银杏叶提取物(EGb-761)诱导MDA-MB-231细胞凋亡的分子机制

目的基于磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路研究银杏提取物(EGb-761)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的分子机制。方法用不同浓度的EGb-761处理MDA-MB-231细胞并分组,分别对应为EGb-761低(656.25μg/ml)、中(1093.75μg/ml)和高浓度(1531.25μg/ml)组,对照组不含EGb-761溶剂。检测各组细胞增殖、迁移、侵袭、形态变化和凋亡情况,Western印迹检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达水平。结果对照组及EGb-761低、中、高浓度组抑制率分别为(0.00±0.00)%、(27.28±5.66)%、(48.05±4.90)%、(80.30±4.00)%;迁移细胞数分别为(379.40±27.46)个、(348.80±17.08)个、(288.00±16.23)个、(224.00±11.38)个;侵袭细胞数分别为(272.60±15.37)个、(208.80±16.21)个、(127.20±11.12)个、(69.80±10.66)个;细胞凋亡率分别为(2.15±0.41)%、(23.23±2.07)%、(44.69±4.12)%、(65.78±5.26)%,均有统计学差异,且呈剂量依赖性(均P<0.05)。观察细胞形态发现MDA-MB-231细胞经EGb-761处理后由密集分布的梭形状转化为分散的不规则球形或片块状。EGb-761处理后,细胞中腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)和PI3K的蛋白含量均降低,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3含量升高,糖原合成酶激酶(GSK)-3β和Akt蛋白磷酸化水平下降。结论EGb-761可诱导MDA-MB-231细胞凋亡,其分子机制可能与PI3K/Akt途径有关。

银杏叶提取物联合多奈哌齐对阿尔茨海默病模型大鼠的协同作用及其机制

目的探讨银杏叶提取物(EGb 761)联合多奈哌齐对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠的协同作用及其机制。方法取雄性SD大鼠72只,随机分为正常组(等体积生理盐水)、假手术组(等体积生理盐水)、模型组(等体积生理盐水)、多奈哌齐组(25 mg/kg)、EGb 761组(50 mg/kg)和联合组(多奈哌齐25 mg/kg+EGb 76150 mg/kg),各12只。腹膜内注射水合氯醛300 mg/kg麻醉,将聚集的Aβ25-35(10μL)以1μL/min的速率注入大鼠双侧海马,以复制AD大鼠模型。建模成功后,各组大鼠均灌胃相应药物或生理盐水,每天1次,共2个疗程(每个疗程10 d,间隔3 d)。采用Morris水迷宫实验评估大鼠的认知和记忆能力;采用TUNEL染色法,观察大鼠海马神经细胞凋亡情况,并计算凋亡指数;采用酶联免疫吸附法检测大鼠血清乙酰胆碱酯酶(AChE)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;采用Western blot法检测大鼠海马组织中核因子(NF)-κB通路相关蛋白p-IKKα,p-IκBα,p-NF-κB表达水平。结果与模型组比较,各给药组大鼠Morris水迷宫实验第6天逃避潜伏期均大幅缩短,第7天各给药组大鼠在象限Ⅰ中穿越平台的次数及耗时百分比均显著增加;各给药组大鼠海马神经细胞阳性数量均显著减少,凋亡指数均显著降低(P<0.05);各给药组大鼠AChE和MDA水平均显著降低,SOD水平显著升高(P<0.05);各给药组大鼠NF-κB通路相关蛋白p-IKKα,p-IκBα,p-NF-κB的表达水平均显著升高(P<0.05);且联合组上述指标变化均更显著(P<0.05)。结论EGb 761联合多奈哌齐可协同改善AD模型大鼠的记忆能力,其机制可能与减少海马神经细胞NF-κB通路激活后的细胞凋亡有关。

银杏叶提取物(EGb-761)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响

目的:探讨银杏叶提取物(EGb-761)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。方法:以不同浓度的EGb-761作用于人乳腺癌MDA-MB-231细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率、Transwell小室实验测定侵袭及迁移能力。结果:MTT法检测显示,EGb-761组处理的细胞生长受到抑制,其抑制率呈浓度依赖关系;与对照组相比,656.25μg/mL、1093.75μg/mL、1531.25μg/mL的EGb-761明显抑制了MDA-MB-231细胞的侵袭(P<0.05)和迁移(P<0.05)。其中EGb-761对细胞侵袭力的影响:低、中、高浓度组对MDA-MB-231细胞穿透基质胶的数量分别为(77.4±16.67)%、(47.6±11.80)%、(22.2±4.67)%;EGb-761对细胞迁移力的影响:低、中、高浓度组对MDA-MB-231细胞穿透数量分别为(87.72±18.54)%、(72.48±29.33)%、(56.40±13.18)%。结论:EGb-761能够抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭及迁移能力。

银杏叶提取物EGb-761对乳腺癌肺转移型小鼠体内实体瘤的影响

目的:探讨银杏叶提取物EGb-761对乳腺癌肺转移型小鼠体内实体瘤的影响。方法:选取雌性BALB/c小鼠,使用小鼠乳腺癌4T1细胞系建立高转移性的肿瘤小鼠模型,随机分为五组,即正常组、模型组、EGb-761组[高剂量组(200 mg/kg)、中剂量组(100 mg/kg)、低剂量组(50 mg/kg)]。观察并测量各组小鼠原位灶实体瘤体积和小鼠体质量;观察并计算各组小鼠肺部转移灶结节数、转移率;采用RT-PCR法检测各组小鼠特异性标志物角蛋白-19(CK-19)mRNA表达。结果:随着EGb-761剂量的增加,小鼠原位灶实体瘤体积越来越小,而小鼠体质量越来越重(P<0.05);随着EGb-761剂量的增加,肺部结节数随之减少(P<0.05),肺部转移率随之降低(P<0.05);随着EGb-761剂量的增加,肺组织CK-19 mRNA表达量越低(P<0.05)。结论:银杏叶提取物(EGb-761)对乳腺癌肺转移型小鼠体内的实体瘤生长有抑制作用。

周围神经损伤后银杏叶提取物EGb761对感觉神经元的保护作用

目的 研究大鼠坐骨神经损伤后 ,银杏叶提取物 (EGb76 1)对感觉神经元的保护作用。方法 SD大鼠36只 ,分为EGb76 1组和生理盐水 (SAL)组。制作大鼠坐骨神经部分切除断端结扎模型 ,术后每天经腹腔分别注射EGb76 1(10 0mg·kg-1·d-1)和同体积的生理盐水直到取材。 2、4、6周处死大鼠取材L4、5脊神经节 ,酶组化染色观察乙酰胆碱酯酶 (AChE)及酸性磷酸酶 (ACP)的活性变化 ,冰冻切片硫槿染色计数神经节感觉神经元数目 ,电镜观察神经节感觉神经元超微结构的变化。结果 与对照组相比 ,治疗组乙酰胆碱脂酶、酸性磷酸酶活性、感觉神经元存活率及神经元超微结构有明显改善。结论 EGb76

丹酚酸B和银杏叶提取物EGb761对β-淀粉样蛋白神经毒性抑制作用的比较

目的比较丹酚酸B(Sal B)和银杏叶提取物EGb 761对β-淀粉样蛋白(β-AP)纤维形成及细胞毒作用的影响。方法运用硫黄素T(ThT)荧光法和电子显微镜技术分析Sal B和EGb 761对β-AP1-40聚集和纤维形成的影响;另将β-AP25-35预先老化7 d,用MTT法和流式细胞仪检测两种提取物对此老化蛋白造成的PC12细胞毒性的保护作用,用荧光法观察β-AP25-35作用后细胞内活性氧含量的变化以及两种提取物的作用。结果Sal B和EGb 761都可有效地抑制β-AP1-40纤维的形成,明显抑制老化的β-AP25-35对PC12细胞的毒性作用,降低β-AP25-35造成的细胞内活性氧含量的增加。Sal B的有效剂量远远低于EGb 761。结论Sal B对β-AP神经毒性的抑制作用强于EGb 761。

银杏叶提取物EGb761对实验性变态反应性脑脊髓炎的影响

目的:探讨银杏叶提取物EGb761对实验性变态反应性脑脊髓炎的免疫机制的影响。方法:以豚鼠全脊髓均浆与福氏完全佐剂为抗原免疫豚鼠诱导实验性变态反应性脑脊髓炎(experimentalallergicencephalomyelitis,EAE)模型。同时以醋酸泼尼松和EGb761分别于免疫当日开始灌胃,连续5周。分为正常对照组、模型组、醋酸泼尼松治疗组和EGb761治疗组,观察EAE症状并评分。全部动物内眦采血,留取血清,采用双抗夹心酶联免疫吸附法(ELISA法)和放免法测白细胞介素12(IL-12),白细胞介素10(IL-10)含量。第5周后全部动物乙醚麻醉后内灌注固定,取出脑、脊髓,以多聚甲醛固定,石蜡包埋、切片,应用免疫组化法测定转化生长因子-β(transforminggrowthfactor-β,TGF-β)、一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase,NOS)表达。结果:与模型组相比,醋酸泼尼松治疗组和EGb761治疗组推迟了EAE发病,其临床评分在疾病的起始期、高峰期、缓解后的复发期都明显下降(P<0.05);IL-12含量在模型组、醋酸泼尼松治疗组、EGb761治疗组均较正常对照组明显升高(P<0.05),并且与疾病程度正相关(P<0.05);醋酸泼尼松治疗组和EGb761治疗组与模型组比较IL-10明显上升(P<0.05),TGF-β显著升高(P<0.05),NOS显著下降(P<0.05),且IL-10与TGF-β明显正相关(P<0.05)。

银杏叶提取物EGB761对阿尔茨海默病家兔模型ACAT1和LCAT mRNA表达的影响

[目的]观察银杏叶提取物EGB761对阿尔茨海默(AD)病家兔模型胆固醇酰基转移酶(ACAT1)和卵磷脂-胆固醇酰基转移酶(LCAT)mRNA表达的影响。[方法]以2%高胆固醇饲料喂养雄性新西兰大白兔,建立AD家兔模型。模型建立后,用50 mg/(kg.d)EGB761灌胃3周作为EGB761组,以5 mg/(kg.d)辛伐他汀作为阳性药对照组。干预结束后,通过实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测海马卵磷脂-胆固醇酰基转移酶mRNA和胆固醇酰基转移酶1 mRNA的表达。[结果]银杏叶提取物EGB761可以下调ACAT1 mRNA的表达,不影响LCAT mRNA的表达。[结论]银杏叶提取物EGB761可下调AD家兔模型ACAT1 mRNA表达,对LCAT mRNA表达无调节作用。

银杏叶提取物EGb761对大鼠脊髓损伤后神经损伤恢复的影响

目的研究银杏叶提取物EGb761对大鼠脊髓损伤后神经损伤恢复的作用。方法 SD大鼠120只,随机分为假手术组、损伤对照组、甲基强的松龙(MP)治疗组和EGb761治疗组,每组30只。用改良Allen法建立脊髓损伤的动物模型。采用斜板试验法和BBB行为学评分观察大鼠脊髓损伤后神经功能的恢复情况;HE染色观察脊髓大体组织结构变化;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定脊髓组织中IL-10的含量。结果与损伤对照组比较,MP治疗组及EGb761治疗组大鼠术后7d和14 d临界角度显著增加、BBB评分显著升高、大鼠脊髓组织中IL-10的含量显著增高。HE染色显示,损伤对照组脊髓组织发生出血、水肿、坏死、轴突脱髓鞘改变以及炎症细胞浸润和胶质细胞反应,MP治疗组及EGb761治疗组术后7 d脊髓组织水肿、炎症反应减轻,神经元变性坏死不明显。结论 EGb761能减轻受伤脊髓的继发性损伤,对大鼠脊髓损伤后神经损伤恢复具有促进作用。

银杏叶提取物(EGb761)对红细胞脂质过氧化损伤的影响

观察银杏叶提取物(EGb761)对红细胞脂质过氧化损伤的影响,探讨其保护红细胞的机制。以活性氧(H2 O2 )作用于离体的正常红细胞,观察EGb761对红细胞溶血度、红细胞丙二醛含量(MDA)、红细胞超氧化物歧化酶(SOD)和ATP酶(ATPase)活性及红细胞膜骨架结构的影响。结果表明:EGb761能明显降低红细胞溶血度,且随着浓度增加其作用逐渐增强,与对照组比较差异有极显著性(t =4.13～19.41,P <0 .0 5 ,0 .0 0 1) ;EGb761能明显降低红细胞MDA含量,提高其SOD ,ATPase酶活性,与对照组比较差异有极显著性(t =2 .0 2～70 .0 6,P <0 .0 5 ,0 .0 0 1) ;EGb761能降低过氧化损伤对红细胞膜骨架的破坏,保护其完整性。可见EGb761能在膜水平上直接对抗氧自由基引发的红细胞脂质过氧化损伤,保护红细胞及其膜骨架结构。

银杏叶标准提取物EGb761~及银杏叶制剂的质量评价(续完)

４银杏叶的标准德国和法国主要厂家对ＥＧｂ７６１○Ｒ质量标准和检验方法都不向外公开。近年来才公开了一部分（如上所述），最近美国药典论坛公布了一个供征求意见的银杏叶质量标准的草案［１６］，内容有基源、性状、显微镜鉴别和薄层色谱鉴别（黄酮甙及萜类内酯）、检...

银杏叶提取物EGB761对D-半乳糖诱导的心肌细胞老化的保护作用

目的:探讨银杏叶提取物EGB761对D-半乳糖诱导的心肌细胞老化的影响及其可能机制。方法:用5 g/L D-半乳糖处理培养心肌细胞建立衰老模型,并以不同浓度EGB761(5、10、20μg/mL)分别干预48 h。以β-半乳糖苷酶染色判断细胞衰老,ELISA法检测心肌细胞晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)的含量。显微镜下观察心肌细胞的形态和搏动情况。结果:与正常对照组相比,D-半乳糖诱导的心肌细胞内β-半乳糖苷酶染色阳性率显著提高(75.6%±4.9%vs 17.2%±2.9%,P<0.01);细胞内AGEs含量明显增高[(703±32)vs(93±26)pg/mL,P<0.01];同时出现细胞形态学和搏动的异常。与D-半乳糖组比较,不同浓度(5、10、20μg/mL)EGB761干预组β-半乳糖苷酶染色阳性率显著下降(各组分别为57.7%±7.9%、49.7%±9.2%、34.0%±6.6%,P<0.01),同时AGEs含量显著降低[分别为(404±33)、(357±25)、(249±77)pg/mL,P<0.01],心肌细胞的搏动明显增加。结论:EGB761可通过抑制心肌细胞的非酶糖基化,预防D-半乳糖诱导的心肌细胞老化。

银杏叶提取物EGB761对高胆固醇家兔肝质量和形态的影响

[目的]观察银杏叶提取物(EGB761)对高胆固醇家兔肝质量和形态的影响。[方法]参照D.Larry Sparks等方法复制高胆固醇血症家兔模型。采用50mg(/kg·d)EGB761灌胃3周,以辛伐他汀5mg(/kg·d)作为阳性对照药。评价肝体指数,观察肝脏的形态学变化。[结果]EGB761可以有效降低肝体指数(P<0.01),与阳性药辛伐他汀疗效相比无显著性差异(P>0.05);大体和镜下形态学观察发现EGB761可以有效的改变脂肪变性肝脏的大体形态和组织学形态。[结论]EGB761可以有效防治高胆固醇血症所致脂肪肝的发生。

银杏叶提取物EGB761对高胆固醇血症家兔血脑屏障通透性的影响

[目的]观察银杏叶提取物EGB761对高胆固醇血症家兔血脑屏障是否具有保护作用。[方法]以2%高胆固醇饲料喂养雄性新西兰大白兔,建立高胆固醇血症家兔模型。模型建立后,用50mg/(kg·d)EGB761灌胃3周作为EGB761组,以5mg(/kg·d)辛伐他汀灌胃3周作为阳性药辛伐他汀组。干预结束后,耳缘静脉给予25g/L伊文思蓝(EB),3h后麻醉,生理盐水心脏灌流后取材,通过比色法测定皮质、海马和嗅球EB含量。[结果]银杏叶提取物EGB761可以降低海马和嗅球EB含量,与模型组相比分别为P<0.01、P<0.05;与阳性药辛伐他汀疗效相比差异无显著性,P>0.05。[结论]银杏叶提取物EGB761能够降低由高胆固醇血症导致的血脑屏障通透性。

银杏叶提取物EGb761抗大鼠脑缺血损伤的作用机制研究

目的通过实验研究P38/MAPK和MEK/ERK在大鼠大脑中动脉栓塞模型中的变化及其与EGB761发挥药理作用的关系,探讨银杏叶制剂EGb761治疗脑缺血的机制。方法大鼠连续10 d口服EGb761 50、100 mg/kg后建立大脑中动脉栓塞-再灌模型,通过TTC染色,免疫组化和Western blot方法检测大鼠脑组织细胞的形态变化和大鼠皮质Caspase-9,Caspase-3,P38/MAPK,MEK/ERK相应蛋白的表达变化。结果EGb761给药可以减少脑缺血大鼠脑组织梗死面积,显著性抑制脑缺血大鼠海马Caspase-9和Caspase-3表达,显著性抑制大鼠海马神经细胞P-P38,P-MEK和P-ERK的表达水平。结论 EGb761可以减轻脑缺血缺氧引起的细胞损伤,其神经保护作用通过抑制内源性凋亡信号通路激活和P38/MAPK和MEK/ERK信号通路激活引起的细胞凋亡有关。

银杏叶标准提取物EGb761~及银杏叶制剂的质量评价(待续)

目的：介绍国外对银杏叶标准提取物ＥＧｂ７６１○Ｒ及制剂有关原料药材、化学、临床研究概况，以及国产银杏叶提取物的质量情况，供发展国内银杏叶制剂参考。方法：归纳国外银杏叶制剂主要生产厂家的科研成果，并分析比较国内外银杏叶制剂的质量。结果：国外银杏叶制剂从种植采收、生产工艺到成品，均有较严格的质量控制指标，保证了产品的内在质量；国内银杏叶制剂生产工艺与国外不同，尚缺乏详尽的研究，并且分散经营，质量参差不齐，有待规范，但研究工作有新的苗头。结论：应吸取国外有益经验，结合我国实际，注意银杏产业的持续性发展。

银杏叶提取物EGb761对兔视网膜缺血损伤的保护作用

目的:研究自由基清除剂EGb761对实验性视网膜缺血前后的图形视网膜电图(P-ERG)和形态学的影响,探讨EGb761抗氧化作用及视网膜缺血损伤的发病机制。方法:升高新西兰白兔眼压至130mmHg持续60min来诱导视网膜缺血,实验组动物给予EGb761,对照组动物给予生理盐水,在缺血前、中、后记录P-ERG波幅变化,并在再灌注19h摘除眼球,作光镜、电镜形态学观察。结果:缺血60min再灌注19h引起b波振幅降低,视网膜神经节细胞、内核层细胞缺失(调亡、坏死),给予EGb761后可以改善b波的恢复,并可抑制或减少视网膜细胞损害。结论:自由基清除剂EGb761可改善视网膜缺血损伤的功能恢复。

银杏叶提取物EGb761对MPP^+诱导的人脑神经瘤母细胞SH-SY5Y细胞损伤的影响

目的观察银杏叶提取物EGb761对人脑神经瘤母细胞SH-SY5Y细胞损伤的影响,探讨其作用机制。方法采用细胞培养方法,建立SH-SY5Y细胞1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP^+)损伤帕金森病体外模型。实验分为对照组、模型组和中药低、中、高剂量组,各给药组给予相应剂量药物。MTT法测定细胞存活率,Annexin V凋亡检测试剂盒和流式细胞仪测定细胞凋亡率;倒置显微镜观察细胞形态;硝酸还原法检测SH-SY5Y细胞一氧化氮(NO)的含量。结果与对照组比较,模型组SH-SY5Y细胞存活率降低、细胞凋亡率增加和NO含量升高(P<0.05);与模型组比较,中药中、高剂量组SH-SY5Y细胞存活率增加、细胞凋亡率降低,NO含量降低(P<0.05)。结论银杏叶提取物EGb761可以通过抑制细胞内NO自由基的含量对MPP^+诱导的SH-SY5Y细胞损伤起到保护作用。

银杏叶提取物EGB761对AS家兔PON-1和ox-LDL的影响

[目的]观察银杏叶提取物EGB761对动脉粥样硬化家兔对氧磷酶-1(PON-1)和氧化低密度脂蛋白(oxLDL)的影响。[方法]将24只日本大耳白兔随机分为正常组、模型组、EGB761组(n=8)。正常组给予普通饮食,模型组和EGB761组高脂饮食10周。EGB761组从第7周起给予EGB761 50 mg/(kg·d)灌胃4周,正常组和模型组给予等量生理盐水。采用酶免疫吸附法(ELISA法)和生化法检测PON-1的活性和含量,ELISA法检测ox-LDL的含量。[结果]模型组PON-1活性和含量明显降低(P<0.05),ox-LDL的含量明显升高,银杏叶提取物组PON-1活性和含量明显升高,ox-LDL明显降低(P<0.05)。[结论]银杏叶提取物EGB761降低ox-LDL、抗动脉粥样梗化(AS)的机制可能与其上调PON-1活性和含量有关。

银杏提取物EGb761对小鼠肺腺癌血管生成及VEGF、TSP-1表达的影响

目的观察银杏提取物EGb761对小鼠肺腺癌血管生成的影响。方法构建小鼠肺腺癌模型,用银杏提取物EGb761腹腔注射给药,在10d、20d、30d、40d观察小鼠的整体状态,计算肺组织肿瘤转移结节数目、瘤重及抑瘤率,检测肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤血管生长(MVD)、凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)的表达。结果 EGb761各剂量组的瘤重及肺转移灶数目均低于模型组,EGb761各剂量组VEGF表达、肿瘤血管密度均低于模型组,EGb761各组TSP-1显著增高,均具有显著性差异(P<0.05)。结论在小鼠肺腺癌模型中,银杏提取物EGb761可抑制小鼠肺腺癌肿瘤血管生成,其机制可能是通过调节VEGF表达减少,TSP-1表达增高而达到的。