组(523.76±10.12)有明显降低,t=8.76,P<0.05。结论氨溴索可显著减少PA01菌株黏附及产EPS的能力。

氨溴索对铜绿假单胞菌生物被膜密度感应系统毒力因子及相关基因的影响

目的:探讨氨溴索对铜绿假单胞菌生物被膜(BF)密度感应(QS)系统所调控的毒力因子编码基因以及各自对应毒力因子表达的影响.方法:通过平板培养法培养铜绿假单胞菌建立成熟的BF体外模型.采用不同浓度氨溴索干预后,应用实时荧光定量PCR(rRT-PCR)检测其对QS系统各毒力因子编码基因表达的影响;采用ELISA法检测外毒素A和弹性蛋白酶水平;采用地衣酚—硫酸法检测鼠李糖脂水平;采用Folin—酚比色法检测碱性蛋白酶活性.结果:经氨溴索3.750g/L作用后基因toxA,rhlA,lasB,aprAmRNA相对于培养基对照组的表达量均显著减少,由1.000分别变化为(3.03±0.08),(2.70±0.09),(2.10±0.10),(2.20±0.10)(P<0.05).同时毒力因子外毒素A、弹性蛋白酶、鼠李糖脂、碱性蛋白酶的表达量也较培养基对照组明显减少,分别由(15220.16±988.89),(81.38±5.44),(289.73±6.72),(5011±108.78)减少至(3481.59±599.64),(29.76±3.84),(101.74±3.32),(1757±57.21)(P<0.05).经氨溴索1.875g/L干预后具有同样趋势,但效应不如高浓度明显(P<0.05).结论:氨溴索可以降低BFQS系统调控的毒力因子编码基因以及各自对应的毒力因子的表达.

氨溴索联合左氧氟沙星治疗铜绿假单胞菌肺炎的临床疗效

目的观察氨溴索联合左氧氟沙星治疗铜绿假单胞菌肺炎(PAP)的临床疗效,以期为临床治疗提供参考。方法选取2019年10月—2022年1月福鼎市医院收治的PAP患者102例作为研究对象,按照双色球随机法分为左氧氟沙星组和联合用药组,各51例。左氧氟沙星组予盐酸左氧氟沙星注射液,联合用药组在左氧氟沙星组基础上加用盐酸氨溴索注射液,2组均连续治疗4周。比较2组临床疗效,治疗前后炎性指标[C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、白细胞计数(WBC)]、免疫功能指标(CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))、肺功能指标[第1秒用力呼气容积(FEV_(1))、用力肺活量(FVC)及肺动态顺应性(Cdyn)],不良反应。结果联合用药组患者治疗总有效率为94.12%,高于左氧氟沙星组的80.39%(χ^(2)=4.320,P=0.038)。治疗4周后,2组患者血清CRP、PCT水平及WBC较治疗前降低,且联合用药组患者各指标低于左氧氟沙星组(P<0.01);2组患者CD4^(+)较治疗前升高,CD8^(+)较治疗前降低,联合用药组患者CD4^(+)/CD8^(+)较治疗前升高,且联合用药组患者CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)高于左氧氟沙星组,CD8^(+)低于左氧氟沙星组(P<0.05或P<0.01);2组患者FEV_(1)、FVC和Cdyn较治疗前升高,且联合用药组各指标高于左氧氟沙星组(P<0.01)。联合用药组患者治疗期间不良反应总发生率为3.92%,低于左氧氟沙星组的15.69%(χ^(2)=3.991,P=0.046)。结论在PAP治疗中应用氨溴索联合左氧氟沙星治疗可增强疗效,更有效地改善肺通气功能,减轻机体炎性反应,促进免疫功能恢复,且安全性较高。

姜黄素联合美罗培南对耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵表达的影响

目的本课题旨在研究姜黄素(CUR)联合美罗培南(MEM)对耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌(CRPA)MexAB-OprM外排泵过表达的抑制作用。方法微量肉汤法检测MEM的MIC,并通过MIC逆转倍数筛选出外排泵高表达的菌株;微量肉汤检测CUR的MIC;棋盘滴定法测定MEM和CUR的最佳联合浓度;PCR技术检测7株菌的mexA、mexB、oprM和mexR、nalC、nalD基因;qRT-PCR技术检测7株菌的mexB、oprM基因的表达水平;利用260 nm处吸光度检测细菌细胞膜的完整性;溴化乙锭(EB)荧光累积和直接外排含量来观察MexAB-OprM外排泵的表达;qRT-PCR技术检测CUR-MEM联合和MEM单药处理细菌24 h后mexA、mexB、oprM基因和调控基因mexR、nalC、nalD的表达水平。结果30株CRPA筛选出7株外排泵MexAB-OprM高表达的菌株;微量肉汤法确定CUR的MIC为512~1024μg/mL;棋盘滴定法发现CUR显著降低了MEM的MIC值,两者有明显的协同作用,FIC指数为≤0.5;PCR技术均检测到mexA、mexB、oprM、mexR、nalC、nalD基因。qRT-PCR技术检测7株菌的mexB、oprM基因,发现PA21号菌株外排泵表达水平远高于其他6菌株;OD260 nm吸光度检测实验发现128μg/mL的CUR没有破坏细胞膜的完整性,256和512μg/mL的CUR浓度能不同程度的破坏细胞膜;CUR单药组EB细胞内荧光累计百分比为11.2%、MEM单药组6.4%、CUR-MEM联合组为22.2%;与单药组相比,联合组差异有统计学意义(P<0.01,F=19.12);直接EB外排实验发现EB含量的变化:CUR单药组降低10.6%,MEM单药组降低15.7%,药物联合组降低7.1%;qRT-PCR实验发现,药物联合组mexA、mexB、oprM基因与CUR组相比分别降低41.62%、39.57%、59.78%,与MEM单药组相比分别降低53.5%、48.44%、63.09%,差异有统计学意义(P<0.05,F=13.24,F=27.07,F=213.50);qRT-PCR实验发现药物联合组的调控基因mexR与MEM组相比升高22.9%,差异具有统计学意义(P<0.05,F=9.64),nalC与MEM组相比分别降低77.54%,差异具有统计学意义(P<0.001,F=46.21),nalD与CUR单药组相比降低69.62%,与MEM组相比分别降低76.29%,差异具有统计学意义(P<0.001,F=66.41)。结论CUR联合MEM可以抑制MexAB-OprM外排泵的过表达,CUR与MEM以浓度依赖性方式发挥协同作用。

盐酸氨溴索联合阿米卡星对铜绿假单胞菌成熟生物膜的体外影响

目的通过在体外复制铜绿假单胞菌(P.a)的生物膜模型,研究盐酸氨溴索与阿米卡星对铜绿假单胞菌生物膜的影响。方法以聚氯乙烯吸痰管作为生物膜载体制作铜绿假单胞菌体外生物膜模型,分别在生物膜形成的不同时间加入3MIC的阿米卡星及不同浓度的盐酸氨溴索,采用连续稀释法进行生物膜内存活菌菌落计数。结果与单独应用阿米卡星组相比,阿米卡星与盐酸氨溴索合用后,生物膜中的活菌数明显减少。成熟生物膜中的活菌数随盐酸氨溴索浓度的增高而减少。结论盐酸氨溴索能增强阿米卡星对生物膜内铜绿假单胞菌的清除作用。