铜绿假单胞菌甘露糖敏感血凝素对深Ⅱ度烧伤模型大鼠皮肤修复作用的研究

目的探究铜绿假单胞菌甘露糖敏感血凝素(pseudomonas aeruginosa mannose-sensitive hemagglutinin,PA-MSHA)对深Ⅱ度烧伤模型大鼠皮肤的修复作用,通过对不同剂量PA-MSHA的应用,观察其对烧伤创面愈合速度以及组织病理学变化,以期为烧伤治疗提供新的治疗思路。方法采用控温烫伤仪构建深Ⅱ度烧伤模型大鼠,将造模成功的大鼠随机分为生理盐水组、湿润烧伤膏组、PA-MSHA 8×10^(8)/mL组、20×10^(8)/mL组、50×10^(8)/mL组、125×10^(8)/mL组,每组10只。各给药组大鼠分别给予相应药物,每天上、下午给药2次,持续给药至伤口愈合,观察各组大鼠烧伤创面愈合情况和烧伤皮肤组织病理形态学变化。结果与生理盐水组相比,PA-MSHA 125×10^(8)/mL组在第7天、第14天可见烧伤面积的缩小,差异具有统计学意义(P<0.05);与生理盐水组相比,湿润烧伤膏组烧伤面积增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。烧伤治疗后期,生理盐水和PA-MSHA药物治疗组的烧伤面积未见显著性差异(P>0.05)。与生理盐水组比较,湿润烧伤膏组和PA-MSHA各剂量组皮肤组织可见较厚的新生表皮层,真皮层中结缔组织和新生血管均明显增多。结论PA-MSHA可修复深Ⅱ度烧伤模型大鼠皮肤,其机制可能与减轻烧伤创面炎症反应,促进血管新生有关。

铜绿假单胞菌-甘露糖敏感血细胞凝集素抗肿瘤的作用机制及临床应用

铜绿假单胞菌-甘露糖敏感血细胞凝集素(PA-MSHA)在抗肿瘤领域的应用不断增加。PA-MSHA可以通过抑制表皮生长因子受体(EGFR)通路促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞侵袭和迁移、分化以及改变耐药和细胞上皮-间充质转化(EMT)状态,同时PA-MSHA也通过Toll样受体(TLR)增强巨噬细胞和T细胞对肿瘤细胞的免疫杀伤和抑制。该文梳理并综述关于PA-MSHA抗肿瘤的机制及临床应用,认为PA-MSHA通过作用于细胞甘露糖基的调节过程改变了EGFR和TLR蛋白的糖基化。PA-MSHA可能作用的细胞膜蛋白包括更多的高甘露糖基信号通路受体,阐明PA-MSHA和甘露糖基之间的深层次关系对PA-MSHA的机制研究及临床应用意义重大。

铜绿假单胞菌甘露糖敏感血凝素对脓毒症大鼠急性肺损伤的保护作用

目的探讨铜绿假单胞菌甘露糖敏感血凝素(PA-MSHA)对脓毒症致急性肺损伤的影响及可能机制。方法以盲肠结扎穿孔法(CLP)复制大鼠脓毒症模型。按随机数字法将120只健康SD大鼠分为假手术对照组(SC组)、脓毒症组(CLP组)、术前治疗组(Pre T组)和术后治疗组(Pos T组),每组各30只。于制模后12、24、36 h分别采集外周血测定血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-10及转化生长因子β(TGF-β)浓度并计算肺损伤病理评分。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺组织Toll样受体4(TLR4)m RNA表达,并作肺组织TLR4 m RNA表达与病理学评分的Pearson相关性分析。结果 SC组各时间点血清细胞因子浓度无明显变化(F=0.04、0.09、1.25、1.77,P均>0.05)。与CLP组和Pos T组相比,各时间点Pre T组的血清TNF-α、IL-6浓度明显较低,而IL-10、TGF-β浓度明显较高(P均<0.05),而Pos T组仅在术后36 h的IL-10高于CLP组(P<0.05)。四组大鼠间的肺组织TLR4 m RNA表达水平及四组间各时间点肺组织病理学评分比较,差异均有统计学意义(F=66.01、20.03、71.21、69.02,P均<0.05),SC组及Pre T组明显优于CLP组和Pos T组(P均<0.05)。同时,肺组织TLR4 m RNA表达与病理学评分存在明显的相关性(r=0.732,P<0.05)。结论术前给予PA-MSHA可减轻脓毒症大鼠肺病理损伤,其机制可能与调节外周血单核细胞TLR4表达水平、调控细胞因子平衡、减轻炎症级联放大效应有关。

铜绿假单胞菌-甘露糖敏感血凝素腹腔喷洒给药对结直肠癌患者围手术期免疫水平的影响

目的探讨铜绿假单胞菌(PA)-甘露糖敏感血凝素(MSHA)腹腔喷洒给药对结直肠癌患者围手术期免疫水平的影响。方法结直肠癌患者61例均行手术治疗;手术关腹前,A组(31例)腹腔喷洒PA-MSHA 15mL,C组(30例)腹腔喷洒生理盐水15mL。比较两组术前和术后第3天外周血淋巴细胞和单核细胞以及两组术前和术后第5天血清免疫相关指标水平。结果A组和C组术后第3天淋巴细胞计数和淋巴细胞百分比均降低,术后第5天血清IL-6水平升高(P<0.01)。C组术后第3天单核细胞计数降低,A组术后第5天血清IL-2、TNF-α水平均升高(P<0.05)。与C组比较,A组术后第3天淋巴细胞计数升高(P<0.05)。与C组比较,A组术后第5天血清IL-2、IL-6及TNF-α水平均升高(P<0.05或P<0.01)。两组患者术后至出院不良反应发生率相仿(P>0.05)。结论PA-MSHA腹腔喷洒给药可有效改善结直肠癌患者围手术期免疫水平。

铜绿假单胞菌制剂在恶性肿瘤中的辅助治疗作用

当前,恶性肿瘤已越来越趋向于多方面的综合治疗.带有甘露糖敏感性血凝菌毛的铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa-mannosesensitive hemagglutinin,PA-MSHA)制剂是一类用于免疫治疗的生物制剂,正被应用于恶性肿瘤的治疗过程中.本文重点介绍PA-MSHA制剂对恶性肿瘤辅助治疗作用的研究进展.

铜绿假单胞菌-甘露糖敏感血凝菌毛株对膀胱癌细胞增殖的抑制作用及机制

目的 观察铜绿假单胞菌-甘露糖敏感血凝菌毛株（PA-MSHA）对膀胱癌细胞株的作用,探讨其作用机制.方法 使用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测肿瘤细胞的增殖,荧光染色法检测细胞凋亡形态,分光光度法检测凋亡因子半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-2和Caspase-9的水平.结果 磷酸盐缓冲液（PBS）组作用T24和5637细胞A450值分别为1.31和1.62,PA-MSHA组A450值分别为0.28和0.41,两组差异有统计学意义（P＜0.05）;PA-MSHA处理后的膀胱癌细胞出现凋亡小体;PA-MSHA能够活化T24和5637细胞中Caspase-3及Caspase-9蛋白,与PBS组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 PA-MSHA可以抑制T24和5637细胞增殖,并诱导凋亡.

PA—MSHA对脓毒症大鼠中性粒细胞移行影响的研究

目的通过观察铜绿假单胞菌甘露糖敏感血凝素（PA—MSHA）对脓毒症大鼠模型中性粒细胞移行的影响，探讨脓毒症的发病机制及PA—MSHA在脓毒症防治中的作用。方法将实验大鼠随机分为6组，即假手术组（c组）、脓毒症7h组（s7组）、脓毒症15h组（S15组）、PA—MSHA预处理组（PA组）、PA—MSHA预处理脓毒症7h组（PA—s7组）和PA—MSHA预处理脓毒症15h组（PA—S15组）。腹腔注射人粪便悬液制作多微生物腹腔感染脓毒症模型。假手术组腹腔注射等量生理盐水，预处理组在造模前连续7d给予0．3mLPA—MSHA皮下注射。观察大鼠一般情况及72h生存率；采用percoll非连续密度离心法分离外周中性粒细胞，应用transwell小室法测定各组大鼠中性粒细胞体外移行数量。结果s7组及S15组大鼠一般情况较PA—s7组及PA—S15组严重。与s组比较，PA—S组72h累积生存率明显增加（P〈0．01）。s7组、S15组中性粒细胞体外移行数明显低于C组（P〈0．01），且S15组中性粒细胞数目明显低于s7组（P〈0．叭）。与s7组比较，PA—s7组中性粒细胞移行数量明显升高（P〈0．01）。结论脓毒症时，中性粒细胞体外移行作用受到抑制，随着病情进展，中性粒细胞体外移行受抑制程度更加明显。PA—MSHA可能通过增强脓毒症早期中性粒细胞移行作用，提高生存率，对脓毒症具有一定的防治作用。

预防性应用PA—MSHA对严重脓毒症中性粒细胞移行的影响

目的通过观察铜绿假单胞菌一甘露糖敏感血凝素（PA—MSHA）对严重脓毒症大鼠中性粒细胞体外移行的影响，探讨严重脓毒症发病机制及PA—MSHA对严重脓毒症的作用。方法大鼠随机分为对照组（C组）、严重脓毒症组（Ss组）、PA—MSHA预处理组（PA组）和PA—MSHA预处理严重脓毒症组（PA—SS组）。严重脓毒症动物模型通过人粪便悬液腹腔注射制作。PA—MSHA预处理方案为连续7d0．3mLPA—MSHA皮下注射。观察大鼠一般情况，48h生存情况，大体解剖观察，中性粒细胞体外趋化数，细胞因子IL-6、iNOS、IL-10水平。结果PA—ss组在一般情况、48h生存情况、大体解剖观察上均优于sS组，细胞因子水平也较sS组下降。sS组及PA—ss组与c组和PA组比较，中性粒细胞体外趋化数量显著下降（P〈0．01）。C组与PA组、SS组与PA—SS组中性粒细胞体外趋化细胞数比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论严重脓毒症时中性粒细胞体外移行能力发生严重障碍，连续7d0．3mLPA—MSHA预处理无法改善严重脓毒症中性粒细胞体外移行能力，但可通过下调炎症因子水平，减缓严重脓毒症病情恶化，延长生存时间，为临床救治争取宝贵时间。

PA-MSHA疫苗增强急性髓细胞白血病源DC对Treg的抑制作用

目的:探讨带有甘露糖敏感血凝菌毛的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosawith mannose sensitive hemagglutina-tion pili,PA-MSHA)疫苗处理后急性髓细胞白血病源性树突状细胞(dendritic cells derived from acute myeloid leukemia,AML-DC)对调节性T细胞(regulatory Tcell,Treg)的抑制作用。方法:rhGM-CSF和rhII-4诱导的AML-DC分为对照组、PA-MSHA组和TNF-α组,培养24h后观察3组AML-DC的形态、流式细胞术检测各组AML-DC的表型、MTT法和混合淋巴细胞反应检测AML-DC对淋巴细胞增殖的作用。磁珠法分离健康人外周血CD4+T细胞,加入各组AML-DC中诱导Treg,ELISA法检测各组Treg上清液中IL-10、TGF-β的水平,流式细胞术检测Treg表面CD4、CD25的表达,RT-PCR法检测Treg中Foxp3mRNA的表达水平。结果:PA-MSHA组和TNF-α组AML-DC呈树突状形态,且CDla、CD80、CD83、CD86和HLA-DR表达较对照组明显升高(P<0.05)。PA-MSHA组和TNF-α组AML-DC诱导的T细胞增殖能力显著增强(P<0.05)。PA-MSHA组和TNF-α组AML-DC诱导产生的Treg分泌较低水平的IL-10、TGF-β(P<0.05),CD4、CD25的表达及Foxp3mRNA水平均较对照组明显降低(P<0.05)。上述各指标PA-MSHA组和TNF-α组间均无明显差异。结论:PA-MSHA疫苗可促进AML-DC的成熟,抑制初始T细胞向Treg的分化,增强AML-DC对AML患者Treg的抑制作用。

PA-MSHA引起注射局部急性炎症及白细胞介素17、肿瘤坏死因子α和Toll样受体4的表达改变

为研究皮下注射铜绿假单胞菌甘露糖敏感血凝菌毛株(Pseudomonas aeruginosa mannose sensitive hemagglutinin,PA-MSHA)注射液后局部组织的病理学改变及白细胞介素17(interleukin 17,IL-17)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)表达情况,将30只小鼠随机分为两组,分别皮下注射PA-MSHA和生理盐水,在注射后6、12、24、48及72h取注射局部组织,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色后观察病理形态改变,并用免疫组化染色和图像分析检测IL-17、TNF-α和TLR4表达水平。结果显示,小鼠皮下注射PA-MSHA后,在给药部位引起以中性粒细胞浸润为主的急性炎症;局部炎症灶中IL-17、TNF-α和TLR4表达在注射后6h升高,24h达到高峰,然后逐渐减低,至72h实验组与对照组无差异;3种炎症因子的表达与炎症反应程度相平行。结果表明,皮下注射PA-MSHA能引起局部组织急性炎症反应,且能改变局部免疫状态。

PA-MSHA预处理对严重脓毒症大鼠肠组织和腹腔灌洗液细胞因子和肠道ICAM-1、VCAM-1表达的影响

目的分析铜绿假单胞菌-甘露糖敏感血凝素(PA-MSHA)预处理对严重脓毒症大鼠肠组织和腹腔灌洗液中细胞因子和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法取雄性SD大鼠30只,随机分为对照组(未建立脓毒症模型)、模型组(建立严重脓毒症模型)和实验组(建立严重脓毒症模型+给予PA-MSHA预处理),三组各10只,分别进行相应处理。通过苏木精-伊红染色观察三组大鼠病理学改变,采用酶联免疫吸附试验法对三组大鼠肠道内VCAM-1和ICAM-1水平进行检测,采用相同方法检测大鼠腹腔灌洗液和肠组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)及白介素-10(IL-10)的水平,并进行比较。结果对照组肠上皮细胞未见异常,肠腺体未见异常,未出现炎症细胞浸润;模型组和实验组均出现不同程度的肠上皮细胞破坏、毛细血管扩张、固有层水肿及炎症细胞浸润,但实验组肠道损伤程度较模型组明显减轻。模型组和实验组肠组织中VCAM-1和ICAM-1水平较对照组显著升高(P<0.05)。模型组和实验组腹腔灌洗液中TNF-α、IL-6及IL-10的水平较对照组显著升高(P<0.05);实验组腹腔灌洗液中TNF-α、IL-6及IL-10的水平较模型组显著下降(P<0.05)。模型组和实验组肠组织中TNF-α、IL-6及IL-10的水平较对照组显著升高(P<0.05);实验组肠组织中TNF-α和IL-6较模型组显著下降,IL-10的水平较模型组显著升高(P<0.05)。结论PA-MSHA预处理可促使局部细胞因子和VCAM-1及ICAM-1水平下降,从而可有效减轻脓毒症大鼠肠道炎症损害,缓解肠道炎症反应,减轻脓毒症病情进展,因此对脓毒症导致的肠道损伤具有良好的预防效果。

PA-MSHA抗肿瘤效应的免疫机制研究

目的研究铜绿假单胞菌甘露糖敏感血凝菌毛株(pseudomonas aeruginosa-mannose sensitive hemagglutinin,PA-MSHA)处理树突状细胞(dendritic cells,DCs)后对其功能及激活T细胞杀伤肿瘤细胞效应的影响。方法取小鼠骨髓来源的DC,观察PA-MSHA体外处理后对DC表面分子、吞噬功能及T细胞杀伤功能的影响。结果 PA-MSHA处理的DC其表面分子CD40、I-E表达显著上升,吞噬功能显著下降,由DC诱导的活化T细胞对肿瘤细胞的杀伤效应显著高于对照组。结论 PA-MSHA能有效促进DC成熟并增强抗肿瘤免疫效应。

PA-MSHA对脓毒症/严重脓毒症大鼠肠道ICAM-1、VCAM-1表达的影响

目的研究铜绿假单胞菌甘露糖敏感血凝菌毛株(pseudomonas aeruginosa-mannose sensitive hemagglutinin,PAMSHA)预给药对脓毒症/严重脓毒症大鼠肠道细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesionmolecule-1,ICAM-1)及肠血管细胞间黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1)表达的影响。方法 SPF级雄性SD大鼠共40只,随机分为5组,空白组、脓毒症组、严重脓毒症组给予生理盐水注射液皮下注射0.3 ml/d,PA-脓毒症组、PA-严重脓毒症组预先PA-MSHA皮下注射0.3 ml/d,连续给药7 d,第8天根据Gonnert人粪便悬液腹腔注射法改良制造大鼠脓毒症/严重脓毒症模型。成模后监测生命体征,留取一部分肠组织,制作普通病理切片苏木精-伊红(hematoxylin-eosinstaining,HE)染色鉴定,另取部分肠组织并用酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbentassay,ELISA)大鼠肠ICAM-1、VCAM-1表达水平。结果 (1)HE染色结果显示与空白组对比,各组均发生形态改变;(2)五组之间肠道ICAM-1(F=33.337,P<0.001)、VCAM-1(F=12.714,P<0.001)表达水平差异有统计学意义;(3)进一步比较ICAM-1表达水平可知,脓毒症组表达水平高于PA-脓毒症组(P<0.05),严重脓毒症组表达水平低于PA-严重脓毒症组(P<0.05);(4)比较VCAM-1表达水平,脓毒症组表达水平高于PA-脓毒症组(P<0.05),严重脓毒症组表达水平与PA-严重脓毒症组相比差异无统计学意义(P=0.262)。结论 (1)腹腔感染导致的脓毒症/严重脓毒症均可使大鼠肠道ICAM-1、VCAM-1表达水平升高;(2)PA-MSHA预给药能抑制脓毒症大鼠肠道ICAM-1、VCAM-1的表达水平;(3)在严重脓毒症大鼠组中,所测得ICAM-1和VCAM-1水平不能准确反映出PA-MSHA对其作用,可能与肠上皮细胞和炎性细胞大量坏死有关。

PA-MSHA和吡柔比星膀胱灌注治疗的对比分析

目的探讨非肌层浸润性膀胱尿路上皮癌患者行经尿道膀胱肿瘤电切术(TURBT)后铜绿假单胞菌-甘露糖敏感血凝菌毛株(pseudomonas aeruginosa-mannose sensitive hemagglutinin,PA-MSHA)和吡柔比星膀胱灌注治疗的有效性及安全性。方法选取行TURBT的非肌层浸润性膀胱尿路上皮癌患者91例,根据膀胱灌注药物的不同分为实验组(41例)和对照组(50例),实验组患者术后24h内膀胱灌注PA-MSHA,对照组患者术后24h内膀胱灌注吡柔比星,随访患者规律灌注后的不良反应及肿瘤复发情况。结果实验组发生急性膀胱炎3例,血尿3例,发热2例,胃肠道反应1例,不良反应发生率为21.95%(9/41);复发例数为10例,术后6个月复发3例,术后12个月复发5例,术后24个月复发2例,总复发率为24.39%(10/41)。对照组发生急性膀胱炎8例,血尿5例,发热5例,胃肠道反应3例,不良反应发生率为42.00%(21/50);复发例数为11例,术后6个月复发6例,术后12个月复发4例,术后24个月复发1例,总复发率为22.00%(11/50)。结论 PA-MSHA和吡柔比星两种灌注药物对于预防非肌层浸润性膀胱癌患者TURBT术后复发的疗效差异无统计学意义,但两者不良反应的发生率存在差异,PA-MSHA的不良反应发生率低于吡柔比星。

3种膀胱灌注方案辅助治疗非肌层浸润性膀胱癌的疗效评估

目的评估表柔比星(EPI)+诱导灌注+维持灌注、EPI+即刻灌注+诱导灌注+维持灌注、铜绿假单胞菌-甘露糖敏感血凝菌毛株(PA-MSHA)+即刻灌注+诱导灌注+维持灌注3种方案对中高危非肌层浸润性膀胱癌(NMIBC)电切术后辅助治疗的有效性和安全性。方法回顾性分析182例经尿道膀胱肿瘤电切术后确诊为NMIBC患者的资料,依据术后灌注药物和灌注方法分为A组(EPI+诱导灌注+维持灌注)、B组(EPI+即刻灌注+诱导灌注+维持灌注)、C组(PAMSHA+即刻灌注+诱导灌注+维持灌注),各组按照肿瘤复发风险进一步分为高危组和中危组。随访2年,定期复查血尿常规、肝肾功能、心电图、泌尿系超声及膀胱镜检查,并记录膀胱癌复发情况以及膀胱灌注后不良反应的发生情况。结果 A、B、C组的不良反应发生率分别为42.86%(24/56)、38.24%(26/68)、18.97%(11/58);A、B两组不良反应发生率与C组比较,差异均有统计学意义(P=0.006、P=0.018)。A组高危患者与中危患者2年内肿瘤复发率分别为50.00%(10/20)、27.78%(10/36),B组高危患者与中危患者2年内肿瘤复发率分别为45.83%(11/24)、25.00%(11/44),C组高危患者与中危患者2年内肿瘤复发率分别为47.62%(10/21)、8.11%(3/37)。A、B两组高危患者2年内肿瘤复发率分别与C组高危患者比较,差异均无统计学意义(P=0.879、P=0.905);A、B两组中危患者2年内肿瘤复发率分别与C组中危患者比较,差异均有统计学意义(P=0.028、P=0.045)。结论 PA-MSHA+即刻灌注+诱导灌注+维持灌注辅助治疗NMIBC的不良反应发生率较低。对于高危NMIBC,3种灌注方式的疗效无差别;对于中危NMIBC,PA-MSHA+即刻灌注+诱导灌注+维持灌注效果最佳。