银杏黄酮苷元减轻多柔比星心脏毒性的作用机制

目的探究银杏黄酮苷元(GA)减轻多柔比星(DOX)心脏毒性的潜在作用机制。方法将雄性ICR小鼠随机分为对照组(CON组)、模型组(DOX组)和GA+DOX组(GDOX组),每组12只。DOX组小鼠隔天尾静脉注射DOX药液3mg/kg,GDOX组小鼠每天灌胃GA混悬液100mg/kg+隔天尾静脉注射DOX药液3mg/kg,连续15d。给药结束后,检测各组小鼠血清中天冬氨酸转氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)水平。基于代谢组学方法,采用超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱串联质谱技术,在主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)的基础上,以变量重要性投影值≥1、峰面积差异倍数>1且P<0.05为标准筛选差异代谢物(DEMs),并基于HMDB、PubChem等数据库进行生物学分析。结果与CON组比较,DOX组小鼠血清中AST、CK、CK-MB、LDH水平均显著升高(P<0.05);与DOX组比较,GDOX组小鼠血清中上述指标(CK-MB除外)水平均显著降低(P<0.05)。PCA、OPLS-DA结果均显示,CON组、DOX组、GDOX组小鼠心脏组织样品均能完全分离。经数据库匹配后,鉴定出37个共有DEMs,其中DOX组显著上调而GDOX组显著下调的DEMs有17个,DOX组显著下调而GDOX组显著上调的DEMs有8个;涉及通路包括不饱和脂肪酸的生物合成、花生四烯酸代谢、亚油酸代谢、牛磺酸和次牛磺酸代谢,关键代谢物包括二十二碳六烯酸、花生四烯酸、磷脂酰胆碱(16∶0/18∶3)和牛磺酸。结论GA可能通过作用于二十二碳六烯酸、花生四烯酸等关键代谢物来调节不饱和脂肪酸的生物合成、花生四烯酸代谢等代谢途径,进而减轻DOX的心脏毒性。

银杏叶提取物中黄酮苷酶法转化苷元的研究

银杏叶提取物中的黄酮类化合物主要以苷形式存在,本文采用酶法水解黄酮苷中的糖基使其转化为苷元,提高抗氧化活性。银杏黄酮苷经过复合酶预处理后,黄酮苷含量仅为0.23%,再用转化酶水解可获得高含量的苷元,产品银杏苷元黄酮含量达59.65%,其中槲皮素占总黄酮苷元的24.87%,山奈酚占30.18%,异鼠李素占4.60%。

大孔树脂分离纯化银杏黄酮苷元的研究

以银杏提取物的酶水解液为实验材料,研究大孔吸附树脂分离纯化其中的银杏黄酮苷元的工艺。通过静态吸附-解吸和吸附动力学实验,从3种大孔吸附树脂中筛选出非极性YWD07a为最适合分离纯化银杏黄酮苷元的树脂。YWD07a树脂吸附分离银杏黄酮苷元的最佳工艺条件为:吸附:银杏黄酮苷元的浓度3.26 mg/mL,pH 5.0,流速2 BV/h;解吸:洗脱体积6BV,流速3.0 BV/h,乙醇浓度70%。在最优条件下得到的银杏黄酮苷元产品中银杏黄酮苷元含量由18.5%提高到80.5%,回收率为73.6%。

银杏黄酮苷元的平衡溶解度和表观油水分配系数的测定

目的测定银杏黄酮苷元中3种黄酮苷元的平衡溶解度和表观油水分配系数。方法采用饱和溶液法和摇瓶法,分别测定银杏黄酮苷元的平衡溶解度和表观油水分配系数,采用高效液相色谱法测定样品溶液的浓度。结果 25℃时,3种黄酮苷元的平衡溶解度均较小,其中槲皮素和山柰素在水中的平衡溶解度均为最大值,三者平衡溶解度分别为17.16,32.48和1.13μg.ml-1,槲皮素和山柰素的平衡溶解度受溶剂pH影响较大,而异鼠李素的平衡溶解度受溶剂pH影响较小;3种黄酮苷元在不同的pH溶剂中各自的Log P差别不大,pH对3种黄酮苷元的油水分配系数影响不显著,其中槲皮素和山柰素的油水分配系数均较大。结论银杏黄酮苷元为典型的疏水性药物。

银杏黄酮苷元对氧化型低密度脂蛋白诱导的人主动脉内皮细胞氧化损伤的影响

目的观察银杏黄酮苷元(Ginkgo flavone aglycone,GA)对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-den-sity lipoprotein,ox-LDL)诱导的人主动脉内皮细胞(human aortic endothelial cells,HAECs)氧化应激损伤的保护作用及其机制。方法体外培养HAECs,分为6组,即空白对照组、ox-LDL组、VitE组以及GA30、60、90mg/L组。除空白对照组外,其余5组均加入ox-LDL150mg/L复制氧化损伤模型;GA30、60、90mg/L组分别给予相应剂量GA干预;VitE组给予VitE200μmol/L干预。采用MTT法检测细胞存活率;CM-H2DCFDA荧光探针测定细胞内活性氧(ROS)含量;酶联免疫吸附法检测NADPH氧化酶含量;硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)水平;Griess reagent法测定一氧化氮(NO)含量;黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)的含量。结果与空白对照组(100.00%)比较,ox-LDL组(70.68%)细胞存活率明显降低(P<0.05);VitE组、GA30mg/L组、GA60mg/L组细胞存活率分别为88.95%、83.25%、94.93%,均明显高于ox-LDL组(P<0.05),以60mg/L GA作用更强。与空白对照组比较,ox-LDL组细胞内ROS、MDA及NADPH氧化酶水平增加,NO含量及SOD活性降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与ox-LDL组比较,GA30mg/L组、GA60mg/L组及VitE组细胞内ROS、MDA及NADPH氧化酶水平降低,NO含量及SOD活性增加,差异均有统计学意义(P<0.05),以60mg/L GA作用更强。结论 GA可明显抑制ox-LDL诱导的ROS合成,降低MDA水平,升高NO。其作用机制可能与SOD活性增加及NADPH氧化酶活性降低有关。

银杏黄酮苷元对小鼠脑缺血模型和鹌鹑动脉粥样硬化模型的影响

目的研究银杏黄酮苷元(GFA)抗脑缺血、动脉粥样硬化形成及降血脂的药理学活性。方法通过夹闭小鼠双侧颈总动脉复制脑缺血模型和高脂饲料饲喂鹌鹑复制动脉粥样硬化模型,检测GFA对小鼠喘息时间、脑组织含水量、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮(NO)含量变化以及鹌鹑动脉粥样硬化进程中脂斑块形成和血脂[总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)]水平变化的影响。结果 GFA可延长小鼠夹闭双侧颈总动脉后喘息时间,降低脑含水量,减少MDA和NO的生成,提高SOD的活力(P<0.05,P<0.01);并且200 mg·kg-1 GFA预防组和中剂量组可降低动脉粥样硬化脂斑块发生率(P<0.05,P<0.01),100 mg·kg-1 GFA组TC、LDL含量降低(P<0.05)。结论 GFA对脑缺血和动脉粥样硬化具有较好的防治作用,为GFA防治心脑血管疾病提供了实验数据。

银杏黄酮苷元干预兔颈总动脉损伤后内膜增生及血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1的表达

背景:银杏叶提取物中的黄酮苷元具有较强的抗氧化活性,课题组前期实验证实可抑制氧化低密度脂蛋白诱导内皮细胞表达血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1。目的:进一步探讨银杏黄酮苷元对兔颈总动脉内皮损伤后内膜增生和血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1表达的影响。方法:将雄性新西兰大白兔随机分为对照组、假手术组、模型组和治疗组。对照组予普通饲料,其余各组予高脂饮食,假手术组仅作颈外动脉结扎,模型组和治疗组均球囊损伤右颈总动脉,治疗组损伤后用银杏黄酮苷元灌胃。4周后检测各组血脂水平,观察各组右颈总动脉形态,用免疫组织化学法和RT-PCR检测血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1蛋白和mRNA表达。结果与结论:模型组术后4周内膜增生明显,有粥样斑块形成,血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1表达明显增加(P<0.05)。治疗组银杏黄酮苷元灌胃4周后内膜增生较轻,内膜面积,血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1阳性细胞数和其基因表达水平均低于模型组(P<0.05),但血脂与模型组比较无差异。提示银杏黄酮苷元可减轻新生内膜增生及动脉粥样硬化病粥样斑块的形成,这种作用可能与抑制兔颈总动脉内皮损伤后血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1的表达有关。

银杏黄酮苷元对氧化低密度脂蛋白所致内皮细胞功能的影响

目的探讨银杏黄酮苷元(GA)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导脐静脉内皮细胞株ECV304单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和植物血凝素样低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)表达的调节作用。方法应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、酶联免疫吸附反应(ELISA)、SP免疫组化法等,探讨ox-LDL诱导下内皮细胞表达MCP-1、LOX-1及银杏黄酮苷元的干预作用。结果6.25～25 mg/L银杏黄酮苷元与脐静脉内皮细胞株ECV304共同培养6～48 h可显著抑制ox-LDL诱导的内皮细胞MCP-1、LOX-1 mRNA和蛋白表达(P<0.05),具有浓度、时间效应关系(P<0.05)。LOX-1拮抗剂PIA可抑制ox-LDL诱导的内皮细胞LOX-1、MCP-1 mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论银杏黄酮苷元可显著抑制ox-LDL诱导的内皮细胞黏附因子MCP-1表达,该作用可能通过抑制LOX-1的表达来实现。

银杏黄酮苷元对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞P-选择素、LOX-1表达的影响

目的:探讨银杏黄酮苷元(ginkgetin aglycone,GA)对氧化低密度脂蛋白(oxidized-low density lipoprotein,ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞P-选择素和植物血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1,LOX-1)表达的影响。方法:培养人脐静脉内皮细胞株ECV304,分为对照组、ox-LDL组、LOX-1拮抗剂聚肌苷酸加ox-LDL混合刺激组(聚肌苷酸组)、不同含量GA加ox-LDL混合刺激组(GA6.25mg/L组、GA12.5mg/L组、GA25mg/L组和GA50mg/L),通过逆转录聚合酶链式反应检测P-选择素mRNA和LOX-1mRNA表达,用ELISA检测各组培养基上清中P-选择素蛋白含量,辣根过氧化物酶免疫组织化学法检测LOX-1蛋白,并作比较。结果:ox-LDL上调内皮细胞P-选择素和LOX-1表达(P<0.05);6.25～50mg/LGA明显抑制ox-LDL诱导的内皮细胞P-选择素mRNA和LOX-1mRNA和蛋白表达(P<0.05);聚肌苷酸可部分或完全阻断ox-LDL诱导的内皮细胞P-选择素mRNA、LOX-1mRNA及其蛋白表达(P<0.05)。结论:GA通过抑制LOX-1表达而降低内皮细胞合成和分泌黏附分子P-选择素,这可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一。

银杏黄酮苷元对兔颈动脉粥样硬化及NOX2、NOX4表达的影响

目的探讨银杏黄酮苷元(GFA)对兔颈动脉粥样硬化及斑块处NOX2、NOX4表达的影响。方法 24只健康新西兰雄性大白兔随机分为对照组、假手术组、模型组、治疗组4组。对照组予普通饲料,其余各组均予高脂饲料,假手术组行颈外动脉结扎,模型组和治疗组行左颈总动脉内膜球囊损伤,治疗组每日予GFA(25mg·kg-1)干预4周,检测血脂水平;HE染色观察左颈总动脉形态,测定损伤处内膜面积及内膜中膜面积比值;免疫组化染色和实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测颈动脉斑块处NOX2、NOX4表达。结果与模型组比较,银杏黄酮苷元明显降低颈动脉内膜面积及内膜/中膜面积,下调斑块处NOX2、NOX4蛋白和mRNA表达(P<0.05)。结论银杏黄酮苷元可干预动脉粥样硬化病变形成,其作用可能与抑制NOX2、NOX4表达有关。

银杏黄酮苷元对多柔比星治疗肝癌的增效减毒作用

目的研究银杏黄酮苷元(GA)对多柔比星(DOX)治疗肝癌的增效减毒作用。方法于ICR小鼠右腋皮下单次接种肝癌细胞H22以建立荷瘤模型,并将造模成功的小鼠随机分为模型对照组、DOX组(2.5 mg/kg,隔天尾静脉注射1次)、GA组(30 mg/kg,每天灌胃1次)和GA+DOX组(给药方法同单药组),每组6只。药物干预周期为15 d。观察各组小鼠的一般生长情况,称定其体质量、瘤体质量并计算抑瘤率,采用金氏公式评估联合用药的效果(Q)。检测各组小鼠血清中甲胎蛋白(AFP)水平,肿瘤组织的病理改变、细胞凋亡情况和血小板-内皮细胞黏附分子1(CD31)的表达水平,以及心脏指数、血清B型钠尿肽(BNP)和N末端脑钠肽前体(NT-pro BNP)水平、心脏病理改变和心肌纤维化情况。结果DOX组、GA组、GA+DOX组小鼠的体质量变化百分比(GA组除外)、瘤体质量均较模型对照组显著降低(P<0.05或P<0.01),且GA+DOX组的瘤体质量显著低于DOX组(P<0.01);3个药物组的抑瘤率分别为54.29%、42.50%、89.29%,两药联合的Q为1.21。各药物组小鼠肿瘤组织均有不同程度坏死,血清AFP水平和肿瘤组织中CD31的表达水平均较模型对照组显著降低(P<0.05或P<0.01),肿瘤组织坏死面积百分比和细胞凋亡阳性率(单药组除外)均显著增高(P<0.05或P<0.01),且GA+DOX组的细胞凋亡阳性率显著高于DOX组(P<0.05)。DOX组小鼠的心脏指数显著低于模型对照组(P<0.05),DOX组、GA+DOX组小鼠的血清BNP、NT-pro BNP水平均显著高于模型对照组(P<0.05或P<0.01),GA+DOX组小鼠的心脏病理改变和心肌纤维化程度均较DOX组轻微。结论GA和DOX联用具有协同抑瘤作用;GA可增加DOX的促细胞凋亡作用,并有助于降低后者的心脏毒性。

银杏黄酮苷元通过调控DUSP1表达对急性胰腺炎大鼠腺泡细胞炎症因子分泌和凋亡的影响

目的:探讨银杏黄酮苷元(GA)对雨蛙素诱导的急性胰腺炎(AP)大鼠腺泡细胞炎症因子分泌和凋亡的影响。方法:采用雨蛙素诱导大鼠胰腺腺泡细胞株AR42J建立AP腺泡细胞模型。①正常培养的AR42J细胞作为空白对照组,AP模型细胞为AP组,以用15、30、60 mg/L GA处理的AP模型细胞作为GA低、中、高浓度组。②将pcDNA、pcDNA-双特异性磷酸酶1(DUSP1)转染至AR42J细胞6 h后,再用100 nmol/L雨蛙素刺激,分别作为AP+pcDNA组、AP+pcDNA-DUSP1组。③将si-NC、si-DUSP1转染至AR42J细胞6 h后,再用100 nmol/L雨蛙素和60 mg/L的GA处理,分别作为AP+GA+si-NC组、AP+GA+si-DUSP1组,另取AP模型细胞作为AP组、用100 nmol/L雨蛙素和60 mg/L的GA处理的细胞作为AP+GA组。ELISA法检测培养上清中炎症因子IL-6、TNF-α水平;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;Western blot法检测蛋白表达;qRT-PCR法检测DUSP1 mRNA的表达水平。结果:GA处理后,雨蛙素诱导的AR42J细胞中IL-6、TNF-α水平降低,细胞凋亡率升高,Bcl-2表达水平降低,Bax表达水平升高,DUSP1表达水平升高(P<0.05)。过表达DUSP1可降低雨蛙素诱导的AR42J细胞炎症因子水平,促进细胞凋亡(P<0.05)。干扰DUSP1表达逆转了GA对雨蛙素诱导的AP腺泡细胞炎症因子和凋亡的影响(P<0.05)。结论:GA可通过上调DUSP1表达抑制雨蛙素诱导的AP腺泡细胞炎症反应,促进细胞凋亡。

固定化β-葡萄糖苷酶水解糖苷型银杏黄酮的研究

通过固定化β-葡萄糖苷酶水解银杏黄酮苷制备黄酮苷元,提高银杏黄酮的生物活性.采用单因素实验方法,研究了β-葡萄糖苷酶的固定化以及这种固定化酶的酶解条件、稳定性,得到其酶解银杏黄酮苷的最佳反应条件为:反应温度40℃、pH 5.0、时间7 h、酶浓度0.1 g/mL(以海藻酸钙凝胶珠计),该最佳条件下黄酮苷转化为苷元型黄酮的转化率可达90%.固定化酶储藏50 d,其相对酶活保持在80%以上;连续使用15次,相对酶活能维持在60%以上.β-葡萄糖苷酶固定化解决了游离酶容易失活和不能重复使用的问题,可以更加有效制备银杏黄酮苷元,具有工业应用前景.

HPLC测定银杏黄酮苷元固体分散体胶囊剂的含量

目的建立高效液相色谱法(HPLC)测定银杏黄酮苷元固体分散体胶囊中有效成分的含量。方法以HypersilODS(4.6mm×150mm,5μm)为色谱柱;甲醇-4‰醋酸水溶液(48:52)为流动相;流速为0.8mL·min-1,检测波长360nm,柱温45℃。结果槲皮素和山奈素5～100μg·mL-1浓度内线性关系良好,异鼠李素在3.4～68.0μg·mL-1浓度内线性关系良好,平均加样回收率分别为99.31%,99.35%和98.18%,RSD分别为2.12%,2.28%和1.65%(n=6),精密度良好。结论本方法灵敏、准确、专属性强,可作为该制剂的含量测定方法。

银杏叶提取物中银杏黄酮苷元的提纯工艺研究

目的从银杏提取物中分离纯化黄酮苷元,寻找分离提纯银杏黄酮苷元的最优条件。方法对银杏提取物水解液的酸度、水解液的料液比、水解时间、水解液醇度、水解温度、萃取溶剂、萃取条件以及黄酮苷元的结晶进行研究。结果确定了最佳水解液为醇-盐酸为8∶2、最佳固液比为(g.mL-1)1∶50、水解时间2 h、水解温度60℃、萃取溶剂为乙醚-乙酸乙酯(3∶7)混合萃取,回收溶剂后采用甲醇反复结晶即可得90%以上的黄酮苷元晶体。结论采用酸水解、乙醚和乙酸乙酯混合溶剂回流萃取、甲醇重结晶的方法从银杏叶提取物中分离纯化出90%的银杏黄酮苷元的工艺可行。

银杏黄酮苷元联合阿霉素协同抗肝癌的细胞代谢组学研究

该研究基于高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱联用仪探究银杏黄酮苷元(ginkgo flavone aglycone,GA)联合阿霉素(doxorubicin,DOX)对H22肝癌细胞的抑制作用及作用机制。首先考察不同浓度GA和DOX对H22细胞存活率的影响,以组合指数(combination index,CI)对两者的联合用药进行评价。将实验分为对照组(CON)、DOX组、GA组、联合用药组(GDOX),通过代谢组学策略探寻联合用药较单独用药后显著改变的代谢标志物,分析可能的代谢通路和作用机制。结果显示,以30μg·mL^(-1)GA与0.5μmol·LDOX作为联合给药浓度,CI为0.808,表明两者联合发挥协同抗肿瘤作用。代谢组学分析鉴定出L-精氨酸、L-酪氨酸和L-缬氨酸等23种代谢标志物,以氨基酸类物质为主。与CON组相比,DOX治疗后22种代谢标志物被显著下调,GA治疗后17种代谢标志物被显著下调。相较于DOX和GA组,GDOX联合用药进一步下调了这些代谢标志物在肝癌中的水平,这可能是两者联合起到增效作用的原因。通路富集分析中找到5条关键代谢通路,包括谷胱甘肽代谢,苯丙氨酸代谢,精氨酸和脯氨酸代谢,β-丙氨酸代谢,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸降解。这表明GA联合DOX的协同抗肿瘤作用,可能是通过干预多种氨基酸的代谢,进而影响肿瘤细胞的能量供应实现。

银杏黄酮苷元对氧化低密度脂蛋白所致内皮细胞炎症损伤的影响

目的：观察银杏黄酮苷元（ GA）对氧化低密度脂蛋白（ ox－LDL）诱导人主动脉内皮细胞（HAECs）细胞间粘附分子－1（ICAM－1）、血管细胞粘附分子－1（VCAM－1）、单核细胞趋化蛋白－1（MCP－1）的影响及核转录因子－κB（NF－κB）在其中的调控作用。方法体外培养HAECs，建立HAECs的ox－LDL损伤模型前，用不同浓度GA预处理细胞1 h，用四甲基噻唑兰法检测内皮细胞活性，免疫荧光法检测细胞核内NF－κB的激活，细胞酶联免疫吸附法检测MCP－1、ICAM－1及VCAM－1水平。结果30～60 mg·L^－1 GA预处理组显著抑制ox－LDL诱导的内皮细胞NF－κB激活（ P＜0.05），下调VCAM－1、ICAM－1及MCP－1表达（ P＜0.05）。结论 GA能够有效抑制ox－LDL诱导HAECs炎症因子ICAM－1、VCAM－1、MCP－1表达。

银杏黄酮苷元对氧化低密度脂蛋白诱导的人主动脉内皮细胞凋亡的保护作用

目的观察银杏黄酮苷元(GA)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人主动脉内皮细胞(HAECs)凋亡及对P53、Bcl-2表达的影响及其作用机制。方法用荧光Hoechst33258染色检测细胞凋亡的形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;实时荧光定量PCR检测细胞凋亡相关基因P53和Bcl-2mRNA的表达。结果不同浓度GA实验组可明显改善细胞核染色质凝集、核固缩的变化。各浓度实验组的内皮细胞凋亡率分别为(22.35±0.30)%,(16.90±0.36)%,(13.66±0.41)%,与损伤组比较显著降低(P<0.01)。实验组Bcl-2 mRNA表达明显增加(P<0.01)、而P53 mRNA表达明显降低(P<0.01)。结论 GA对ox-LDL诱导HAECs凋亡有剂量依赖性拮抗作用,可能与其抑制NF-κB信号通路的激活、下调P53基因表达、上调Bcl-2基因表达有关。

银杏黄酮苷元的药代动力学研究进展

银杏作为世界上最古老的稀有植物之一,银杏叶提取物的药用价值历史悠久,其提取物中的银杏黄酮苷元广受研究者们的青睐,它在心血管等疾病的预防和治疗方面有卓越成效。在中医药研究中,中药药代动力学是必不可少的方法和手段,近年来关于中药药动学的研究报道频频出现,中药药代动力学也得到迅猛发展,同时也形成有规模的研究方法,逐渐呈现出更准确、科学的新理论、新思路为阐明中药药动学特征提供了突破性进展。本文通过综述国内外文献,总结银杏黄酮苷元活性成分的药动学特征,分析阐述其吸收,分布,代谢,排泄以及疾病状态下的药代动力学研究,为其药用资源的深度开发利用提供一定的参考。