人2型大麻素受体过表达诱导宫颈癌Caski细胞凋亡

目的构建人2型大麻素受体(h CB2R)基因真核表达载体,探讨h CB2R在细胞中的表达、定位以及h CB2R对宫颈癌Caski细胞的生长的影响及机制。方法构建GV230-h CB2R质粒,经双酶切、测序鉴定后,转染HEK293细胞和Caski细胞,Western blot法及免疫荧光细胞化学染色联合激光扫描共聚焦显微镜技术检测CB2R表达及细胞定位;流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法及实时荧光定量PCR检测h CB2R、Bcl-2、Bax、Bad的表达。结果双酶切获得1128 bp的目的片段,测序结果与h CB2R基因注册序列(NM_001841.2)的同源性为99%;转染HEK293细胞后,可表达相对分子质量(Mr)40 000的h CB2R蛋白,HEK293细胞膜和细胞质中均有CB2R表达;过表达的CB2R,可上调Bax、Bad的表达,抑制Bcl-2的表达,促进宫颈癌Caski细胞凋亡。结论上调Caski细胞h CB2R表达可增强Bax、Bad表达,抑制Bcl-2表达,诱导细胞凋亡。

大麻素2型受体激活对钛颗粒诱导成骨细胞凋亡的干预作用

背景:成骨细胞凋亡而导致的成骨减少是最终假体松动的重要原因,大麻素2型受体的激活可促进成骨细胞的增殖,减少细胞凋亡率的发生。目的:探讨钛颗粒负荷下,大麻素2型受体激动剂HU-308对成骨细胞株MC3T3-E1凋亡的抑制作用及保护机制。方法:将体外培养的小鼠成骨细胞MC3T3-E1分5组培养,空白对照组以常规细胞培养基培养;钛颗粒组以含2.5 g/L钛颗粒的细胞培养基培养;低浓度药物组以含2.5 g/L钛颗粒+10^(-9) mol/L HU-308的细胞培养基培养;中浓度药物组以含2.5 g/L钛颗粒+10^(-8) mol/L HU-308的细胞培养基培养;高浓度药物组以含2.5 g/L钛颗粒+10^(-7)mol/L HU-308的细胞培养基培养。培养48 h,检测各组细胞增殖活性、凋亡、细胞内活性氧水平、线粒体膜电位水平及Caspase-3活性。结果与结论:(1)与空白对照组比较,钛颗粒组细胞增殖活性、线粒体膜电位水平明显下降(P<0.01或P<0.05),凋亡率、细胞内活性氧水平、Caspase-3活性明显升高(P<0.01或P<0.05);(2)与钛颗粒组比较,高浓度药物组细胞增殖活性、线粒体膜电位水平升高(P<0.05),中、高浓度药物组细胞凋亡率、细胞内活性氧水平、Caspase-3活性降低(P<0.01或P<0.05);(3)结果表明,HU-308能有效逆转钛颗粒对MC3T3-E1成骨细胞活性的抑制及促凋亡作用,而这些保护作用可能是HU-308通过调节细胞内活性氧水平、提升线粒体膜电位水平及Caspase-3活性来实现的。

上调2型大麻素受体诱导子宫颈癌HeLa细胞凋亡

目的:通过构建基因真核表达载体,探讨人2型大麻素受体(human cannabinoid receptor 2,hCB2R)对人子宫颈癌HeLa细胞体外凋亡的作用及机制。方法:选用人脑组织的cDNA作为模板,进行hCB2R基因的RT-PCR扩增,构建重组质粒GV230-h CB2R及其对照空质粒GV230并转染HeLa细胞,Western blotting法及免疫荧光细胞化学染色联合激光扫描共聚焦显微镜技术检测h CB2R表达及细胞内定位;流式细胞术检测He La细胞凋亡,Western blotting法及实时荧光定量PCR检测HeLa细胞中hCB2R、Bcl-2、Bax、Bad的表达。结果:与空质粒转染组相比,GV230-hCB2R转染HeLa细胞后表达相对分子质量40 000的hCB2R蛋白,且细胞膜和细胞质中均有hCB2R的表达;GV230-hCB2R转染组的细胞凋亡率显著高于GV230空质粒对照组[(14.51±4.51)%vs(6.29±0.57)%,t=1.72,P<0.05];与空质粒对照组相比,h CB2R转染组细胞内Bax和Bad的表达水平明显上调(P<0.05),而Bcl-2的表达明显下调(P<0.05)。结论:hCB2R对子宫颈癌HeLa细胞的生长表现出明显的抑制作用,其作用机制可能与hCB2R直接参与了细胞凋亡相关蛋白的表达变化有关。

大麻素2型受体激动剂JWH133对人永生化角质形成细胞体外增殖以及细胞因子表达影响的研究

目的探讨JWH133对人永生化角质形成细胞CHaCaT细胞)体外增殖以及经肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导后细胞因子表达的影响。方法首先用不同浓度JWH133(15、30、60μmol/L)分别作用于HaCaT细胞。采用CCK-8法检测JWH133作用12、24、36 h后对HaCaT细胞体外增殖的影响,流式细胞仪检测JWH133对HaCaT细胞凋亡率的影响。其次采用抗体芯片检测技术分别检测20 ng/ml TNF-α组、20 ng/ml TNF-α.+30μmol/L JWH133组中细胞因子表达的变化,并采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验CELISA)法进行定量分析,以验证抗体芯片检测结果的可靠性。结果15、30、60μmol/L JWH133作用12、24、36 h后对HaCaT细胞体外增殖均有不同程度的抑制作用。随着时间延长和JWH133浓度的增加,JWH133对HaCaT细胞体外增殖的抑制作用均逐渐增强(F=187.1、2678.9,P<0.05)。60μmol/LJWH133作用24h后,凋亡率由(4.34±0.07)%(阴性组〕增加至(21.77±0.40)%(JWH133组)(P<0.05)。20 ng/ml TNF-α能够诱导HaCaT细胞不同程度增加白细胞介素19CIL”19)、IL-22、IL-23等细胞因子的高表达,而30μmol/L JWH133处理后可降低上述细胞因子的表达。结论大麻素2型受体激动剂JWH133可抑制HaCaT细胞体外增殖、促进凋亡,且能够抑制TNF-α诱导的HaCaT细胞中一些重要免疫分子的表达。

1,6二磷酸果糖下调血管紧张素Ⅱ受体2表达保护糖尿病大鼠心肌

目的 研究血管紧张素Ⅱ受体2型(AT2) 及1, 6 -二磷酸果糖对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法建立Wistar大鼠2型糖尿病心肌病模型。将等容舒张期左室内压下降的最大速率(-dp/dtmax) ≤700 mmHg/s的糖尿病大鼠(24只) 分组: 糖尿病对照组(7只), 用等量的双蒸水腹腔注射; AT2 激动剂组(8 只), 腹腔注射AT2激动剂(CGP42112A); 果糖组(9只), 腹腔注射1, 6二磷酸果糖。另设胰岛素抵抗组(7 只), 仅给予等量枸橼酸钠缓冲液(pH=4. 5) 腹腔注射。以上注射每天1次连续4周。记录心脏重量, 通过凋亡试剂盒检测心肌细胞凋亡指数, 逆转录聚合酶链反应法(RT- PCR) 检测心肌细胞AT2 和bcl- 2 mRNA量, 免疫组化染色法检测心肌细胞AT2和Bcl -2蛋白表达量。结果 AT2激动剂组、果糖组和糖尿病对照组的-dp/dtmax分别显著低于胰岛素抵抗组(均P<0 .01), 而心肌细胞凋亡指数、AT2的mRNA量和蛋白质表达量及心脏重量却分别显著高于胰岛素抵抗组(均P<0 .01); 心肌细胞凋亡指数及AT2 的mRNA量和蛋白质表达量AT2 激动剂组>糖尿病对照组>果糖组(均P<0 01); 各组Bcl 2变化正好与AT2变化相反。结论 AT2高表达促进糖尿病大鼠心肌细胞的凋亡, 是糖尿病心肌病的重要促发因素之一, 1, 6-二磷酸果糖通过下调AT2表达保护糖尿病大鼠心?

人2型大麻素受体表达诱导人宫颈癌细胞凋亡的研究

目的通过构建基因真核表达载体,探讨人2型大麻素受体(h CB2R)对人宫颈癌He La细胞体外凋亡的作用及机制。方法构建GV230-h CB2R质粒,经双酶切、测序鉴定后,转染He La细胞,Western blot法及免疫荧光细胞化学染色联合激光扫描共聚焦显微镜技术检测h CB2R表达及细胞定位;流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法及实时荧光定量PCR检测h CB2R、Bcl-2、Bax、Bad的表达。结果 h CB2R转染He La细胞后表达相对分子质量(Mr)40 000的h CB2R蛋白,细胞膜和细胞质中均有h CB2R表达;过表达的h CB2R,可上调Bax、Bad的表达,抑制Bcl-2的表达,流式细胞术检测结果显示细胞株呈现凋亡,h CB2R对宫颈癌He La细胞株的生长表现出明显的抑制作用,促进宫颈癌He La细胞凋亡。结论上调He La细胞h CB2R表达可增强Bax、Bad表达,抑制Bcl-2表达,诱导细胞凋亡。

丹红注射液保护糖尿病心肌病大鼠心肌细胞分析

目的研究血管紧张素II受体2型(AT2)及丹红注射液对糖尿病心肌病大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法建立Wistar大鼠2型糖尿病心肌病模型。将等容舒张期左室内压下降的最大速率(-dp/dtmax)≤5250mmHg/s的糖尿病大鼠(31只)分组:9只用双蒸水腹腔注射,为心肌病非干预组;12只通过腹腔注射AT2激动剂(CGP42112A,用三蒸水溶解,加30%乙酸使pH=6.0,4μg/kg),为激动剂组;10只腹腔注射丹红(5ml/kg),为丹红组。以上注射每天1次,连续4周。记录心脏重量,通过凋亡试剂盒检测心肌细胞凋亡指数,逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测心肌细胞AT2和Bcl-2mRNA量,免疫组化染色法检测心肌细胞AT2和Bcl-2蛋白表达量。结果AT2激动剂组和心肌病非干预组-dp/dtmax分别显著低于丹红组(均P<0.01),而心肌细胞凋亡指数、AT2的mRNA量和蛋白质表达量及心脏重量却分别显著高于丹红组(均P<0.01);各组Bcl-2变化正好与AT2变化相反。结论AT2高表达促进糖尿病心肌病大鼠心肌细胞的凋亡,是糖尿病心肌病的重要促发因素之一,丹红注射液通过下调血管紧张素II受体2表达保护糖尿病心肌病大鼠心肌细胞。