银杏酸纯化、结构修饰及活性研究进展

银杏酸(ginkgolic acid,GA)是一种酚酸类的小分子有机化合物,是以银杏(Ginkgo biloba L)为主要原料的提取物,主要存在于银杏外种皮中。由于具有明显细胞毒性,因而被规定为制剂的限制性指标成分,但同时也具有极强的研究与应用价值。近些年来,有关于银杏酸的研究报道越来越多,使其已逐渐成为了热点研究之一。现今对近些年银杏酸的纯化以及其衍生物生物活性的相关研究进行综述,并着重介绍了银杏酸其母核结构的几种修饰途径,总结了初步的构效关系,以期为今后银杏酸的科学研究提供参考价值,为今后充分利用我国的银杏资源,为银杏酸的大规模生产提供理论依据。

乙二胺-N-丙基改性硅胶的可控键合制备及其在银杏酸脱除中的应用研究

优化了乙二胺-N-丙基键合硅胶(PSA)键合量可控的制备工艺,考察了PSA制备的批次重复性,并进行PSA制备的中试放大实验。采用红外光谱、元素分析及电位滴定法对所制备的PSA进行性能评价,结果表明:在3460 cm^(-1)处出现了N—H伸缩振动峰,在2960 cm^(-1)和2860 cm^(-1)处出现了—CH的不对称和对称伸缩振动峰,708 cm^(-1)处出现了—NH2的变形振动吸收峰,表明乙二胺-N-丙基成功接枝到硅胶表面;随着制备体系中硅烷化试剂比例的增加,碳、氮和氢元素的含量以及电位滴定法得到的离子交换容量均呈现上升趋势,说明乙二胺-N-丙基官能团的键合量逐渐增加。将制备的PSA填充成分离纯化小柱,考察了不同键合量PSA对银杏叶提取物中银杏酸的脱除效率,结果表明:PSA对银杏酸有强吸附能力,可应用于银杏叶提取物中银杏酸的脱除,2^(#)、3^(#)、4^(#)和5^(#)PSA分离纯化柱的最大上样体积分别为21、22、23、24 mL,且脱除效率随乙二胺-N-丙基键合量的增加而升高。

注射用银杏叶提取物及其制剂中总银杏酸含量的测定

目的:建立超高效液相色谱串联三重四极杆质谱测定注射用银杏叶提取物及其制剂中总银杏酸的方法。方法:采用HLB固相萃取净化制剂,Waters Cortecs T3色谱柱(50 mm×2. 1 mm,2. 7μm),以甲醇-1%冰醋酸溶液(90∶10)为流动相,在电喷雾离子化负离子模式下,以多反应监测方式(MRM)检测。结果:银杏酸C13:0、C15:1、C17:1在0～50 ng/mL范围内成良好线性关系,相关系数均大于0. 999;平均加样回收率为97. 3%～115. 2%,相对标准偏差(RSD)为0. 3%～3. 4%;检出限分别为0. 03、0. 06、0. 04 mg/kg。结论:本方法可应用于实际样品的测定。

DLLME-HPLC方法测定银杏叶提取物中银杏酸单体含量

银杏叶提取物(EGB)中的银杏酸(GAs)对渐冻症、癌症和其他一些疑难病症具有独特的疗效。因此,提高液相色谱检测EGB中银杏酸单体的灵敏度和准确度成为探讨EGB药效的重要研究内容。本文以三氯甲烷为分散液液微萃取剂,对EGB试样中的微量GAs进行分散液液微萃取(DLLME)前处理,然后结合高效液相色谱进行检测,从而建立了一种测定EGB中银杏酸单体含量的方法。该方法对EGB中5种银杏酸单体的检出限为0.11~0.22 mg·kg^(-1),定量限为0.36~0.74 mg·kg^(-1)。在5.00 mg·kg^(-1)加标水平下回收率为94.35%~102.49%。

银杏酸的分光光度法测定

建立了简便、快速、准确的银杏酸含量的分光光度分析方法。银杏酸粗提物经硅胶柱色谱一次预净化处理后 ,即可在 2 4 2nm或 310nm波长处测定银杏酸。线性回归方程分别为 :A =1.5 5× 10 -4+16 .36C(R =0 .999)或A =0 .0 31+9.0 8C(R =0 .997) ,两者的线性范围均为 6 .0～ 110mg/L。在 2 4 2nm和 310nm两个波长处测定的银杏酸含量都与HPLC法测定结果接近。实验测得了各银杏酸单体的摩尔吸光系数 ,其数值相近。该法简便、快速、准确 ,线性范围宽 ,最低可测至 5 .72mg/L 。

银杏外种皮中银杏酸的体外抗肿瘤活性研究

目的 :探讨银杏酸对肿瘤细胞和正常细胞生长的影响。方法 :从银杏外种皮中制备纯度 90 %的银杏酸同系混合物。采用MTT法 ,检测银杏酸对各细胞株生长的抑制作用。结果 :银杏酸浓度为 5 0 μg/ml时 ,对肿瘤细胞生长都有明显的抑制作用 ,其中对肺癌LTEP a 2细胞抑制率达到 5 9 1% ,而对正常细胞无影响 ;高浓度银杏酸对正常细胞和肿瘤细胞生长的抑制作用趋于一致。结论 :银杏酸对体外培养的肿瘤细胞有较强抑制作用 ,浓度低于5 0 μg/ml时对正常细胞生长无影响。

银杏叶提取物和银杏酸的抗菌活性研究

测定了含不同浓度银杏酸的银杏叶提取物和银杏酸对常见病菌的抑菌活性,以及不同pH条件和热处理对银杏酸抑菌活性的影响。结果表明银杏叶提取物中起抑菌作用的成分为银杏酸,银杏酸对G+(指GAs有抑制作用的菌株)菌的抑菌效果尤为显著,抑菌活性随浓度和作用时间的增加而加强,并具有一定的热稳定性。

银杏酸抑菌效果的初步研究

对银杏外种皮石油醚提取物和银杏酸的抑菌活性进行了初步研究,发现银杏酸和外种皮粗提物对金葡菌、蜡样芽孢杆菌、枯草杆菌均有抑制作用,对耐青霉素金葡菌也有一定的抑制作用,银杏酸与青霉素联用,具有加强作用。

银杏酸、阿奇霉素和大蒜素抗弓形虫增殖效果研究

目的评价银杏酸、阿奇霉素和大蒜素体外和体内抗弓形虫增殖的效果。方法体外试验,培养HFF细胞做为弓形虫宿主细胞,采用MTT法检测3种药物的安全浓度和体外抗弓形虫增殖的效果。体内试验,以腹腔注射的方式给药,观察感染弓形虫小鼠的存活时间,比较3种药物的体内抗弓形虫增殖效果。结果银杏酸和阿奇霉素可显著抑制细胞内弓形虫的增殖,两者效果相近。银杏酸和阿奇霉素均可延长小鼠存活时间。大蒜素抗弓形虫效果微弱。结论银杏酸具有抗弓形虫作用。

热辅助下的在线甲基衍生化-气相色谱法分析银杏叶中的银杏酸

采用热辅助下的在线甲基衍生化-气相色谱法测定银杏叶中的银杏酸。银杏叶样品与衍生化试剂四甲基氢氧化铵(TMAH,25%甲醇溶液)同时进样,在300℃的进样口瞬间生成了银杏酸甲基衍生物,银杏叶中6种银杏酸得到很好的分离。在一定的质量浓度范围内银杏酸的线性关系良好,回归系数均大于0.9966,最低检出限范围为0.8～2.8mg/kg。银杏叶中主要的烷基酚类物质为银杏酸C13∶0,C15∶1和C17∶1,它们的含量(用质量分数表示)分别为11.0%,36.7%和42.8%,3次平行测定的相对标准偏差(RSD)均小于3.4%(n=3)。银杏叶样品中总银杏酸的含量为4.0～10.9mg/g。该方法无需繁琐费时的衍生化和纯化等前处理步骤,不失为银杏叶中银杏酸测定的一种快速、简便、准确的方法。

高效液相色谱法测定银杏外种皮中银杏酸的含量

建立了反相高效液相色谱法测定银杏外种皮中银杏酸含量的方法 ,色谱柱为InertsilODS 2 ,流动相为甲醇 3 %HAc溶液 (92∶8,V/V) ,流速 1.0mL/min ;柱温 40℃ ;紫外检测波长 3 10nm ;线性范围 :0 .5 72～ 10 .3 0μg(相关系数R =0 .9999) ;检测限 5 .2ng(3σ)。银杏外种皮提取物经一步硅胶柱层析预处理。实验测得银杏外种皮中银杏酸含量为 5 .46% ;平均回收率为 97.5 % ,RSD为 1 9% (n =6)。该方法简便、准确、线性范围宽。

银杏酸单体的抗菌活性研究

目的 :从银杏外种皮中得到银杏酸混合物及三种单体 ,研究银杏酸的抗菌活性及其侧链与活性的关系。方法 :采用二倍稀释法测定了银杏酸混合物、各单体及水杨酸的最低抑菌浓度。结果 :银杏酸混合物对痤疮丙酸杆菌等G+菌具有良好的抑制作用。水杨酸无侧链 ,无抗菌活性。银杏酸侧链为C13∶0时抑菌效果最强。结论 :银杏酸的侧链是其产生抗菌活性的主要效应部位 。

银杏酸的高效液相色谱法测定

目的 建立银杏酸的简便预净化处理和HPLC含量测定方法。方法 用LC DAD ESI MS对银杏酸进行定性鉴定。银杏叶经正己烷提取、硅胶柱色谱净化处理 ,HPLC测定。色谱分析条件 :色谱柱为InertsilODS 2 ,流动相为甲醇 3%HAc溶液 (92∶8) ,流速 1 0mL·min- 1 ,柱温 40℃ ,紫外检测波长 310nm。结果 银杏叶中存在 5种银杏酸C13∶0 ,C15∶0 ,C15∶1,C17∶1和C17∶2 ,其中C15∶1和C17∶1约占银杏酸的 85 % ,C17∶2银杏酸未见国内文献报道。银杏叶提取物经硅胶柱色谱处理后 ,其HPLC谱中除银杏酸峰外 ,几无其他杂质峰。平均回收率 97 0 % ,RSD为 1 7%(n =6 )。结论 该方法准确、简便、可靠 ,可用于银杏酸的定量分析。

HPLC法测定白果中银杏酸的含量

目的:建立反相高效液相色谱法测定银杏白果中有毒成分银杏酸含量。方法:用LC/DAD/ESI/MS对白果中的银杏酸进行定性鉴定。白果经石油醚索氏提取、浓缩、定容后,直接进样进行HPLC测定。色谱分析条件:色谱柱为Inertsil ODS-2(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-3%HAc溶液(92:8),流速1.0 mL·min-1,柱温40℃,紫外检测波长310 nm。结果:白果中含有5种银杏酸:C15:1,C17:2,C15:0和C17:1(存在2种同分异构体),还有1种作者推测为C17:3,其中C17:1和推测为C17:3的银杏酸为首次在白果中发现。该法精密度和重复性较好,其5次测定的RSD分别为0.71%和3.7%。白果中银杏酸含量达200 mg·kg-1左右,大大超过国际限量标准,其食用安全性应引起高度重视。结论:该法简便、快速、准确,适用于白果及其产品中银杏酸的分析,可为白果产品的质量监控和安全性评价提供基础。

高效液相色谱法测定银杏叶提取物及其制剂中银杏酸的含量

目的 建立银杏叶提取物及其制剂中银杏酸含量的HPLC测定方法。方法 银杏叶提取物及其制剂经石油醚提取 ,提取液浓缩后用石油醚定容 ,HPLC直接测定 ,并用LC MS对其中的银杏酸进行了定性鉴定。色谱分析条件 :色谱柱为InertsilODS 2 ,流动相为甲醇 3%HAc溶液 (92∶8) ,流速 1 0mL·min- 1 ,柱温 4 0℃ ,紫外检测波长310nm。结果 银杏叶提取物中存在 6种银杏酸C13:0 ,C15 :0 ,C15 :1,C17:1,C17:2和一种可能是C17∶3的银杏酸化合物 ,其中C13∶0 ,C15∶1和C17∶1占总银杏酸的 94 %以上。实验测得高银杏酸含量的提取物中银杏酸含量为1 12 % ,RSD为 2 4 % (n =5 ) ;银杏叶提取物片剂中银杏酸含量为 4 9 2 μg·g- 1 ,RSD为 4 3% (n =5 )。平均回收率98 2 % ,RSD为 2 6 % (n =5 )。结论 该方法准确、快速、简便 。

银杏中银杏酸诱导人白血病细胞U937凋亡的研究

目的:研究银杏酸体外对U937细胞生长的抑制作用,探讨其作用机理。方法:采用MTT法检测银杏酸对U937细胞增殖的影响,激光共聚焦显微镜观察细胞形态的变化,DNA琼脂糖电泳检测其生化特征的改变,流式细胞仪分析细胞凋亡率。结果:U937细胞经银杏酸作用24～48h,细胞的生长明显被抑制;银杏酸作用28h出现了细胞皱缩、核浓缩、体积缩小等明显的凋亡的形态学特征;细胞DNA经琼脂糖电泳可见典型的梯形条带;10.0μg/ml的银杏酸作用40h后,细胞凋亡率为14%。结论:银杏酸对U937细胞具有明显的抗肿瘤活性,其作用机理与诱导细胞凋亡有关。

银杏酸的分离、鉴定及对5种蔬菜病原真菌的抑制作用

银杏外种皮采用体积分数为70%乙醇回流提取得到含活性成分银杏酸的粗提物,用乙醚、质量分数为5%Na2CO3、质量分数为5%的NaOH萃取分离,经硅胶柱层析纯化得银杏酸同系物;采用HPLC进行定量、纯度测定,用LC/MS对其中的银杏酸进行定性鉴定。实验测得银杏外种皮中银杏酸含量为3.12%;银杏酸同系物纯度为86.7%;平均回收率为97.3%,RSD为1.3%(n=5)。HPLC和LC/MS图谱表明该方法获得的银杏酸同系物无其他杂质峰,纯度高。银杏酸对甘蓝黑斑病菌抑制作用较强,EC50为24.80 mg/mL。

银杏酸5种同系物单体的制备及其杀灭钉螺的作用

目的探索分离纯化的银杏酸同系物单体对钉螺的影响。方法用石油醚从银杏外种皮提取银杏酸,经半制备高效液相色谱(HPLC)分离,通过液相-质谱联机系统鉴定。按WHO"杀螺剂实验室终筛方法"检测银杏酸分离纯化的5个同系物单体杀灭湖北钉螺的作用。结果纯化的银杏酸5个同系物单体为GA13:0、GA15:1、GA15:0、GA17:1和GA17:2,其母核苯环上分别有1个13、15及17烷基或烯基的侧链。各单体占总银杏酸的比例分别为17.6%、52.3%、3.2%、23.3%和3.6%。杀螺活性顺序为:GA13:0>GA15:1>GA15:0>GA17:1>GA17:2。24h对钉螺的半数致死浓度(LC50)依次为20.79、22.28、33.76、51.89和59.10mg/L。GA13:0和GA15:1对钉螺上爬的抑制作用明显。结论银杏酸单体杀灭钉螺的作用受其侧链碳原子数量以及所含双键数目的影响,单体GA13:0及GA15:1杀钉螺作用明显,并能显著抑制钉螺上爬。单体GA15:0也有一定的杀螺活性。

银杏酸GA1对酪氨酸酶和黑色素瘤细胞的作用

对银杏外种皮提取的银杏酸通过制备型HPLC进行分离纯化,得到同系物单体GA1.研究GA1对酪氨酸酶的作用机理和对黑色素瘤细胞B16的作用.结果表明GA1可抑制酪氨酸酶单酚酶活力,对酪氨酸酶双酚酶具有较强的竞争性可逆抑制作用.低浓度GA1对黑色素细胞没有明显的杀伤作用,能明显降低细胞中黑色素的表达,是良好的酪氨酸酶抑制剂.