大、小鼠空肠、肝及肾组织中P型铜转运ATP酶蛋白的表达

目的:检测大、小鼠空肠、肝及肾组织中P型铜转运ATP酶(ATP7B)蛋白的表达。方法:分别取6只SD大鼠和7只昆明小鼠,取空肠、肝及肾组织,常规石蜡切片,采用免疫组化法检测ATP7B蛋白的表达。结果:大、小鼠空肠绒毛上皮的纹状缘和近基底部、小肠腺、肾小管和肝细胞中均有不同程度的ATP7B蛋白表达。大鼠空肠、肝及肾组织ATP7B的积分光密度分别为(224474.380±228536.513)、(94116.484±45821.113)和(118128.741±41046.629),小鼠上述3种组织中ATP7B的积分光密度分别为(129023.602±87570.591)、(150614.511±52981.792)和(118403.634±53656.681),大、小鼠同一组织器官ATP7B的积分光密度相比,差异均无统计学意义(t=1.239、1.355、0.009,P均>0.05)。结论:ATP7B蛋白在大、小鼠空肠、肝及肾组织中均有表达,其表达量的高低与动物种属关系不大。

P型铜转运ATP酶和增殖细胞核抗原在大、小鼠肝的表达

目的：研究P型铜转运ATP酶（ATP7B）与增殖细胞核抗原（PCNA）在大鼠和小鼠肝组织中的表达.方法：采用免疫组织化学法检测肝中ATP7B与PCNA的表达.结果：ATP7B在大鼠和小鼠的肝细胞质表达,表达较广泛.肝细胞PCNA的表达强弱不一,强阳性细胞较少,大鼠和小鼠肝的ATP7B和PCNA积分光密度间的差异均无统计学意义;在大鼠或小鼠肝,ATP7B与PCNA的免疫反应阳性物积分光密度间无显著相关性.结论：ATP7B和PCNA在大鼠和小鼠肝组织均有表达,表达的关联性不明显.

P型铜转运ATP酶在卵巢癌中的表达及其与化疗耐药的关系

目的:探讨P型铜转运ATP酶(copper-transporting P-type adenosine triphosphatase,ATP 7B)在卵巢癌组织中的表达及其与临床病理参数、化疗耐药的关系。方法:用半定量RT-PCR技术检测ATP 7B在36例卵巢癌组织,10例良性卵巢肿瘤组织,10例正常卵巢组织中的表达水平。结果:ATP 7B在卵巢癌组织中的阳性表达率为38.9%,显著高于在良性卵巢肿瘤(0%)及正常卵巢组织中(0%)的表达(P<0.01)。ATP 7B的表达与肿瘤分化程度有关,ATP 7B在低分化组织中的表达明显高于高、中分化组(P<0.05)。ATP7B在术前化疗组中的表达高于术前未化疗组,差异有统计学意义(P<0.05)。ATP7B表达阳性的卵巢癌患者对化疗的反应率(28.6%)明显低于表达为阴性的患者(72.7%)(P<0.05)。结论:ATP 7B可能在卵巢癌对铂类抗肿瘤药的耐药过程中发挥了重要作用。

铜稳态失调在肌萎缩侧索硬化发病机制中的研究进展

铜对维持细胞的正常代谢功能至关重要,参与细胞中多种生理过程,包括细胞呼吸、神经肽加工和铁运输等,维持铜稳态具有重要意义。在中枢神经系统中,铜稳态参与突触功能调节及髓鞘形成过程等,铜稳态失调与多种神经退行性疾病的发生密切相关,近年研究表明,铜转运ATP酶α(ATP7A)突变后导致的铜稳态失调,可能导致了肌萎缩侧索硬化(ALS)的发生发展。本文通过综述铜稳态失调在ALS发病机制的研究进展,提出了维持铜稳态可能为ALS治疗提供新靶点的展望。

铜的摄取转运与其相关基因疾病的讨论

铜是人体必需微量元素,机体既可通过精确的调节使它在生物学反应中发挥有益的作用,又可防止这种元素对毒性自由基形成的促进效应。文章主要探讨铜的摄取代谢转运过程并讨论这种元素所导致的与铜代谢有关的人类遗传性疾病,包括Menkes综合征和Wilson病。这两个疾病的相关蛋白被认为是铜转运磷酸化ATP酶,以下介绍两种疾病的病因及一些临床症状和治疗手段。

铅暴露对神经胶质瘤细胞铜代谢的影响及其机制

目的：研究铜转运蛋白1（CTR1）、铜转运 ATP 酶α多肽（ATP7A）在铅暴露诱导大鼠 C6胶质瘤细胞铜离子代谢紊乱及氧化应激反应中的作用。方法采用噻唑蓝法（MTT），通过 C6细胞暴露于醋酸铅0～100μmol·L -124和48 h 筛选适合剂量。C6细胞用醋酸铅10μmol·L -1分别处理24和48 h 后，分别采用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸比色法（TBA）检测铅对细胞 SOD 活性和 MDA 含量；原子吸收分光光度法观察铅对细胞内铜水平；荧光实时定量 PCR 和 Western blot 分别检测铅暴露后细胞 CTR1和ATP7A 的 mRNA 和蛋白表达水平的变化。结果醋酸铅浓度高于10μmol·L -1时，细胞活力受到显著抑制，故选择铅10μmol·L -1为铅暴露浓度。与正常对照组相比，单独铅或铜处理组 SOD 活性下降，MDA 含量增高，而铅与铜联合处理组 SOD 活性下降及 MDA 含量增高的程度更加显著（P ＜0．01）。与正常对照组比较，醋酸铅10μmol·L -1处理 C6细胞24和48 h 后，细胞对铜的吸收量分别增加1．2倍和2．5倍（P ＜0．01），CTR1 mRNA 水平分别增高23．2％和58．7％（P ＜0．01），而 ATP7A mRNA 水平分别下调58．1％和50．0％（P ＜0．01）。与正常对照组比较，醋酸铅10μmol·L -1暴露组 CTR1蛋白水平显著增高，而ATP7A 蛋白表达降低（P＜0．01）。结论铅暴露可以导致细胞中铜的蓄积和氧化应激反应的增强，其分子机制可能与影响 C6细胞 CTR1和 ATP7A 的表达水平有关。

ATP7B siRNA阳离子纳米脂质体逆转卵巢癌细胞株顺铂耐药的体内外实验研究

目的:探讨负载P型铜转运ATP酶(ATP7B)、小干扰RNA(siRNA)阳离子纳米脂质体(ATP7B/DC-Lip)逆转卵巢癌细胞株SKOV3顺铂(DDP)耐药的作用及意义。方法:通过DDP梯度诱导法构建卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP,利用细胞增殖抑制实验测定其耐药指数。薄膜分散法制备ATP7B/DC-Lip并测定其各项纳米表征。利用细胞增殖抑制实验和裸鼠体内实验分别检测ATP7B/DC-Lip的体内外抗肿瘤效果。结果:成功构建了卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP,ATP7B/DC-Lip在体外条件下可以分别沉默75%(48小时)和78%(72小时)的ATP7B蛋白表达。在体内外抑制肿瘤生长实验的结果显示,当转染ATP7B/DC-Lip后,体外条件下SK-OV3/DDP的IC50显著下降为3.51±0.93μg/ml(n=6);体内DDP耐药型肿瘤模型中DDP+ATP7B/DC-Lip组的肿瘤大小较其他组明显更小(P<0.05)。结论:ATP7B/DC-Lip可以逆转卵巢癌细胞株SKOV3的DDP耐药,可能作为一种有效的纳米药物用于治疗DDP耐药性卵巢癌。

CTR1和ATP7B在人肺腺癌细胞A549的表达及其与顺铂耐药的关系

目的探讨人肺腺癌细胞株A549和肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP对顺铂的耐药机制。方法利用噻唑蓝法检测顺铂对A549/DDP及其亲代细胞株的细胞毒作用和生长曲线的影响,探讨A549/DDP细胞株凋亡敏感性的变化规律。采用Western blot检测该细胞株铜离子转运蛋白1(CTR1)、铜离子转运磷酸化ATP酶(ATP7B)及聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)剪切蛋白表达,分析A549细胞对顺铂耐药与CTR1、ATP7B及PARP剪切蛋白表达量的相关性。结果 A549/DDP较其亲代细胞株对顺铂引起的细胞毒性和凋亡敏感性下降;较其亲代细胞株A549/DDP中ATP7B表达增加,CTR1表达降低。结论人肺腺癌细胞株A549对顺铂耐药的产生与细胞凋亡敏感性降低有关,且细胞内ATP7B表达增加,CTR1表达降低,或可作为细胞对顺铂的增敏靶点。

肝豆状核变性所致精神障碍一例报告

在罕见病领域,肝豆状核变性(Hepatolenticular Degeneration,HLD)又称为威尔逊病(由Wilson于1912年首先报告和描述),是一种常染色体隐性遗传(铜转运ATP酶β,ATP7B)的铜代谢障碍性疾病[1]。该病临床表现复杂,主要以肝损害、精神症状和神经系统病变为特点,易漏诊、误诊。

肝豆状核变性误诊为过敏性紫癜1例

肝豆状核变性是常染色体隐性遗传病。缺陷基因定位于染色体13q14.3,基因产物为P型铜转运ATP酶。基本的生化病变是铜排泄障碍,引起铜在体内各种组织中沉积。肝豆状核变性的首发年龄多见于7～12岁儿童。本病起病隐匿,临床表现复杂多样,首发症状各不相同,临床医生容易误诊。笔者曾遇到1例被误诊为过敏性紫癜,现报告如下。

ATP7B基因突变致肝豆状核变性的分子机制研究进展

肝豆状核变性,即Wilson病,是一种由铜离子转运ATP酶β肽(ATPase Cu2+transporting beta polypeptide,ATP7B)基因突变导致的常染色体隐性遗传的铜代谢障碍性疾病。现归纳总结不同突变的致病机制,包括诱导突变蛋白错误定位、改变蛋白间或结构域间相互作用、调控ATP7B蛋白催化活性、改变ATP7B基因剪接方式等多个方面。临床上,系统总结了常见突变与临床表型间的关联,如p.R778L,被认为与更加严重的临床症状相关;同时,环境、饮食、生活习惯等因素的差异亦可能对患者是否发病或发病时间产生较大影响。在分子层面上对ATP7B基因突变致病机制及所致临床表征的研究进行综述,将有助于加深对肝豆状核变性发病机制的认识,并提示可针对不同的机制采用个性化的诊疗手段,以指导临床实践。

应用规律间隔成簇短回文重复序列及其相关核酸酶9系统核糖核蛋白复合物技术基因修正威尔森氏症的体外研究

目的应用规律间隔成簇短回文重复序列及其相关核酸酶9系统(CRISPR/Cas9)体外实验研究修正威尔森氏症(WD)基因。方法选用来源于DL近交系小鼠的Toxic milk小鼠(购自美国Jackson Laboratory公司)作WD模型,设计3个CRISPR来源的RNA(crRNA)-crRNA001/002/003,应用CRISPR/Cas9核糖核蛋白复合物(RNP)方法转染WD肝细胞,48 h后提取基因组DNA,聚合酶链反应(PCR)后测序检测基因编辑效率,筛选出效率最高者crRNA001,并设计相应的单链寡核苷酸(ssODN)修复模板;用crRNA001和ssODN共转染肝细胞,模板特异性引物行PCR,验证ssODN掺入。组间比较采用Student’S t检验。结果Sanger测序结果显示,crRNA001的编辑效率为(57.8±5.1)%。用ssODN共转染细胞后,模板特异性引物行PCR,能扩增出修正后的铜离子转运ATP酶β肽(ATP7B)基因条带;二代测序结果显示,ATP7B基因修复效率为(7.45±2.54)%。结论CRISPR/Cas9 RNP转染能达到较高编辑效率,相应的ssODN可以高效修复缺陷ATP7B基因,为进一步的体内实验提供理论和实验基础。