银蓝调脂胶囊对ZDF大鼠(fa/fa)高脂血症合并糖尿病的改善作用

目的评价银蓝调脂胶囊对ZDF大鼠(fa/fa)高脂血症合并糖尿病的改善作用,并探讨其调节糖脂代谢紊乱的作用机制。方法采用高脂饮食诱导ZDF大鼠(fa/fa)建立高脂血症合并糖尿病模型,将大鼠随机分为模型组、非诺贝特+二甲双胍组和银蓝调脂胶囊高、低剂量组,每组6只,另取6只ZDF对照大鼠(fa/+)为正常组,灌胃给药12周后采血,检测各组血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、葡萄糖(GLU)、胰岛素(INS)、糖化血红蛋白(HbA1c)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、脂联素(ADP)和瘦素(Leptin)水平,HE染色观察肝组织病理学并量化分析,蛋白免疫印迹法检测肝组织乙酰辅酶A羧化酶(ACC1)、脂肪酸合成酶(FAS)和转录因子肝X受体α(LXRα)蛋白表达。结果与模型组比较,非诺贝特+二甲双胍组和银蓝调脂胶囊各剂量组大鼠血清TC、TG、LDL-c、Leptin、TNF-α、IL-6、GLU、HbA1c水平降低(P<005,P<001),INS、HDL-c、ADPN水平升高(P<005,P<001),肝脏脂肪沉积减轻,脂滴空泡相对面积比例降低(P<005,P<001),肝组织FAS蛋白表达降低(P<005,P<001);非诺贝特+二甲双胍组和银蓝调脂胶囊高剂量组肝组织ACC1蛋白表达降低(P<005,P<001)。结论银蓝调脂胶囊可降低ZDF大鼠(fa/fa)高脂血症合并糖尿病的血脂、血糖水平,其作用机制可能与改善体内脂质代谢与炎症反应、调节胰岛素分泌、调控肝脏ACC1和FAS蛋白表达,进而减少肝脏脂质堆积有关。

银蓝调脂胶囊化学成分鉴定及其药材归属

目的鉴定银蓝调脂胶囊化学成分,并对其进行药材归属。方法该药物50%乙醇提取液的分析采用Waters ACQUITY BEH C 18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm);流动相乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温30℃;电喷雾离子源;正负离子扫描,通过高分辨质谱数据、相关文献、对照品进行鉴定。结果共鉴别出77种成分,包括42种黄酮、16种皂苷、4种香豆素、4种内酯、10种有机酸、1种柠檬苦素,并且20种归属于绞股蓝,12种归属于化橘红,14种归属于银杏叶,38种归属于蜂胶,7种为共有成分。结论本实验基本明确了银蓝调脂胶囊化学物质基础,可为该制剂质量控制及药效物质基础研究提供实验依据和理论支撑。

银蓝调脂胶囊对实验性高脂血症新西兰兔血清脂质水平的影响

目的观察银蓝调脂胶囊对实验性高脂血症新西兰兔的调血脂作用。方法给新西兰兔灌服高脂乳剂6周制造新西兰兔高脂血症模型,造模2周后检测新西兰兔血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平并分组给药,灌胃给予不同剂量银蓝调脂胶囊4周后检测新西兰兔血清TG、TC、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)、载脂蛋白A1(ApoA1)、载脂蛋白B(ApoB)、脂蛋白脂酶(LPL)、肝酯酶(HL)、游离脂肪酸(FFA)等指标的变化。结果银蓝调脂胶囊明显降低高脂血症新西兰兔血清TC、TG的量,提高LPL、总酯酶活性,降低LDL-c、ApoA1、ApoB、FFA的量,提高ApoA1/ApoB比值。结论银蓝调脂胶囊具有调血脂作用。

银蓝调脂胶囊对实验性高脂血症大鼠的调血脂作用研究

目的:观察银蓝调脂胶囊对高脂血症模型大鼠血脂的影响,为临床用药提供实验依据。方法:给予大鼠高脂饲料8周,制造高脂血症大鼠模型。造模4周后测定甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)含量,按血脂水平分组给药,测定灌服银蓝调脂胶囊4周后高脂血症模型大鼠甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)、载脂蛋白A1(ApoA1)、载脂蛋白B(ApoB)、脂蛋白脂酶(LPL)、肝酯酶(HL)、游离脂肪酸(FFA)等指标的变化。结果:银蓝调脂胶囊能明显降低高脂饲料饮食所致实验性高脂血症大鼠血清TC、TG含量,升高HDL-c、ApoA1含量和LPL、HL、总酯酶活性,降低LDL-c、ApoB、FFA含量,提高ApoA1/ApoB比值。结论:银蓝调脂胶囊具有明确的调节高脂血症的作用。

HPLC法同时测定银蓝调脂胶囊中的三种LXRα激动活性化合物

目的建立高效液相色谱法对银蓝调脂胶囊中的3种有LXRα靶标调控活性的化合物进行定量分析。方法采用HPLC法,色谱条件为:以0.05%磷酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相;采用梯度洗脱,梯度程序为0~10min,10%~15%B;10~40min,15%~30%B;40~50min,30%~40%B;50~60min,40%~10%B;检测波长203nm,柱温25℃,流速1.0m L·min^(-1);结果银蓝调脂胶囊中橙皮苷在10~200μg·m L^(-1)浓度范围内,柚皮苷和绞股蓝皂苷ⅩⅦ在1~20μg·m L^(-1)浓度范围内线性良好(r2=0.9992~0.9996),精密度在1.09~1.71%之间,平均回收率在100.9~103.7%之间;结论该方法灵敏度高、专属性好、线性范围良好、简便准确,适合于对银蓝调脂胶囊中3种化合物进行定量分析测定。

银蓝调脂胶囊通过促进RCT和TG水解调控高脂血症小鼠脂质代谢的机制研究

目的:从脂类代谢角度探索银蓝调脂胶囊改善高脂血症的机制。方法:将ApoE^(-/-)雄性小鼠随机分为2组,分别采用普通饲料和高脂饲料饲养,8 w后将2组动物均分别分为模型组、阿托伐他汀组及银蓝调脂胶囊高、低剂量组,共8组,每组10只,另取10只正常C57BL/6小鼠作为正常对照组。给药4 w后,测定生化指标,用RT-qPCR测定肝脏和回肠中与脂类代谢相关的mRNA表达水平,并对肝脏进行病理学观察。结果:银蓝调脂胶囊可显著降低模型动物肝脏指数及血脂水平,显著下调肝脏HMG-CR、ApoB、CYP7A1 mRNA表达,上调LPL、LCAT、ApoA1、SRB1 mRNA表达,抑制回肠中ABCG5、ABCG8 mRNA表达,并能明显改善肝细胞的脂肪变性。结论:银蓝调脂胶囊能调控高脂血症ApoE^(-/-)小鼠模型的血脂水平,其作用机制与促进RCT进程及增强TG水解作用有关。

银蓝调脂胶囊对巨噬细胞泡沫化的抑制作用及机制研究

目的:基于LXRα-ABCA1通路和炎症机制研究银蓝调脂方对巨噬细胞泡沫化的抑制作用及机制。方法:采用ox-LDL(50 mg·L-1)处理RAW264.7细胞构建巨噬细胞泡沫化模型,制备银蓝调脂胶囊含药血清,细胞分为空白组、模型组、给药组。药物干预后,MTT法检测细胞增殖,利用油红O染色观察细胞内脂质堆积情况,GPO-PAP法测定细胞内总胆固醇含量,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测mRNA表达、Westernblotting检测蛋白的表达。结果:与模型组比较,银蓝调脂胶囊能显著抑制巨噬细胞泡沫化、减少脂质堆积,显著上调LXRα、ABCA1基因及蛋白表达,同时抑制炎症因子COX2、iNOS基因及蛋白的表达。结论:银蓝调脂胶囊对巨噬细胞泡沫化的具有抑制作用,可能与抑制炎症反应、上调LXRα-ABCA1通路有关。

银蓝调脂胶囊抗ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化的作用

目的通过给予ApoE基因敲除小鼠高脂饮食建立动脉粥样硬化模型,探讨银蓝调脂胶囊抗动脉粥样硬化的作用及其机制。方法选取10只C57BL/6小鼠作为正常组,50只ApoE^(-/-)小鼠随机分成模型组,辛伐他汀片组,银蓝调脂胶囊高、中、低剂量组,每组10只。使用高胆固醇鼠饲料喂养ApoE^(-/-)小鼠12周,建立动脉粥样硬化模型。造模12周后连续灌胃给药12周,每天1次。检测血清ox-LDL水平,检测肝脏TC、TG、LDL-C水平,检测胸主动脉斑块面积及肝脏脂质面积,RT-qPCR法和Western blot法检测银蓝调脂胶囊对小鼠LXR信号通路相关基因和蛋白表达的影响。结果银蓝调脂胶囊能降低ApoE^(-/-)小鼠血清中ox-LDL水平(P<0.01)以及胸主动脉脂质斑块面积(P<0.01),减少肝脏中TC、TG、LDL-C水平(P<0.05,P<0.01)和脂质面积(P<0.01)。机制研究表明,银蓝调脂胶囊能上调肝脏中ABCG5、SR-B1 mRNA表达(P<0.01)和降低iNOS mRNA表达(P<0.01),上调LXRα、ABCG5、CYP7A1、SREBP-1c蛋白表达(P<0.05)并降低iNOS、COX2蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论银蓝调脂胶囊有较好的抗动脉粥样硬化作用,其机制可能与激活LXR信号通路,促进胆固醇逆向转运并抑制炎症有关。

银蓝调脂胶囊调节脂质代谢物质基础的筛选

目的 筛选银蓝调脂胶囊调节脂质代谢的物质基础。方法 采用计算机辅助药物设计(CADD)技术,从TCMSP数据库下载银蓝调脂胶囊组方化学成分,分析候选靶标羟甲基戊二酰辅酶A(HMG-COA)、过氧化物酶增殖物激活受体α(PPARα)、角鲨烯合成酶(SQS)配体结合模式,采用分子对接对银蓝调脂胶囊进行虚拟筛选,分子相似度将银蓝调脂胶囊成分与上述3个靶标已知的活性成分进行比较,对接打分归一化结果和相似度值对命中化合物综合评分。结果 HMG-COA、PPARα、SQS的结合模式热点残基分别有8、7、4个。作用于HMG-COA的潜在活性化合物主要来源于蜂胶中的奎宁酸及二咖啡奎宁酸类化合物,作用于PPARα的主要来自于蜂胶和化橘红中的黄酮类化合物以及奎宁酸及二咖啡奎宁酸类化合物,作用于SQS靶标的潜在活性化合物来源于绞股蓝中的侧链氧化型甾醇类化合物以及蜂胶中的奎宁酸及二咖啡奎宁酸类化合物。结论 银蓝调脂胶囊可通过多种化合物与HMG-COA、PPARα和SQS结合,从而发挥调节脂质代谢治疗高脂血症的作用。

银蓝调脂胶囊通过调节自噬治疗非酒精性脂肪肝的机制研究

目的探讨银蓝调脂胶囊调控自噬相关信号通路对非酒精性脂肪肝(Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)治疗的机制。方法选取60只小鼠,随机抽取10只作为正常对照组,余下高脂饲料喂养12周建立NAFLD模型。模型复制成功后,将造模组分成模型组、非诺贝特组及银蓝调脂胶囊高、中、低剂量组,每组10只。各给药组按剂量分别灌胃相应药物30 d进行干预。给药结束后检测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)含量;取整肝计算肝脏系数;苏木精-伊红(HE)和油红O染色观察各组小鼠肝脂肪变性程度及组织学特征;Elisa试剂盒检测血清炎症因子白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF)-α,氧化应激相关丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;采用试剂盒检测肝脏载脂蛋白(Apo)A1、ApoB、ApoE的水平;Western Blot法检测脂质生成关键蛋白SREBF-1、FAS及ACC1的蛋白表达,检测自噬通路Beclin1、ATG3、ATG5、ATG7、P62的蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,模型组小鼠肝脏存在明显脂肪样变性,体质量、肝脏系数及血清TC、TG、LDL-C、ALT、AST、MDA含量均明显升高(P<0.01),血清中促炎因子IL-6、TNF-α含量明显增加(P<0.01),HDL-C、SOD、GSH-Px水平明显降低(P<0.01);肝脏组织中ApoA1含量明显降低(P<0.01),ApoB、ApoE含量明显升高(P<0.01);肝组织中脂肪合成蛋白SREBF-1、FAS及ACC1表达升高(P<0.01),小鼠肝脏中P62的表达升高而Beclin1、ATG3、ATG5蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。经过治疗后,非诺贝特组及银蓝调脂胶囊各剂量组小鼠的脂肪变性得到改善,肝脏系数、血清中TC、TG、LDL-C、ALT、AST、MDA、IL-6、TNF-α含量均明显降低(P<0.01),HDL-C、SOD、GSH-Px水平明显升高(P<0.01),ApoB、ApoE含量明显降低(P<0.01),肝脏脂肪合成蛋白ACC1表达明显降低(P<0.01),肝脏P62蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01);非诺贝特组及银蓝调脂胶囊高、中剂量组肝脏组织中ApoA1含量明显升高(P<0.05),SREBF-1、FAS蛋白表达降低(P<0.01),ATG5、Beclin1蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01);非诺贝特组及银蓝调脂胶囊高剂量组ATG3、ATG7蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论银蓝调脂胶囊通过调节自噬相关通路改善脂肪变性从而治疗非酒精性脂肪肝。