孑遗植物银杏(Ginkgo biloba L.)伴性光合生理特征与进化生态

银杏类是一类古老的雌雄异株植物,目前仅存单科单属。由于银杏在系统发育等方面的独特地位,吸引了科学家从不同方面进行了广泛的研究。在适宜的条件下,测定了生长在野外环境下的成年银杏的雌雄个体的光合特性。研究结果表明,银杏的雌雄植株对光具有相同的表现趋势,光饱和点,光补偿点,光下呼吸速率等均没有明显差异。但是雌性银杏的净光合速率明显大于雄性银杏的净光合速率。这种差异可能与雌性个体在繁衍后代时需要投入更多的能量有关。研究也表明,在与其它的裸子植物和被子植物比较时,银杏的光合能力并没有明显的弱势,因此光合能力可能并不是银杏在第三纪分布受限的直接原因.

蔗糖及天然有机物对银杏愈伤组织合成黄酮的影响

研究了蔗糖和其它5种有机附加物对银杏愈伤组织生长及黄酮积累的影响。结果表明:供试浓度30 g/L蔗糖最有利于愈伤组织生长,60 g/L蔗糖加入培养基中黄酮含量最高;10 mL/L椰乳、1 mL/L芦荟汁、15 mL/L蜂蜜、50 mL/L银杏胚乳汁能促进愈伤组织生物量的提高,而银杏叶汁对愈伤组织生长作用不明显;200 mL/L椰乳、5 mL/L芦荟汁、1 mL/L蜂蜜、32.6 mL/L银杏叶汁能有效提高黄酮含量,但银杏胚乳汁的作用不明显。

银杏液体悬浮细胞培养产生黄酮的研究

为探索银杏液体悬浮细胞培养条件下产生黄酮的工艺条件,以银杏液体悬浮系为试验材料,在250 mL的三角瓶中装入80 mL液体培养基,置于25℃,100 r/min转速下摇床培养,试验设计分别为光照与黑暗、培养时间、细胞聚集体的大小、前体物对银杏液体悬浮细胞系产生黄酮的影响。结果表明:光照条件下培养14 d黄酮含量最高,3～4 mm粒径的细胞聚集体是黄酮合成的适宜细胞聚集体,前体物L-苯丙氨酸和乙酸钠对黄酮合成无明显的促进作用,且对细胞生长有抑制作用。结论:初步探索到银杏液体悬浮细胞培养条件下产生黄酮的工艺条件,为银杏细胞悬浮培养工业化生产黄酮类物质提供一定的理论基础和技术参数。

微生物法提取马齿苋和银杏叶黄酮及其抗氧化活性研究

采用乙醇和微生物的方法对马齿苋(Portulaca oleracea L.)和银杏(Ginkgo biloba L.)叶进行黄酮的提取,并测定粗提液对DPPH自由基的清除作用。结果表明,乙醇提取马齿苋和银杏叶黄酮的提取率分别为2.00%和4.37%,微生物提取马齿苋和银杏叶黄酮的提取率分别为2.07%和4.84%。马齿苋和银杏叶微生物提取液对DPPH自由基的清除作用在相同的稀释倍数下高于乙醇提取液,表明微生物提取植物中黄酮具有一定的可行性和优越性。

银杏叶愈伤组织培养及黄酮积累的正交实验优化

采用正交实验研究了基本培养基、NAA浓度、6-BA浓度、植酸(PA)浓度对银杏叶愈伤组织继代培养及黄酮积累的影响,并测定了愈伤组织生长曲线。结果表明,银杏叶愈伤组织继代培养的最佳组合为:基本培养基N6,NAA1.0mg·L-1,6-BA1.0mg·L-1,0.05%PA。各因素对愈伤组织生长影响的主次顺序为:NAA浓度>基本培养基>PA浓度>6-BA浓度;愈伤组织黄酮积累量最佳组合为:基本培养基B5,NAA1.0mg·L-1,6-BA1.0mg·L-1,0.3%PA,各因素对愈伤组织黄酮积累量影响的主次顺序为:PA浓度>基本培养基>NAA浓度>6-BA浓度。愈伤组织生长曲线基本呈"S"型。

银杏叶中总黄酮的提取工艺和含量测定的研究

[目的]研究银杏叶黄酮类成分的提取和含量测定方法。[方法]对银杏叶中总黄酮的乙醇提取法和超声提取法进行研究并加以改进,通过单因素试验确定银杏叶总黄酮的最佳提取工艺条件。以显色法测定提取液中总黄酮的含量,并对显色测定法进行改进。[结果]超声提取法提出率为0.83%,索氏提取法提出率为1.10%,超声提取与索氏提取结合法提出率为1.37%。最佳提取条件为:超声时间20 min、乙醇浓度60%、料液比1∶50(g/ml)、85℃下加热回流提取2 h。[结论]优选出银杏叶中总黄酮的最佳提取工艺,为进一步研究和应用提供依据。

银杏叶及野生榛蘑中硒的分布研究

探讨了银杏(Ginkgo biloba)叶及野生榛蘑(Armillaria mellea)中不同溶解态硒的含量分布。比较了2种植物在热水、0.1 mol/L的醋酸溶液、盐酸溶液、EDTA溶液以及氯化镁溶液中硒的浸出率。结果表明,浸提能力的大小不仅取决于浸提的方法,而且还受到浸提溶剂的极性以及浸提时间等因素影响。

银杏愈伤组织诱导初步研究

以银杏(Ginkgo biloba)的嫩叶为外植体,以MS为基本培养基,探讨了6-BA、KT及NAA不同配比组合在愈伤组织诱导中的作用。结果表明,MS+NAA 2 mg/L+KT 0.1 mg/L培养基诱导的银杏愈伤组织生长量多,呈浅黄绿色、颗粒化明显、排列疏松,效果较好。

银杏MECT基因启动子克隆及序列分析

以前期获得的银杏(Ginkgo biloba L.)MECT基因的c DNA序列为模板,通过设计特异性引物及采用染色体步移的方法从银杏基因组中克隆到Gb MECT翻译起始位点上游982 bp的启动子序列,研究银杏MECT基因启动子的结构及功能特点。生物信息学分析结果表明,该启动子序列中含有多种类型的顺式作用元件,主要有典型的光响应调节元件、激素响应调控元件、抗病虫害响应元件TGTCA序列、抗损伤应答元件ERF3和热激响应元件HSE等。此外,在该启动子片段中还含有氧胁迫和铜离子响应元件、淀粉酶响应元件等其他类型的作用元件,充分体现了启动子对基因表达调控具有转录水平上的高效性和复杂性的特点。

银杏链格孢菌生物学特性研究

采用含不同植物叶片汁液的培养基对银杏(Ginkgo biloba)链格孢菌(Alternaria sp.)进行离体培养,并设定加糖和不加糖2组处理,对银杏链格孢菌生物学特性进行了初步研究。结果表明,2组试验菌丝生长速率与分生孢子产生的趋势基本一致:加糖处理的生长情况明显好于不加糖处理;而含玉米、水稻、豇豆、花生等植物叶片汁液的培养基生长情况较好,而以含银杏、丝瓜叶片汁液培养基生长情况较差。病菌菌丝体在散射光照射及黑暗条件下生长较快,直射光下生长较慢;分生孢子在缺少光照或黑暗条件下萌发率较高。菌丝体生长的适宜pH为5～8;分生孢子萌发的适宜pH为6～8。菌丝体生长的适宜温度为20～30℃;分生孢子萌发的适宜温度为25～30℃。菌丝体在相对湿度50%～100%范围内均可生长;相对湿度达90%以上时,分生孢子才能萌发。室内毒力测定表明,以烯唑醇对菌丝生长的抑制率最高,其毒力回归方程的相关系数及EC50值分别为0.985和0.17ai.μg/mL,多菌灵、福美双毒力中等。

微波辅助提取银杏叶中多糖类化合物工艺研究

采用微波辅助提取银杏叶中多糖类化合物,在考察单因素料液比、微波时间、微波功率、提取次数的基础上,正交设计了前三个因素,得到最佳提取条件为:料液比1:30,微波时间4min,微波功率900 W,在此条件下,银杏叶中多糖类化合物得率为14.72%.

银杏内生真菌的分离纯化及抑菌性的鉴定

采用组织分离法从银杏(Ginkgo biloba)健康组织中分离得到25株内生真菌,根据菌株在PDA培养基上的培养特征,5株被鉴定为链孢霉菌属、4株为酵母属、4株为曲霉属,3株为毛霉属、3株为青霉属,2株为根霉属,1株为简梗孢霉属,3株分离菌株不产孢子。测定25株内生真菌对3种受试指示菌的抑制作用,共筛选得到11株至少对一种指示菌的生长有抑制作用的菌株,对抑菌活性较强的菌株进行形态学和显微分析鉴定。

生态因子对银杏叶产量和黄酮含量的影响

通过盆栽模拟试验,研究光照条件、土壤养分、土壤水分等因子对叶用银杏主要经济指标(叶产量、叶黄酮含量和产量)的影响。结果表明:随光照增强、土壤水分和土壤养分水平的升高,银杏产叶量升高。光照、土壤水分和土壤养分水平对银杏叶黄酮含量和单位营养空间黄酮总产量存在显著影响。光照越强、土壤水分和土壤营养水平越高,银杏黄酮含量和单位营养空间黄酮总产量越高。

复方银杏叶注射剂(冻干)对脑缺血的保护作用

目的:研究复方银杏叶注射剂对脑缺血的保护作用。方法:小鼠断头形成急性脑缺血模型观察断头后张口喘气的时间和次数;电凝大鼠一侧大脑中动脉造成局灶性脑缺血(MCAO),观察复方银杏叶注射剂对大鼠行为、脑梗塞面积、脑含水量、神经元坏死指数的影响;利用结扎大鼠双侧颈总动脉形成缺血再灌注模型,观察对脑含水量、脑组织ATP酶的活性、LPO含量的影响。结果:复方银杏叶注射剂165、110mg/kg能明显延长断头张口小鼠喘气时间;110、55mg/kg降低或改善MCAO大鼠行为障碍,脑梗塞范围,脑含水量及神经元坏死指数;110mg/kg降低缺血再灌注大鼠脑含水量,能明显提高脑组织ATP酶活性,减少过氧化脂质LPO的生成。结论:复方银杏叶注射剂对实验性脑缺血具有明显保护作用。

银杏丛枝菌根及其与土壤有效磷的关系

以田间栽培的12a生银杏(Ginkgo biloba)实生苗"家佛手"和本砧嫁接的"家佛手"嫁接苗为试材,观察根系丛枝菌根的状况及其与土壤有效磷的关系。结果表明,丛枝菌根在银杏根系中是一种普遍现象,但侵染强度和菌根结构状况较差。嫁接苗根系侵染程度、侵染强度、泡囊数和侵入点均显著高于实生苗,但土壤有效磷显著低于实生苗。土壤有效磷与侵染程度、侵染强度、侵入点间呈显著/极显著负线性相关关系。由此提示,在未来银杏嫁接苗栽培上根系丛枝菌根的状况应该成为一个关注对象。

银杏4-香豆酸辅酶A连接酶基因的克隆与序列分析

根据银杏(Ginkgo biloba L.)转录组中的基因序列设计引物,从银杏中克隆到了4-香豆酸辅酶A连接酶(4-coumarate:CoA ligase,4CL)的cDNA片段,命名为Gb4CL,GenBank登录号为KU820947。Gb4CL全长1736bp,含有1个1671bp的ORF,编码557个氨基酸。核苷酸和蛋白质序列多重比较结果显示,Gb4CL与其他植物的4CL基因的核苷酸与蛋白质序列均高度同源。Gb4CL编码的蛋白质与日本柳杉(Cryptomeria japonica)、白豆杉(Pseudotaxus chienii)、北美云杉(Picea sitchensis)的4CL氨基酸同源性分别为82%、83%、80%。4CL系统进化树显示,Gb4CL与裸子植物亲缘关系最近。该研究通过克隆Gb4CL基因,并进行相关的生物信息学分析,可为掌握银杏木质素生物合成中关键基因的调控机理提供参考。

药用矮化银杏引种栽培试验初报

试验研究了不同栽培品种、不同栽培密度、不同覆盖方式对药用矮化银杏(Ginkgo biloba L.)成活率、生长势及田间控草效果的影响,同时还通过间作种植(玉米、毛豆)研究了药用矮化银杏苗圃提高育苗成活率、壮苗率的方式。结果表明,药用矮化银杏建园时,避免强光直射地域,选择大佛手、恩施银杏等品种,可有效缩短移栽缓苗期、提高成活率;药用矮化银杏园利用黑塑料膜覆盖可有效防止杂草,节约成本;在药用矮化银杏苗圃间作玉米,可提高银杏育苗成活率、壮苗率,增加收入。

银杏叶片愈伤组织诱导的激素组合培养条件分析

以银杏(Ginkgo biloba L.)叶片外植体为试材,研究了不同激素组合培养条件对银杏叶片外植体脱分化诱导愈伤组织的效果。结果表明,不同激素组合培养条件对银杏叶片外植体启动脱分化(膨大)的效应极显著,且膨大率与膨大速度之间具有良好的一致性;不同培养条件对银杏叶片外植体愈伤组织诱导形成的效应极显著,且愈伤组织的诱导率与诱导速度之间具有较好的协同性;综合各项测量指标,当培养基中激素组合为MS+2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L NAA+0.3 mg/L 6-BA+1.0 mg/L KT时,银杏叶片诱导愈伤组织诱导效果相对最佳。

大孔树脂分离对银杏外种皮多酚抗氧化及抑菌活性的影响

以银杏(Ginkgo biloba L.)外种皮为原料,乙醇回流提取粗多酚,选择D-101型大孔树脂纯化,分别用30%、50%、70%、90%乙醇洗脱,考察不同洗脱物的多酚含量及抗氧化抑菌活性,研究大孔吸附树脂纯化对银杏外种皮多酚抗氧化及抑菌活性的影响。结果表明,90%乙醇洗脱物多酚含量最高,抗氧化活性最强。胡萝卜汁产生菌的抑菌结果表明,90%乙醇洗脱物的抑菌活性明显高于粗提物。D-101型大孔树脂适用于银杏外种皮多酚的初步纯化。

32个银杏品种的RAPD遗传多态性及其分类

以32个银杏(Ginkgo bilobaL.)品种的鲜叶为材料,提取其总DNA,从56个随机引物中筛选出8个单引物和4对双引物进行RAPD扩增.以随机扩增多态性DNA(RAPD)标记方法进行遗传多样性分析,用NTSYS-pc2.10e软件计算样品间的Dice相似性系数,并按UPGMA法进行了聚类分析.结果表明,8个单引物和4对双引物扩增共得到85个位点,其中81个(95%)是多态性的,说明供试样品在DNA水平上有很高的遗传多样性.32个供试的样品可分为两大类,北京梅核、南雄上矽(雄)、华口大白果为一类,其它的为第二类.在四个泰兴品种中泰兴2号和泰兴3号的相似性系数为0.968,表明它们的遗传关系比较近.本研究在分子生物学方面为银杏的品种分类和遗传多样性提供了一些新依据.