银杏内酯B调控JAK2/STAT3信号通路对食管癌细胞增殖及凋亡的影响

为研究银杏内酯B对食管癌细胞增殖和凋亡的作用及相关机制,采用体外培养人食管癌OE19细胞,将其分为对照组(不做干预)、低/中/高剂量试验组(分别加入6.25、12.50、25.00μmol/L银杏内酯B)、银杏内酯B组(12.50μmol/L银杏内酯B)、阳性药物组(4 mg/L顺铂)、抑制剂组[12.50μmol/L银杏内酯B+10.00μmol/L Janus激酶2/转录激活因子3(JAK2/STAT3)通路抑制剂AG490]、激活剂组(12.50μmol/L银杏内酯B+0.50μmol/L JAK2/STAT3通路激活剂Colivelin),干预24 h后,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法、Hoechst 33258染色法、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(WB)法检测细胞的活力、增殖率、凋亡率及相关因子的表达水平。结果显示,与对照组相比,中/高剂量试验组与阳性药物组的细胞活力降低(P<0.05),因此,本研究选择有显著差异且较低浓度的12.50μmol/L银杏内酯B作为银杏内酯B组进行后续试验。与对照组相比,银杏内酯B组和阳性药物组细胞的增殖率、Cyclin D1的mRNA和蛋白质、p-JAK2、p-STAT3蛋白的表达水平降低,凋亡率、Caspase-3的mRNA和蛋白质的表达水平升高(P<0.05)。与银杏内酯B组相比,抑制剂组各指标变化进一步增强(P<0.05),激活剂组则显著逆转了上述指标的变化(P<0.05)。银杏内酯B能够通过下调JAK2/STAT3信号通路抑制OE19细胞的增殖,促进食管癌细胞凋亡。本研究揭示了银杏内酯B新抗癌机制,为食管癌的研究提供了理论依据。

银杏二萜内酯葡胺在超时间窗AIS中的治疗效果及对患者血清TLR4/NF-κB信号通路因子水平的影响

目的观察银杏二萜内酯葡胺(GDLG)治疗超时间窗急性缺血性脑卒中(AIS)的效果,并探讨其对患者血清Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路因子水平的影响。方法选取2020年1月至2023年1月郑州大学第一附属医院收治的170例超时间窗AIS患者作为研究对象,采用电脑随机数表法分为对照组和研究组各85例。对照组患者给予常规治疗,研究组患者在常规治疗基础上给予GDLG治疗,均持续治疗两周。比较两组患者的治疗效果、治疗前、治疗1周、2周后脑血流灌注指标[脑血容量(CBV)、脑血流量(CBF)、平均通过时间(MTT)]、血清神经损伤标志物[基质金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、半乳糖凝集素-3(Galectin-3)]、TLR4/NF-κB信号通路因子(TLR4、NF-κB)水平、神经功能、日常生活能力,统计比较两组治疗期间不良反应及治疗后第3个月预后情况。结果研究组患者的治疗总有效率为95.29%,明显高于对照组的84.71%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗1周、2周后,研究组患者的CBF分别为(82.69±12.54)mL/100 g、(85.17±12.36)mL/100 g,明显高于对照组的(77.01±11.86)mL/100 g、79.24±12.10)mL/100 g,CBV分别为(6.84±1.22)mL/(100 g·min)、(7.01±1.28)mL/(100 g·min),明显高于对照组的(6.05±1.17)mL/(100 g·min)、(6.19±1.23)mL/(100 g·min),MTT分别为(9.16±1.73)s、(8.92±1.65)s,明显低于对照组的(10.02±1.85)s、(9.84±1.71)s,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗1周、2周后,研究组患者的血清NSE水平分别为(13.75±2.81)μg/L、(12.24±2.59)μg/L,明显低于对照组的(16.29±3.68)μg/L、(15.36±3.42)μg/L,TIMP-1水平分别为(72.26±16.73)ng/mL、(68.19±14.84)ng/mL,明显低于对照组的(83.51±18.20)ng/mL、(79.81±15.72)ng/mL,Galectin-3水平分别为(4.12±1.04)ng/mL、(3.75±0.96)ng/mL,明显低于对照组的(5.03±1.08)ng/mL、(4.69±1.02)ng/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗1周、2周后,研究组患者的血清TLR4水平分别为(2.61±0.78)ng/mL、(2.39±0.74)ng/mL,明显低于对照组的(3.42±0.85)ng/mL、(3.25±0.81)ng/mL,NF-κB水平分别为(108.69±21.36)ng/mL、(98.74±18.65)ng/mL,明显低于对照组的(121.54±22.06)ng/mL、(110.23±20.67)ng/mL,差异均具有统计学意义(P<0.05);治疗1周、2周后,研究组患者的美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)评分分别为(10.19±2.18)分、(9.21±2.04)分,明显低于对照组的(44.26±4.05)分、(62.51±4.36)分,改良Barthel指数(MBI)评分分别为(47.39±4.28)分、(65.40±4.71)分,明显高于对照组的(44.26±4.05)分、(62.51±4.36)分,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗期间,研究组患者的不良反应总发生率为10.59%,略高于对照组的7.06%,但差异无统计学意义(P>0.05);治疗后第3个月,研究组患者的预后良好率为64.71%,明显高于对照组的48.24%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论超时间窗AIS患者在常规治疗基础上联合GDLG治疗能明显提高治疗效果,且能更有效下调血清TLR4/NF-κB信号通路因子水平。

银杏内酯B对肥胖小鼠的改善作用研究

为探究银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对肥胖小鼠的干预作用,首先采用高脂膳食诱导构建C57BL/6J小鼠肥胖模型,随后将肥胖小鼠按体重随机分为4组,模型组(PG)、GB低剂量组(GBL)、GB中剂量组(GBM)和GB高剂量组(GBH),进行为期8周的干预实验,测定各组小鼠肥胖相关指标,如体重变化、脏器脂肪系数、血脂指标等。GB干预后,GBM和GBH组小鼠的体重增长明显小于PG组(P<0.05),同时,GBH组的小鼠脏器脂肪系数均显著降低(P<0.05)。另外,GBM和GBH组小鼠的血脂指标总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HLD-C)均得到显著(P<0.05)改善,尤其是GBH组小鼠;最后,组织病理学结果显示,GBM和GBH组小鼠肝脏脂肪沉积明显减轻。进一步实时荧光定量聚合酶链式反应(Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR)结果显示,和PG组相比,GBM和GBH组小鼠肝脏中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)的mRNA表达水平显著降低(P<0.05),而解偶联蛋白2(Uncoupling protein 2,UCP-2)的mRNA水平显著增加(P<0.05)。本研究发现中高剂量的GB可以有效改善小鼠的肥胖,并且这种改善作用可能和PPARγ-UCP-2信号途径相关。

银杏内酯B抑制血小板与肿瘤细胞相互作用的实验研究

目的研究银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对血小板活化的抑制作用,以及基于该抑制作用对血小板和肠癌HCT-116细胞间作用的影响。方法采用不同浓度GB(5、15、30μmol/L)处理健康志愿者全血或血小板,通过血栓弹力图(Thromboelastogram,TEG)检测GB对血小板二磷酸腺苷(Adenosine diphosphate,ADP)、花生四烯酸(arachidonic acid,AA)途径的抑制率,采用流式细胞术检测GB对凝血酶和ADP激活血小板后CD62P和PAC-1表达的影响,通过细胞划痕试验观察GB对血小板与HCT-116细胞作用24、48 h后细胞迁移的影响,通过细胞黏附试验观察GB对血小板与HCT-116细胞黏附情况的影响。结果(1)TEG试验结果显示,随着GB浓度增加,AA抑制率均显著增加且呈剂量依赖(P<0.001),与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.001);药物组与空白对照组相比,ADP抑制率均显著增加且呈剂量依赖,差异均有统计学意义(P<0.001)。(2)流式细胞术检测结果显示,凝血酶和ADP激活血小板后药物组的CD62P与PAC-1阳性率随着药物浓度升高而降低且呈剂量依赖性(P<0.001),凝血酶激活途径的药物5μmol/L组的PAC-1阳性率低于对照组,差异无统计学意义(P>0.05),ADP激活途径的药物5μmol/L组的CD62P阳性率、5μmol/L和15μmol/L组的PAC-1阳性率均低于对照组,差异无统计学意义(P>0.05),余各浓度组与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.01)。(3)划痕试验结果显示,不同浓度药物组的24、48 h细胞迁移率分别较凝血酶组与ADP组降低,且差异有统计学意义(P<0.01),15μmol/L组的24、48 h细胞迁移率明显低于5μmol/L组,差异具有统计学意义(P<0.05),30μmol/L组迁移率低于15μmol/L组,但差异无统计学意义(P>0.05)。(4)黏附试验结果显示,活化的血小板可增强其与肿瘤细胞之间的黏附作用,但药物组各组的黏附率均低于阳性组,且随着药物浓度增加黏附率随之降低。结论GB可通过AA途径及ADP途径抑制血小板活化,进而抑制血小板与HCT-116肿瘤细胞的黏附以及血小板促肿瘤细胞迁移的能力。

银杏内酯B对膀胱癌J82细胞增殖、凋亡的机制研究

目的探究银杏内酯B对人膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的调控机制。方法体外培养人膀胱癌J82细胞系,分为对照组、低/中/高浓度实验组和阳性药物组;对照组、银杏内酯B组、激活剂组和抑制剂组,干预24 h。活细胞计数法测定细胞活力;5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷法测定细胞增殖情况;Hoechst 33258染色法测定细胞凋亡情况;RT-qPCR法测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和细胞周期素D1(Cyclin D1)的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法测定Caspase-3、Cyclin D1及NF-κB通路相关蛋白表达水平。结果与对照组相比,中/高浓度实验组和阳性药物组细胞活力、增殖率显著降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.05);与阳性药物组相比,低/中浓度实验组细胞活力和增殖率显著升高,细胞凋亡率显著降低(P<0.05);实验选择高浓度实验组分别加入激活剂和抑制剂作为激活剂组和抑制剂组进行后续NF-κB通路验证实验,发现与对照组相比,银杏内酯B组Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平显著升高,而Cyclin D1 mRNA和蛋白以及p-IκBα和p-NF-κB p65蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与银杏内酯B组相比,激活剂组细胞凋亡率及Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平显著降低,细胞活力、增殖率、Cyclin D1 mRNA和蛋白以及p-IκBα和p-NF-κB p65蛋白表达水平显著升高(P<0.05),抑制剂组的这些指标变化趋势与激活剂组相反(P<0.05)。结论银杏内酯B可显著抑制人膀胱癌J82细胞的增殖,诱导其凋亡,其作用机制与抑制NF-κB通路的信号转导相关。

银杏内酯B通过调控脑内T细胞特性及与胶质细胞间相互作用促进缺血性脑卒中小鼠的神经功能恢复

目的探究银杏内酯B调控缺血性脑卒中恢复期小鼠的脑内T细胞生物学特性及T细胞与胶质细胞间的作用机制。方法选取36只成年C57BL/6小鼠,随机分为假手术组(Sham组)、对照组(PBS组)和银杏内酯B组(GB组)。Sham组仅给予假手术处理;PBS组和GB组均采用线栓法制备大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)损伤即缺血性脑卒中模型,并于损伤后连续14 d分别鼻饲等体积的PBS和银杏内酯B溶液。采用转棒实验及神经功能评分法评估3组小鼠的神经功能变化;并于实验第15天取PBS组和GB组小鼠脑损伤区及周边皮层、胼胝体及纹状体的新鲜组织,采用单细胞测序方法评估该区域中T细胞及其亚群的生物学特性,并进一步探索T细胞、小胶质细胞和少突胶质细胞之间的相互作用及机制。结果与Sham组相比,PBS组和GB组小鼠的神经功能评分均显著上升(P<0.001),掉落前运动时程均显著降低(P<0.001);与PBS组相比,GB组在缺血性脑损伤后5、10、15d的神经功能评分有下降趋势,掉落前运动时程有上升趋势,尤其15d时的掉落前运动时程显著上升(P<0.05)。与PBS组相比,GB组小鼠在脑损伤后15d时脑内T细胞增殖活性显著升高(P<0.05),增殖性T细胞数量及脂质代谢水平均显著上调(P<0.05),所有T细胞的细胞外基质重塑显著增多(P<0.05);同时,GB组小鼠脑内T细胞与小胶质细胞、少突胶质细胞之间的相互作用以及小胶质细胞自身、小胶质细胞与少突胶质细胞之间的相互作用均显著增强,主要表现为CD74与巨噬细胞迁移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)、集落刺激因子1受体(colony stimulating factor 1 receptor,CSF1R)与集落刺激因子1(colony stimulating factor 1,CSF1)的相互作用增强(P<0.05),但T细胞的炎性水平与PBS组相比均无显著差异。结论采用线栓法MCAO损伤手术可成功构建小鼠缺血性脑卒中疾病模型。银杏内酯B可能通过调控小鼠脑内T细胞生物学特性及其与胶质细胞间的互作关系,促进小鼠脑损伤后的神经功能恢复。

银杏内酯B调控miR-155-5p对高糖诱导肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的:探讨银杏内酯B(GB)对高糖(HG)诱导的肾小管上皮细胞凋亡及炎症因子的影响及其可能作用机制。方法:采用HG诱导人肾小管上皮细胞HK-2建立细胞损伤模型,不同剂量的GB处理HK-2细胞,并将anti-miR-NC、anti-miR-155-5p分别转染至HK-2细胞后加入25 mmol/L葡萄糖处理24 h,将miR-NC、miR-155-5p mimics分别转染至HK-2细胞后加入100μmol/L GB与25 mmol/L葡萄糖共同处理24 h;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA法检测炎症因子IL-6、TNF-α的水平;RT-qPCR法检测miR-155-5p的表达量;Western blot检测Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤(Bcl-2)蛋白表达水平。结果:GB处理后,高糖诱导的HK-2细胞凋亡率、IL-6、TNF-α水平、miR-155-5p表达量和Bax蛋白表达水平均降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05),且呈剂量依赖性;转染anti-miR-155-5p后,高糖诱导的HK-2细胞凋亡率、IL-6、TNF-α水平、miR-155-5p表达量和Bax蛋白表达水平降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05);转染miR-155-5p mimics可减弱GB对HG诱导的HK-2细胞凋亡及炎症因子表达的影响。结论:GB可通过抑制细胞凋亡及炎症因子表达来减轻HG诱导的肾小管上皮细胞损伤,其作用机制可能与抑制miR-155-5p表达有关。

银杏内酯B通过阻抑PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制胃癌HGC-27细胞的恶性生物学行为

目的:探讨银杏内酯B(GKB)是否通过阻抑PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制胃癌HGC-27细胞的增殖、凋亡、迁移及侵袭。方法:将HGC-27细胞分为对照、GKB低剂量(100 mg/L)、GKB高剂量(200 mg/L)、GKB高剂量(200 mg/L)+740Y-P(PI3K激活剂)、Ly294002(PI3K抑制剂)组。采用MTT、Edu、FCM、Transwell实验分别检测各组细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭能力,q PCR和WB法分别检测各组细胞中PI3KmRNA、AktmRNA、mTOR mRNA和Ki-67、caspase-3、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白的表达。构建胃癌HGC-27细胞裸鼠移植瘤模型,观察GKB对移植瘤生长的影响,WB法检测移植瘤组织中Ki-67、caspase-3、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白的表达。结果:体外实验结果表明,与对照组相比,GKB低剂量组、GKB高剂量组、Ly294002组HGC-27细胞的增殖活力及细胞增殖率、迁移和侵袭细胞数,PI3K、Akt、mTOR mRNA表达,以及Ki-67、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达均显著降低(均P<0.05);细胞凋亡率、caspase-3蛋白表达均显著升高(均P<0.05);740Y-P可部分逆转GKB对HGC-27细胞的抑制作用(均P<0.05)。荷瘤裸鼠实验结果显示,GKB可显著抑制HGC-27细胞裸鼠移植瘤的生长(P<0.05),且可下调PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白的表达。结论:GKB可通过阻抑PI3K/Akt/mTOR信号通路而抑制胃癌HGC-27细胞增殖、迁移与侵袭并促进其凋亡。

基于JAK2/STAT3信号通路研究银杏内酯B对食管癌细胞增殖及糖酵解水平的影响

目的探究银杏内酯B(GB)对食管癌细胞增殖、糖酵解的影响及作用机制。方法体外培养人食管癌OE19,分为对照组(Con组,不做干预)、低/中/高剂量实验组(L/M/H组,分别加入12.5、25、50μmol·L^(-1)GB)、顺铂组(CP组,4 mg·L^(-1)CP),筛选GB最适作用浓度进行后续实验。而后分为Con组、GB组(12.5μmol·L^(-1)GB)、CP组、inhibitor组(12.5μmol·L^(-1)GB+10μmol·L^(-1)JAK2/STAT3通路抑制剂AG490)、activator组(12.5μmol·L^(-1)GB+0.5μmol·L^(-1)JAK2/STAT3通路激活剂Colivelin),干预24 h。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法、乳酸检测试剂盒、葡萄糖检测试剂盒、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(WB)法检测细胞活力、增殖率、乳酸含量、葡萄糖消耗水平、[细胞周期素D1(Cyclin D1)、M2型丙酮酸激酶(PKM2)]mRNA和蛋白、Janus激酶2(JAK2)/转录激活因子3(STAT3)信号通路相关蛋白表达水平。结果与Con组相比,L/M/H组与CP组细胞活力降低(P<0.05),因此本研究选择较低浓度的12.5μmol·L^(-1)GB作为GB组进行后续实验。与Con组相比,GB组和CP组细胞增殖率、乳酸含量、葡萄糖消耗水平、(Cyclin D1、PKM2)mRNA和蛋白、[磷酸化(p-)JAK2、p-STAT3]蛋白表达降低(P<0.05)。与GB组相比,inhibitor组细胞增殖率、乳酸含量、葡萄糖消耗水平、(Cyclin D1、PKM2)mRNA和蛋白表达进一步降低(P<0.05),activator组则显著逆转了上述指标的变化(P<0.05)。结论GB能够通过下调JAK2/STAT3信号通路抑制OE19细胞的增殖与糖酵解。

复合酶处理对银杏汁中银杏内酯B和总酚释放的影响

以银杏为原料,采用正交试验设计优化复合酶处理对银杏内酯B和总酚含量的影响。在单因素试验的基础上,采用L9(34)正交试验设计,考察α-淀粉酶添加量、糖化酶添加量、酶解温度、酶解时间4个因素对银杏内酯B和总酚含量的影响。结果表明:在α-淀粉酶添加量为6 U/mL、糖化酶添加量为9 U/mL、酶解温度为60℃、酶解时间为2 h的条件下,银杏内酯B和总酚含量最高,银杏内酯B含量为(49.29±0.87)μg/mL,总酚含量为(455.18±4.05)μg/mL,分别是酶解前的(1.82±0.02)倍和(1.32±0.02)倍,明显提高了目标产物的含量。

银杏内酯B改善急性低压低氧暴露所致大鼠认知功能损伤及其分子机制研究

目的观察银杏内酯B(Ginkgolide B,GB)预处理对急性低压低氧暴露大鼠认知功能的影响,并探讨其可能的分子机制。方法成年雄性SD大鼠随机分为4组:常氧组、常氧+GB组、低压低氧组、低压低氧+GB组,每组10只大鼠。常氧+GB组和低压低氧+GB组以120 mg/kg GB连续5天灌胃给药,第5天给药结束后,除常氧组和常氧+GB组置于常氧环境中,其余组置于模拟海拔6000 m高原的人工实验舱内行低压低氧暴露7天。采用经典Morris水迷宫实验评估各组大鼠认知功能,之后处死大鼠剥取海马组织并制备匀浆,实时荧光逆转录定量聚合酶链反应(real-time reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测海马组织钙调蛋白(calmodulin,CaM)和钙调蛋白激酶Ⅱ(CaM-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)的mRNA水平,Western blot检测海马组织CaM和CaMKⅡ及其磷酸化蛋白表达水平。结果与常氧组比较,低压低氧组大鼠水迷宫逃避潜伏期显著上升(P<0.05),穿越平台次数、目标象限停留时间显著降低(P均<0.05);CaM的mRNA及蛋白水平显著下降(P均<0.01),CaMKⅡmRNA及蛋白水平虽无显著变化,但其磷酸化后的活性形式p-CaMKⅡ的蛋白水平显著下降(P<0.01)。给予GB干预后,与低压低氧组相比,低压低氧+GB组大鼠水迷宫逃避潜伏期显著下降(P<0.05),穿越平台次数和目标象限停留水迷宫时间显著上升(P均<0.05);CaM的mRNA及蛋白水平显著上升(P均<0.05),p-CaMKⅡ的蛋白水平显著上升(P<0.01)。而与常氧组比较,常氧+GB组各指标均无统计学差异(P>0.05)。结论急性低压低氧暴露可导致大鼠认知功能损伤,GB干预可能通过调节海马Ca2+/CaM-CaMKⅡ信号通路,有效调控海马神经元钙稳态平衡,缓解急性缺氧下神经元细胞的损伤,进而改善急性低压低氧暴露所致的大鼠认知功能障碍。

银杏内酯B通过抑制内质网应激拮抗血管内皮损伤的作用机制

目的探究银杏内酯B(ginkgolide B,GB)是否通过拮抗内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)发挥其拮抗血管内皮损伤作用及其相关分子机制。方法建立衣霉素(tunicamycin,TM)诱导的人骨髓来源内皮祖细胞(bone marrow derived-endothelial progenitor cells,EPCs)ERS损伤模型,用MTS检测细胞增殖能力;Calcein-AM/EthD-I双染法检测细胞活性状态;Transwell实验检测细胞迁移能力;DCFH-DA染色检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)的水平;ELISA法测定NADPH活性;JC-1和DiOC6染色定性和定量检测线粒体膜电位;qRT-PCR检测mRNA的水平;Western Blot检测蛋白表达水平。结果GB浓度依赖性减轻衣霉素对hEPCs造成的ERS内皮损伤(细胞活性、细胞迁移率和血管形成率的降低)(P<0.01);降低ROS及NADPH水平(P<0.01);呈浓度依赖性抑制ERS介导的线粒体膜电位下降(P<0.01);抑制ERS相关蛋白(GRP78、ATF4、CHOP等)表达,并调控细胞凋亡相关蛋白(Bcl-xl、Bax、cleaved caspase-4、cytochrome c)的表达水平,拮抗内质网应激介导的细胞损伤。结论银杏内酯B能通过拮抗内质网应激,发挥血管内皮保护作用,其机制可能与降低细胞内活性氧水平,抑制ERS相关蛋白(CHOP,GRP78、ATF4)表达及调节细胞凋亡蛋白(Bcl-xl、Bax、cleaved caspase-4、cytochrome c)的表达水平有关。

银杏内酯B调控E2f1/Cdk1抑制妥布霉素诱导的HEI-OC1细胞凋亡

目的探究银杏内酯B对妥布霉素诱导的House Ear Institute-Organ of Corti 1(HEI-OC1)细胞凋亡的影响及其作用机制。方法研究选用HEI-OC1小鼠耳蜗毛细胞,使用妥布霉素或妥布霉素联合银杏内酯B处理细胞,通过EdU实验检测对细胞增殖的影响,流式细胞术检测对细胞凋亡的影响,Western blot检测凋亡相关蛋白的表达及对E2f1/Cdk1通路的调节作用。结果妥布霉素处理细胞后,HEI-OC1细胞增殖能力降低(P<0.001),凋亡率升高(P<0.001),细胞Bcl2表达降低,而Bax、Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9表达升高(P<0.001)。妥布霉素联合银杏内酯B处理细胞后,E2f1和Cdk1蛋白的表达水平显著降低;银杏内酯B可降低妥布霉素对HEI-OC1细胞增殖、凋亡的影响(P<0.050)。结论银杏内酯B通过调控E2f1/Cdk1通路抑制妥布霉素诱导的HEI-OC1内耳细胞凋亡。

基于TLR4/NF-κB信号通路探讨银杏二萜内酯对糖尿病大鼠视网膜病变的影响

[目的]研究银杏二萜内酯(GDL)对糖尿病大鼠视网膜病变的影响,并基于Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路探索其可能的作用机制。[方法]采用高糖高脂饮食加腹腔注射30 mg/kg链脲佐菌素(STZ)的方法构建糖尿病视网膜病变大鼠模型,设模型组、GDL(2.3 mg/kg)组、TAK242(TLR4抑制剂,3 mg/kg)组、GDL+TAK242(2.3 mg/kg+3 mg/kg)组;另设正常对照组。各组分别每日1次腹腔注射给药治疗14 d后,测定空腹血糖(FBG)水平、视网膜厚度和视网膜血管通透性,通过苏木精-伊红(HE)染色、TUNEL染色观察视网膜病理改变和细胞凋亡,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测视网膜炎症因子[白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]含量,Western blot法检测视网膜TLR4、NF-κB、p-NF-κB、NF-κB抑制因子(IκBα)、p-IκBα、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。[结果]与模型组相比,GDL组、TAK242组和GDL+TAK242组FBG水平和血管通透性降低,视网膜厚度增加(P<0.05);视网膜神经节细胞层和内核层细胞数目减少、排列紊乱、分层不清、水肿、炎性浸润等病理改变明显减轻,细胞凋亡状况明显改善;视网膜IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α含量明显降低(P<0.05),TLR4、p-NF-κB、p-IκBα、HMGB1、Bax表达量及p-NF-κB/NF-κB、p-IκBα/IκBα、Bax/Bcl-2比值降低(P<0.05),Bcl-2表达量升高(P<0.05)。GDL+TAK242组对糖尿病大鼠上述指标的调控作用明显优于GDL组和TAK242组(P<0.05)。[结论]GDL可抑制糖尿病大鼠视网膜炎症反应和细胞凋亡,降低视网膜血管通透性,减轻视网膜病理改变,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路活化有关。

银杏二萜内酯调控Toll样受体4/核因子-κB通路对糖尿病大鼠肾脏病变的影响及机制研究

目的 研究银杏二萜内酯对糖尿病(diabetic mellitus,DM)大鼠肾脏病变的影响,并基于Toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)/核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)通路探讨其可能的作用机制。方法 采用高糖高脂饮食4周后腹腔注射30 mg/kg链脲佐菌素的方法构建DM大鼠模型,设模型组、银杏二萜内酯组、瑞沙托维(TLR4抑制剂)组、银杏二萜内酯+瑞沙托维组,另设正常对照组。各组分别1次/d腹腔注射给药治疗14 d后,测定空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、血肌酐(serum creatinine,Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和24 h尿蛋白定量(24 h urine protein,24 h-UTP)水平,通过苏木精-伊红染色和马松染色观察肾脏病变,透射电子显微镜观察肾小球足细胞超微结构病变,末端标记法观察细胞凋亡状况,酶联免疫吸附法检测肾组织炎症因子[白细胞介素(interleukin,IL)1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)]含量,蛋白质印迹法检测TLR4、NF-κB p65、p-NF-κB p65、NF-κB抑制因子(inhibitor α of NF-κB,IκBα)、p-IκBα、B淋巴细胞瘤2(b-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(bcl-2 assaciated X protein,Bax)表达。结果 与模型组相比,银杏二萜内酯组、瑞沙托维组和银杏二萜内酯+瑞沙托维组FBG[(9.51±1.13)mmol/L、(12.17±1.42)mmol/L、(8.09±1.05)mmol/L比(21.08±3.49)mmol/L]、Scr[(45.69±5.78)μmol/L、(51.02±6.91)μmol/L、(38.57±4.28)μmol/L比(91.44±12.50)μmol/L]、BUN[(9.28±1.54)mmol/L、(10.96±1.80)mmol/L、(7.01±0.78)mmol/L比(16.13±1.72)mmol/L]、24 h-UTP[(17.69±2.03)mg、(19.75±2.16)mg、(13.54±1.39)mg比(45.28±4.71)mg]水平明显降低(P均<0.05);肾小球萎缩、系膜扩张、胶原沉积、炎性浸润等肾脏病变明显改善;足细胞足突融合变宽,基底膜弥漫性增厚,线粒体肿胀、嵴断裂等超微结构病变明显改善;细胞凋亡指数[(16.75±2.06)%、(20.19±2.50)%、(8.07±1.14)%比(38.45±4.61)%]明显降低(P<0.05);IL-1β[(37.42±4.81)ng/L、(40.95±5.27)ng/L、(32.17±4.30)ng/L比(54.16±7.03)ng/L]、IL-6[(49.37±6.02)ng/L、(54.83±6.53)ng/L、(43.26±5.51)ng/L比(74.22±9.48)ng/L]、IL-8[(28.04±3.53)ng/L、(32.11±3.98)ng/L、(20.47±2.45)ng/L比(41.86±5.12)ng/L]、TNF-α[(461.57±62.85)ng/L、(510.83±69.21)ng/L、(351.29±43.08)ng/L比(772.63±120.92)ng/L]含量明显降低(P均<0.05);TLR4[(0.19±0.04)、(0.28±0.05)、(0.13±0.03)比(0.43±0.06)]、p-NF-κB p65[(0.22±0.04)、(0.56±0.11)、(0.14±0.03)比(0.94±0.17)]、p-IκBα[(0.17±0.04)、(0.26±0.05)、(0.12±0.03)比(0.45±0.07)]、Bax[(0.18±0.04)、(0.32±0.07)、(0.14±0.03)比(1.14±0.19)]表达量及p-NF-κB p65/NF-κBp65[(0.27±0.06)、(0.69±0.14)、(0.17±0.04)比(1.22±0.24)]、 p-IκBα/IκBα[(0.81±0.17)、(1.36±0.22)、(0.54±0.10)比(2.25±0.41)]、Bax/Bcl-2[(0.82±0.17)、(1.59±0.24)、(0.29±0.06)比(22.78±3.64)]比值明显降低,Bcl-2[(0.22±0.05)、(0.20±0.04)、(0.48±0.10)比(0.05±0.01)]表达量明显升高(P均<0.05)。银杏二萜内酯+瑞沙托维组对DM大鼠上述指标的影响明显优于银杏二萜内酯组和瑞沙托维组(P均<0.05)。结论 银杏二萜内酯可减轻DM大鼠肾脏病变和足细胞超微结构病变,改善肾功能,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB通路活化,降低炎症反应和细胞凋亡有关。

肌注用银杏内酯B-中链甘油三酯混悬液的制备及体内外评价

目的制备微米级银杏内酯B-中链甘油三酯混悬液(ginkgolide B-medium chain triglyceride suspension,GB-MCTS)。方法采用反溶剂沉淀和球磨两种方法制备GB-MCTS,对两种方法的最佳处方及工艺参数进行单因素考察,并对不同药物浓度的GB-MCTS进行体外释放与大鼠体内药动学研究。结果反溶剂沉淀法所制备的GB平均粒径约3.4μm,但粒度分布不均匀,球磨法所制得GB平均粒径低至1.8μm,粒径分布均匀,物理稳定性更好,体外释放速率随药物浓度增加而降低,2.5 mg·g^(-1)GB-MCTS在24 h内全部释放,而40 mg·g^(-1)GB-MCTS可缓释15 d,大鼠体内药动学研究表明,与水相混悬液相比,GB-MCTS表现出更长的tmax与更低的Cmax,当制剂浓度由5 mg·g^(-1)增加至40 mg·g^(-1)时,Cmax由(435.35±67.79)ng·mL^(-1)降低至(333.75±84.77)ng·mL^(-1)。结论GB-MCTS制备的最佳方法是球磨法,MCT作为油相可以隔绝药物在肌注部位与体液的直接接触,起到控制药物降解与缓释的作用,GB-MCTS有望成为治疗心脑血管疾病的潜在长效注射剂。

银杏内酯B对恢复期缺血性脑中风小鼠神经功能及脑组织炎症的影响

目的:探讨银杏内酯B对恢复期缺血性脑中风小鼠神经功能及脑组织炎症的影响,并分析其作用机制。方法:选取50只C57BL/6实验小鼠为实验对象,将其随机分为假手术组、空白对照组、短程给药组、长程给药组以及长程给药+拮抗剂组。除假手术组给予假手术外,其余4组小鼠均进行小鼠大脑中动脉闭塞模型制备。术后,空白对照组不给予药物干预,短程给药组术后连续1周腹腔注射银杏内酯B,长程给药组术后连续2周腹腔注射银杏内酯B,长程给药+拮抗剂组术后连续2周腹腔注射银杏内酯B,且术后第8~14d的银杏内酯B给药前3h,给予腹腔注射p38MAPK选择性拮抗剂PD169316。分别采用错步实验、水迷宫实验测定5组小鼠的运动平衡功能和神经功能,采用ELISA法测定小鼠脑组织匀浆中的炎性因子水平。结果:(1)错步实验。重复测量方差分析结果显示,时间点的主效应显著(F=138.238,P<0.01),时间点与分组间的交互作用显著(F=3.695,P<0.01),组别的主效应显著(F=303.238,P<0.01),事后LSD检验结果显示,其余4组小鼠错步率均高于假手术组,短程给药组、长程给药组、长程给药+拮抗剂组小鼠错步率均低于空白对照组。(2)水迷宫实验:5组小鼠穿过平台次数、目标象限时间比及目标象限路程比较,差异均有统计学意义(F值分别为21.221、15.650和25.148,P值均<0.05),且其余4组小鼠各指标值均低于假手术组,短程给药组、长程给药组、长程给药+拮抗剂组小鼠各指标值均高于空白对照组。(3)炎症反应:5组小鼠脑组织匀浆中TNF-α、IL-1β、IL-18表达水平比较,差异有统计学意义(F值分别为388.001、226.849和124.816,P值均<0.05),且其余4组小鼠各炎性因子的表达水平均高于假手术组,短程给药组、长程给药组、长程给药+拮抗剂组小鼠各炎性因子的表达水平均低于空白对照组。结论:银杏内酯B有利于改善小鼠MCAO后运动平衡功能及神经功能、缓解炎症反应,且恢复期继续给予银杏内酯B有利于进一步促进其功能恢复,推测其作用机制可能与调控p38MAPK信号通路激活相关。

高速逆流色谱法分离纯化银杏叶中白果内酯和银杏内酯A、B、C

目的从银杏叶中分离纯化白果内酯和银杏内酯A、B、C。方法银杏叶提取液经醋酸乙酯萃取、D-101大孔吸附树脂柱和Al2O3柱纯化后得到总内酯提取物,提取物再经两次高速逆流色谱分离制备4种内酯单体。结果25%乙醇热提取、醋酸乙酯萃取、D-101柱、pH4.0的Al2O3柱对总内酯的提纯最终使总内酯质量分数达到44.98%。经高速逆流色谱制备得到的白果内酯和银杏内酯A、B、C最高质量分数分别为98.3%、98.9%、98.8%、98.4%。结论本法简便快速、回收率高。

银杏内酯A和B混合物对大鼠永久性局灶性脑缺血的保护作用

目的研究银杏内酯A和B混合物(ginkgolide A and ginkgolide B,GKAB)对大鼠永久性局灶性脑缺血的保护作用。方法采用大鼠永久性大脑中动脉阻塞(permanent middle cerebral artery occlusion,pMCAO)模型观察GKAB12.5、25、50mg/kgiv给药对脑梗死体积、脑含水量、行为学症状及组织形态学(光镜)的影响。结果GKAB12.5、25、50mg/kgiv给药呈剂量依赖性减少pMCAO大鼠脑梗死体积、降低脑含水量、改善行为学症状及减轻脑组织形态改变。50、25mg/kg组与模型组相比均有显著性差异(P<0.01、0.05)。结论GKAB对大鼠永久性局灶性脑缺血损伤具有保护作用。

银杏内酯A对小鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用及其抑制NF-κB信号通路下调p53、Caspase-3表达的机制

目的探讨银杏内酯A(Ginkgolide A,GA)对缺血/再灌注脑损伤小鼠的保护作用及其可能的作用机制。方法采用小鼠短暂性大脑中动脉阻塞(transient middle cerebralartery occlusion,tMCAO)模型观察GA(10,20 and 40 mg.kg-1)对小鼠脑梗死范围、脑含水量及神经症状的影响,并进行病理组织学检查;采用实时荧光定量PCR技术检测缺血大脑皮层p53 mRNA的表达;应用Western blot法检测缺血大脑皮层IκBα、pIκBα及Caspase-3蛋白水平的表达。结果 GA对缺血/再灌注小鼠神经症状有明显的改善作用,能明显降低脑梗死范围,降低脑含水量,脑组织病理组织学也显示了GA对神经细胞的保护作用。Western blot结果显示:小鼠脑缺血/再灌后,IκBα蛋白水平明显降低,GA能明显升高IκBα的蛋白水平,降低pIκBα和Caspase-3的蛋白水平。PCR结果表明:小鼠脑缺血/再灌后,p53 mRNA水平升高,GA能下调p53 mRNA的表达。结论 GA对缺血/再灌注小鼠脑损伤有明显保护作用,该作用可能与其抑制NF-κB信号通路,下调p53、Caspase-3的表达有关。