铜螯合纳米磁珠结合MALDI-TOF／TOF MS分析人尿液中多肽组分的方法初探

目的:利用铜螯合纳米磁珠(MB-IMAC-Cu2+)系统联合基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)建立一套稳定、可行的技术路线,对尿液中相对分子质量(Mr)<10000的多肽进行系统研究,包括从样品的采集、存放、提取、检测在内的各个步骤。方法:分析了8名健康男性和8名健康女性的尿液标本。针对样本采集、存放、不同提取方法以及实验整个系统稳定性的问题设计不同组,分别检测各组尿液多肽谱并对结果进行评价。结果:在本系统中,观察到健康人尿液Mr<10 000范围内平均有85个信号峰,不同性别组间尿液多肽谱未见明显差异。以MALDI-TOF/TOF检测得到的出峰情况来评价各种可能因素对实验体系的影响,铜螯合纳米磁珠(MB-IMAC-Cu2+)提取多肽效果比较满意;整个实验体系稳定、可靠,重复性好,选择其中所观察的10个峰,变异系数均在10%以内,具有良好的可操作性;室温或者4℃保存最好不超过12 h;5次以内有限冻融对出峰没有影响。结论:本实验所探索、建立的方法为下一步研究尿液多肽组学提供了参考。

基于MALDI-TOF-MS技术建立肺腺癌诊断预测模型及其初步验证

目的利用液体芯片结合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS),筛选肺腺癌患者与肺良性疾病和健康人血清中的差异性多肽,建立肺腺癌诊断预测模型,发现诊断肺腺癌的潜在标志物。方法收集肺腺癌患者37例和健康体检者及肺部良性疾病患者(对照组)33例,其中肺腺癌组与对照组年龄、性别匹配,将上述两组按3∶1随机分为训练组(肺腺癌患者30例,对照者26例)和测试组(肺腺癌患者7例,对照者7例)。应用液体芯片-飞行时间质谱技术以及软件ClinProTools 3.0筛选训练组中肺腺癌组与对照组血清中的差异性多肽,建立肺腺癌诊断预测模型。利用测试组中的血清标本对诊断模型进行验证,评估该模型的诊断效能。结果通过软件ClinProTools 3.0分析,得到9个具有显著差异的多肽峰(P<0.05),其中肺腺癌中表达上调的峰m/z分别为8 976.5、4 469.05、4 966.78、8 925.5、4 531.05,表达下调的峰m/z分别为3 304.44、8 594.76、3 266.82、3 195.52。根据遗传算法(GA)建立肺腺癌诊断预测模型,该模型的整体识别能力为94.49%,利用测试组对该模型进行评估,结果显示该模型的灵敏度为100.0%,特异度为85.7%。结论肺腺癌患者血清中与肺部良性疾病及健康人血清中存在差异性多肽,利用这些差异性多肽峰建立肺腺癌诊断预测模型,为肺腺癌的早期诊断提供了一种新的方法。