类风湿关节炎患者肌骨超声和外周血超氧化物歧化酶、对氧磷酯酶-1表达特征及其相关性分析

目的 探究类风湿关节炎患者肌骨超声和外周血超氧化物歧化酶(SOD)、对氧磷酯酶-1(PON-1)表达特征及其相关性。方法 前瞻性选取2019年4月至2022年4月在太原钢铁(集团)有限公司总医院接受治疗的180例类风湿关节炎患者。均行关节检查,根据28个关节疾病活动指数(DAS28)分组,23例为稳定期(DAS28评分<2.6分),45例患者为轻度活动期(DAS28评分2.6~3.2分),51例患者为中度活动期(DAS28评分3.2~5.1分),61例患者为重度活动期(DAS28评分≥5.1分)。稳定期纳入稳定组,轻度和中度活动期纳入轻中度组,重度活动期纳入重度组。比较各组肌骨超声评分、血清SOD、PON-1水平、膝关节活动度、骨代谢指标[Ⅰ型前胶原羧基端前肽(PⅠNP)、骨保护素、碱性磷酸酶(ALP)]水平,并分析DAS28评分、肌骨超声评分与SOD、PON-1水平的相关性。结果 各组间滑膜增生、血流信号、骨侵蚀、关节积液评分及总分比较,差异均有统计学意义(P<0.05),且随着病情严重程度增加,各评分呈增加趋势。各组间SOD、PON-1水平以及关节活动度比较,差异均有统计学意义(P<0.05),且随着病情严重程度增加,SOD、PON-1水平以及关节活动度呈降低趋势。各组间PⅠNP、骨保护素、ALP水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05),且随着病情严重程度增加,PⅠNP、骨保护素、ALP水平呈降低趋势。经Pearson相关性分析,患者的DAS28与肌骨超声评分呈正相关(r=0.896,P<0.05),与SOD、PON-1水平呈负相关(r=-0.913、-0.703,P<0.05)。肌骨超声评分与SOD、PON-1水平呈负相关(r=-0.850、-0.592,P<0.05),SOD水平与患者的PON-1水平呈正相关(r=0.643,P<0.05)。结论 类风湿关节炎患者病情越严重,其肌骨超声评分越高,血清SOD、PON-1水平越低,具有显著相关性。血清SOD、PON-1水平可以用于类风湿关节炎疾病活动度的评估。

房水中内皮素-1、超氧化物歧化酶与糖尿病视网膜病变患者术后视力残疾的关系

目的分析房水中内皮素(ET)-1、超氧化物歧化酶(SOD)与糖尿病视网膜病变(DR)患者玻璃体切割术后视力残疾的关系,探讨能够改善DR患者术后视力的治疗靶点。方法前瞻性研究。纳入2019年2月至2021年1月在我院眼科接受玻璃体切割术治疗的112例(112眼)DR患者进行研究,以术后随访1年内裸眼视力检查结果进行分组,分为视力残疾组和视力良好组。入院检查项目包括血糖[空腹血糖(FBG)、餐后2 h血糖(2hBG)、糖化血红蛋白(HbAlc)]、肝肾功能[血肌酐(Scr)、总胆红素(TBIL)]、D-二聚体(D-D)、C反应蛋白(CRP)、ET-1、SOD,根据检查结果,分析患者房水中ET-1、SOD及相关指标与DR患者术后1年内视力残疾的关系,并检验房水中ET-1、SOD对DR患者术后1年内视力残疾的预测效能。结果入组的112例DR患者中,随访期间失访2例,退出研究1例,中风死亡1例,剩余108例患者随访时间为4~12个月,28例患者接受裸眼视力检查时诊断为视力残疾,发生率为25.93%。视力残疾组患者重度增生病变占比多于视力良好组,视力残疾组患者血浆D-D、CRP,血清Scr、TBIL水平均高于视力良好组,视力残疾组患者房水中ET-1水平高于视力良好组,视力残疾组患者SOD水平低于视力良好组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。构建Logistic回归模型,重度增生,血浆D-D、CRP高表达,房水中ET-1高表达、SOD低表达均能够增加DR患者术后1年内视力残疾的风险(均为P<0.05)。绘制ROC曲线,房水中ET-1、SOD单独及联合预测术后1年内视力残疾风险的AUC值分别为0.806、0.816、0.870。结论DR患者接受玻璃体切割术治疗后1年容易发生视力残疾,房水中ET-1高表达、SOD低表达均能够增加术后1年内视力残疾的风险,房水中ET-1、SOD能够作为DR患者术后1年内视力残疾的预测因子。

Nafion化学修饰圆盘预富集-石墨炉 原子吸收联用法对牛血超氧化物歧化酶中铜、锌分布状态的研究

本文研究了Nafion化学修饰钨丝圆盘预富集-石墨炉原子吸收(GFAAS)方法测定牛血超氧化物歧化酶(SOD)中游离态Cu～(2+)及Zn～(2+)的方法,并用GFAAS法直接测定SOD中铜、锌的总量,证实了牛血SOD中金属辅基铜、锌原子个数比为1:1,初步探讨了一定浓度的牛血SOD中Cu～(2+)、Zn～(2+)的表观离解平衡常数。为提高SOD的活性和稳定性的研究,提供了一种有效的方法。

人铜锌超氧化物歧化酶(hCu,Zn-SOD)基因在马铃薯中的表达

目的 构建转基因马铃薯植株 ,以便大规模生产人铜锌超氧化物歧化酶 (hCu ,Zn SOD)。方法 采用RT PCR技术从人肝总RNA中分离扩增了hCu Zn SOD基因 ,并将其重组到植物表达载体pPSCuSOD中 ,用三亲交配法将重组质粒pPSCuSOD转化到农杆菌LBA44 0 4,再用农杆菌介导转化马铃薯。结果 经PCR和PCR Southern分析证明hCu Zn SOD基因已整合到马铃薯基因组中。Westernblot分析证明 ,hCu Zn SOD基因已在马铃薯植株中得到表达。NBT光还原法检测转基因马铃薯块茎中的SOD总酶活性为 192 0U g .FW。

氨溴索对吸烟大鼠肺组织激活蛋白-1、铜锌超氧化物歧化酶表达的影响

目的通过研究氨溴索对吸烟大鼠肺组织中激活蛋白-1(AP-1)、铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)表达的影响,探讨氨溴索在慢性阻塞性肺疾病(COPD)抗氧化治疗中的作用及其机制。方法健康雄性Wistar大鼠30只随机分为对照组、吸烟组、氨溴索组,分别采用原位杂交半定量技术、免疫组织化学法和免疫细胞化学法检测支气管上皮细胞及肺泡巨噬细胞中AP-1(c-jun和c-fos亚单位)和CuZn-SOD mRNA及其蛋白的表达水平。结果吸烟组大鼠支气管上皮细胞和肺泡巨噬细胞c-jun、c-fos、CuZn-SOD mRNA及其蛋白表达水平明显高于对照组(均P<0.05);氨溴索组c-jun、c-fos mRNA及其蛋白、CuZn-SOD mRNA表达水平明显低于吸烟组(均P<0.01),而CuZn-SOD蛋白表达水平与其他两组相比无统计学差异(P>0.05)。结论氨溴索可以降低吸烟大鼠肺组织AP-1 mRNA及其蛋白和CuZn-SOD mRNA的表达,其可能通过降低AP-1的表达在COPD治疗中发挥一定的抗氧化作用。

杨梅铜锌超氧化物歧化酶基因(MrCu/Zn-SOD1)的原核表达及活性鉴定

为获得高表达杨梅(Morella rubra)铜锌超氧化物歧化酶(MrCu/Zn-SOD1)的工程菌,本实验采用RT-PCR技术从杨梅果实中分离扩增了MrCu/Zn-SOD1的cDNA序列(456bp),将该基因重组到原核表达载体pGEX-2T中,酶切、测序分析表明,重组质粒pGEX-MrCu/Zn-SOD1结构正确。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达。IPTG诱导表达分子量约41kD融合蛋白GST-MrCu/Zn-SOD1。诱导表达后的菌体超声裂解液经谷胱甘肽亲和层析纯化,得到高纯度的GST-MrCu/Zn-SOD1。采用氯化硝基四氮唑蓝法和黄嘌呤氧化法分析其活性。结果表明,GST-MrCu/Zn-SOD1具有特异性SOD酶活性。

PEP-1介导铜锌超氧化物歧化酶在小鼠顶叶皮质的转导

目的研究细胞穿透肽(cell penetrating peptide,CPP)PEP-1介导铜,锌超氧化物歧化酶(Cu,Zn-superoxide dismutase,SOD1)在小鼠顶叶皮质的转导。方法将150只健康成年昆明小鼠随机分为PEP-1-SOD1组以及SOD1组,分别腹腔注射200μg PEP-1-SOD1或者SOD1蛋白,于给药后1、2、4、8 h以及24 h等5个不同时间点取顶叶皮质行W estern b lotting免疫荧光组化染色以及SOD1活性检测。结果 PEP-1-SOD1组给药后小鼠顶叶皮质出现外源性SOD1蛋白条带,显微镜下观察到转导阳性细胞,并且SOD1活性升高,以上指标均在4h时达到最高峰;SOD1组顶叶皮质任何时间点均未检测到目的蛋白条带,显微镜下未发现转导阳性细胞,皮质SOD1活性无明显变化。结论 PEP-1可以有效介导SOD1以天然活性形式转导进入小鼠顶叶皮质。

红霉素对吸烟大鼠肺组织激活蛋白-1铜锌超氧化物歧化酶表达的影响

目的通过研究红霉素对吸烟大鼠肺组织激活蛋白-1(AP-1)、铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)表达的影响,探讨其在慢性阻塞性肺疾病(COPD)抗氧化治疗中的作用及其机制。方法Wistar大鼠30只,随机分为对照组、吸烟组和红霉素组。分别采用免疫组织化学法、免疫细胞化学法和原位杂交半定量技术检测支气管上皮细胞及肺泡巨噬细胞中AP-1(c-Jun和c-Fos亚单位)和CuZn-SOD蛋白及其mRNA的表达水平。结果吸烟组大鼠支气管上皮细胞和肺泡巨噬细胞c-Jun、c-Fos、CuZn-SOD蛋白及其mRNA表达均高于对照组(P均<0.05);红霉素组c-Jun、c-Fos表达水平明显低于吸烟组(P均<0.01),而CuZn-SOD表达水平明显高于吸烟组(P均<0.01)。结论红霉素可能通过影响AP-1、CuZn-SOD的表达而在COPD治疗中发挥一定抗氧化作用。

老年慢性心力衰竭患者血清8-羟基脱氧鸟苷和锰超氧化物歧化酶水平与认知功能障碍的相关性研究

目的探究老年慢性心力衰竭(CHF)患者血清8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)、锰超氧化物歧化酶(MnSOD)水平与认知功能障碍的相关性,并分析二者对发生认知功能障碍的诊断价值。方法选取2018年7月至2021年12月六盘水市人民医院心内科收治的老年CHF患者128例,根据蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分分为认知功能障碍组(MoCA评分<26分)64例和认知功能正常组(MoCA评分≥26分)64例。收集2组一般资料,检测血清8-OHdG、MnSOD水平;采用Pearson相关性分析老年CHF并发认知功能障碍患者血清8-OHdG、MnSOD水平与MoCA评分的相关性;logistic回归分析老年CHF患者发生认知功能障碍的影响因素;采用ROC曲线分析血清8-OHdG、MnSOD水平对老年CHF患者发生认知功能障碍的诊断价值。结果与认知功能正常组比较,认知功能障碍组受教育年限>12年、LVEF、MoCA评分、血清MnSOD水平均明显降低(P<0.01),血清8-OHdG水平明显升高(P<0.01);老年CHF并发认知功能障碍患者血清8-OHdG水平与MoCA评分呈负相关(P<0.01),血清MnSOD水平与MoCA评分呈正相关(P<0.01);受教育年限、LVEF、MnSOD是影响老年CHF患者发生认知功能障碍的保护因素(P<0.01),8-OHdG是影响老年CHF患者发生认知功能障碍的危险因素(P<0.01);血清8-OHdG和MnSOD联合诊断老年CHF患者发生认知功能障碍的曲线下面积明显高于血清8-OHdG、MnSOD单独诊断[0.952(0.892~0.994)vs 0.863(0.796~0.930)、0.869(0.807~0.935),P<0.05]。结论老年CHF合并认知功能障碍患者血清8-OHdG水平升高,MnSOD水平降低,8-OHdG、MnSOD联合对老年CHF患者发生认知功能障碍具有较好的诊断价值。

小麦超氧化物歧化酶基因家族鉴定及盐胁迫下响应锌钾的表达分析

超氧化物歧化酶(SOD)是抗氧化系统的关键酶,在保护植物免受各种生物和非生物胁迫方面发挥着至关重要的作用。然而关于小麦(Triticum aestivum L.)SOD基因家族对盐胁迫的表达模式及响应锌(Zn)和钾(K)的功能知之甚少。本研究以‘西农979’为试验材料,基于全基因组分析,对小麦SOD家族成员进行鉴定和生物信息学分析,并分析相关基因在盐胁迫下响应Zn、K的表达情况。结果表明,在小麦中共鉴定出10个SOD基因(TaSDs),包括4个Cu/Zn-SOD基因(TaCSD1~TaCSD4)、4个Fe-SOD基因(TaFSD1~TaFSD4)和2个Mn-SOD基因(TaMSD1、TaMSD2)。系统发育分析表明,TaSDs可分为Cu/Zn-SODs、Fe/Mn-SODs两大类,共7个亚组。基因结构、序列基序及启动子分析表明,所有TaSDs都具有1~7个内含子和2~7个外显子,不同TaSDs具有不同的氨基酸序列组成和高度保守的活性位点残基,且每个TaSDs的启动子中存在许多与应激反应和植物激素相关的顺式作用元件。转录组表达谱分析表明,不同TaSDs对盐分表现出不同的表达模式,TaCSD3可能是响应盐胁迫的关键基因;经RT-qPCR分析明确,TaCSD3是响应盐胁迫的靶向SOD基因,同时受Zn、K协同正向调控。本研究结果可为后续小麦耐盐育种改良提供理论依据。

铜锌超氧化物歧化酶(Cu,Zn-SOD)的硅胶吸附分离法

从牛血或猪血的红细胞中提取铜锌SOD的关键步骤是用二乙氨基乙基纤维素将粗SOD进行纯化。我们以水玻璃为主要原料合成了成本极低的硅胶吸附剂,SOD回收率为90％。制品只有一条凝胶电泳带,效果很好,完全可以代替二乙氨基乙基纤维素用于SOD的纯化。

半定量RT-PCR法分析猪肝脏中铜锌超氧化物歧化酶mRNA表达水平

细胞内铜锌超氧化物歧化酶(CuZnSOD)是动物体内一种重要的抗氧化酶。本实验室构建了优化的半定量RT-PCR法,以18S rRNA为内标,研究猪肝脏组织中CuZnSOD基因mRNA表达水平。提取猪肝脏组织总RNA,经反转录后进行扩增,先寻求PCR线性扩增范围,确定RT-PCR的最佳循环数和Mg2+浓度。扩增后用VDS摄像系统扫描PCR扩增产物的电泳条带灰度。通过CuZnSOD PCR产物的灰度与18S rRNA PCR产物的灰度之比,即可计算出CuZnSOD mRNA的相对含量。

邻苯三酚自氧化法测定甲烷氧化菌素-铜配合物的超氧化物歧化酶活性

目的建立甲烷氧化菌素(methanobactin,Mb)-铜配合物(Mb-Cu)模拟超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的邻苯三酚自氧化体系分析方法。方法利用HP 20大孔树脂从甲基弯菌IMV301l发酵液中分离纯化得到Mb,制备Mb-Cu测定其具有的SOD活性,利用紫外光谱分析对SOD邻苯三酚测活法进行系统研究。考察缓冲液浓度、邻苯三酚浓度、Mb-Cu浓度、EDTA-Na_2浓度、pH值和温度等对Mb-Cu模拟SOD活性的影响。结果在Mb-Cu浓度为0.8 mg/L,Tris-HAC缓冲溶液为0.05 mol/L(其中缓冲溶液的pH值为8.2、EDTA-Na_2的浓度为2 mmol/L),邻苯三酚浓度为0.363 mmol/L,温度为20℃时,邻苯三酚的自氧化速率相对较低,此时Mb-Cu对超氧阴离子自由基(O_2^-.)的抑制率较高,以此建立Mb-Cu模拟SOD活性的邻苯三酚自氧化分析方法。发现Mb-Cu符合影响生物催化剂条件的一般规律,但比生物酶具有更高的热稳定性。结论Mb-Cu可作为清除O_2^-.的SOD模拟酶,本试验建立的分析条件是最佳反应体系。

离子淌度质谱结合荧光光谱法研究5-氟尿苷与铜锌超氧化物歧化酶的相互作用

分别利用离子淌度质谱和荧光光谱方法研究了5-氟尿苷(5-Furd)与铜锌超氧化物歧化酶(SOD1)的相互作用.离子淌度质谱研究结果表明,5-Furd能够稳定SOD1构型,减缓其碰撞诱导去折叠;外源荧光光谱方法进一步证明5-Furd可以抑制SOD1的聚集.利用荧光光谱研究了不同温度下5-Furd与SOD1的相互作用,阐明了二者的作用机制、结合常数和结合位点数,并根据热力学函数推断二者的作用力类型为典型的疏水作用.

血清铜锌-超氧化物歧化酶对原发性肝细胞癌的诊断价值

随着自由基医学的发展,超氧化物歧化酶(SOD)与肿瘤的关系引起人们的关注。作者采用化学发光免疫分析法和化学发光分析技术,分别对临床确诊的肝癌患者36例和肝硬变患者19例血清铜锌-超氧化物歧化酶含量(CuZn-SOD-C)、免疫学性质改变的CuZn-SOD含量(CuZn-SOD-I。

阿司匹林联合硫酸镁对妊娠期高血压疾病患者超氧化物歧化酶和内皮素-1水平的影响

目的探讨阿司匹林联合硫酸镁治疗妊娠期高血压的效果及对患者内皮素-1(ET-1)、超氧化物歧化酶(SOD)的影响。方法选取2019年1月至2020年12月肥城市人民医院产科接诊的88例妊娠期高血压患者作为研究对象,按照随机数字表法分为对照组与观察组,每组44例。对照组在常规治疗基础上辅以硫酸镁治疗,观察组在常规治疗基础上联合阿司匹林与硫酸镁治疗,比较两组临床疗效、用药前及分娩前血压(舒张压、收缩压)、ET-1、SOD水平及不良妊娠结局。结果观察组治疗总有效率为95.45%,高于对照组的77.27%,差异有统计学意义(P<0.05);分娩前,观察组舒张压、收缩压、ET-1水平均低于对照组,SOD水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组不良妊娠结局发生率为2.27%,低于对照组的18.18%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论阿司匹林联合硫酸镁可有效控制妊娠期高血压患者的血压水平,降低血清ET-1水平,提高血清SOD水平,改善分娩结局,值得临床推广应用。

实验性吸烟大鼠支气管肺组织中激活蛋白-1与铜锌超氧化物歧化酶表达的研究

目的观察不同吸烟时间大鼠支气管上皮细胞铜锌超氧化物歧化酶(Cu-Zn SOD)和激活蛋白-1(AP-1)mRNA及其蛋白的表达水平以及二者的相关性,探讨激活蛋白-1(AP-1)在吸烟所致慢性阻塞性肺疾病(COPD)氧化/抗氧化失衡中的作用。方法自制大鼠实验性被动吸烟装置,建立吸烟引起慢性阻塞性肺疾病的动物模型,将40只大鼠随机分为不吸烟组、吸烟1月组、吸烟2月组、吸烟3月组,每组各10只。分别采用免疫组织化学法和原位杂交半定量技术检测支气管上皮细胞Cu-Zn SOD和AP-1(c-fos和c-jun)mRNA及其蛋白的表达水平。结果吸烟3月组大鼠出现了肺气肿的病理改变。吸烟各组大鼠支气管上皮细胞c-fos、c-jun mRNA及其蛋白的表达水平均较不吸烟组明显增高,差异有显著性(P<0.01),吸烟各组间比较差异亦有显著性(P<0.01);吸烟各组大鼠支气管上皮细胞Cu-Zn SOD mRNA及其蛋白的表达水平均较不吸烟组明显增高,差异有显著性(P<0.01),2月组较1月组增高,差异有显著性(P<0.01),3月组和2月组无明显差异,无统计学意义。结论随着吸烟时间的延长,大鼠支气管上皮细胞中c-fos和c-jun二者的表达逐渐增高,并且呈正相关,Cu-Zn SOD在吸烟1月和2月时表达较高,在吸烟3月时略有下降。提示AP-1在吸烟所致COPD氧化/抗氧化失衡中可能发挥重要的作用。

蛋白转导结构域4-铜/锌-超氧化物歧化酶融合蛋白的制备及其穿细胞膜的功能研究

目的拟构建蛋白转导结构域(PTD)4-铜/锌-超氧化物歧化酶(Cu/ZnSOD)原核表达质粒,纯化制备PTD4-Cu/ZnSOD融合蛋白,探讨其穿膜能力。方法设计合成hCu/ZnSOD引物,扩增hCu/ZnSOD cDNA片段;采用PCR靶向克隆法将扩增产物与含有相同酶切位点载体质粒PET16b-PTD4进行重组,扩增质粒,双酶切鉴定和DNA测序;获得PET16b-PTD4-Cu/ZnSOD(CDs)原核表达载体,导入感受态E.coli BL21(DE3)中,进行扩增培养,收集菌体,将其裂解离心、Ni_2^+亲和层析、收集目的蛋白。融合蛋白孵育人心肌细胞,免疫荧光法检测融合蛋白穿膜能力。结果通过测序证实实验扩增所得的PTD序列与设计的预期序列一致。设计并简并PTD4-Cu/ZnSOD基因长度为567 bp,通过引物进行正反向测序证实该序列与已被登录的GENBANK中Cu/ZnSOD序列相一致,并构建了相应的原核表达质粒。并在E.coli BL21进行大量表达,最终收集的PTD4-Cu/ZnSOD具有良好水溶性。SDS-page分析显示构建的PTD4-Cu/ZnSOD分子量约为20 kDa,与预期的蛋白分子量20.45 kDa相符合。融合蛋白可以穿透心肌细胞胞膜,进入细胞后主要分布在胞质和胞核内并具有天然活性。结论成功地构建了PET16bPTD4-Cu/ZnSOD原核表达质粒,获得了可穿透心肌细胞膜的PTD4-Cu/ZnSOD融合蛋白,为应用Cu/ZnSOD治疗缺血性疾病的研究奠定了基础。

莲铜锌超氧化物歧化酶cDNA的克隆和序列分析

用RT—PCR方法，从中国莲（Nelumbo nucifera）幼叶cDNA中成功扩增出铜锌超氧化物歧化酶（CuZnSOD）全长序列，并进行测序分析．该cDNA序列全长461bp，包括起始密码子和终止密码子．其中编码区段为456bp，共编码152个氨基酸，其编码蛋白的相对分子质量为1．552×10^4，等电点为4．515．与GenBank中其他物种的CuZnSOD进行同源性比较，发现其核苷酸序列相似性高达80％～86％，氨基酸序列相似性达89％～94％．所有已知的CuZnSOD的关键活性位点在该蛋白中均保守存在．将其与一些典型的单子叶和双子叶植物的该蛋白进行进化树分析，为富有争议的莲的系统学地位的确定，在分子生物学上为莲的系统学地位的确定提供了一个依据．该基因已在GenBank登记，序列号为DQ227345．