链酶亲和素-生物素ELISA检测人心肌肌钙蛋白T

目的 建立人心肌肌钙蛋白T (cTnT)链酶亲和素-生物素（SAB）双抗体夹心酶联免疫分析（ELISA）方法，诊断急性心肌损伤性疾病。方法 以固相化单抗3F7捕捉样品中cTnT，生物素化3H12单抗为检测抗体，加入SA-HRP，显色。根据已知不同浓度标准cTnT显色后D(l)值的标准曲线，检测待测样品cTnT含量。结果 cTnT的最低检测值为0.15 ng/ml，批内变异系数为3.8%，批间变异系数为11.2%，回收率为98%。35例急性心肌损伤患者cTnT含量为(0.68±0.17) ng/ml，明显高于52例正常人对照组(0.20±0.03) ng/ml(P<0.01)。结论 本方法灵敏、特异、稳定，可用于临床急性心肌损伤疾病的诊断。

生物素-链霉亲和素酶免疫法PSA测定的评价

目的评价生物素-链霉亲和素酶免疫分析法(BSA-ELISA)测定前列腺特异性抗原(PSA)并与化学发光法(CLIA)进行比较。方法根据EP9-A文件要求采集数据,并以相应软件分析这两种方法的相关性;同时对BSA-ELISA的测定范围,变异系数(CV),最小检测限进行测定。结果两种方法测定的结果具有较好的相关性,回归方程У=0.985Х-0.131,相关系数(r)=0.997。PSA的批内平均CV为2.21%,批间平均CV为3.08%。测定范围为1.50～85.00μg/L。最小检测限为0.30μg/L。结论采用全自动酶免疫分析仪的BSA-ELISA与CLIA自动分析仪测定PSA的相关性好,结果稳定,偏差小,可以在临床上常规应用。

血管紧张素Ⅰ化学发光免疫分析方法的建立

目的：建立人血管紧张素Ⅰ（AngⅠ）化学发光免疫分析方法,通过测定血浆中血管紧张素Ⅰ的含量计算肾素活性。方法：用生物素标记AngⅠ抗原,荧光素标记AngⅠ抗体,将抗荧光素抗体包被于化学发光板,以链亲和素酶为催化剂,采用竞争法建立AngⅠ化学发光免疫分析方法。结果：本方法的测量范围为100～7 800 pg/ml,灵敏度为24.3 mU/ml,批内变异为5.6%～8.7%,批间变异为6.8%～10.4%,回收率为95.4%～105.3%,稀释实验测定值与理论值呈线性相关,相关系数为r=0.999。与放射免疫分析试剂盒的相关性方程分别为y=0.95x＋235.70,相关系数r=0.973。包被板、生物素标记AngⅠ抗原以及荧光素标记AngⅠ抗体在37℃存放一周稳定性良好。结论：方法学鉴定结果符合免疫分析的基本要求。

尿D-氨基酸氧化酶的ELISA检测和临床应用

目的为探索尿Ｄ－氨基酸测定的临床意义。方法 采用多克隆的ＩｇＧ片段和生物素－链霉亲和素－过氧化物酶系统测定尿Ｄ－氨基酸的含量。检测了２１例正常人和４４例各种肾脏疾病患者尿ＤＡＯ浓度，同时测定尿Ｎ－乙酸－β－Ｄ－氨基葡萄糖苷酶（ＮＡＧ）和α１－微球蛋白（ＡＭＧ）。结果尿ＤＡＯ在各种肾脏疾病患者中均有不同程度的增高，并显示尿ＤＡＯ与ＮＡＧ和ＡＭＧ有高度相关性（ｒ＝０．７２９，Ｐ＜０．０１，ｒ＝０．６４３，Ｐ＜０．０１）。结论提示尿 ＤＡＯ检测可作为临床判断肾功能不良的监测指标之一。

胶质瘤促血管生成素2基因表达的临床意义(附52例分析)

目的 探讨胶质瘤促血管生成素2 (Ang2) 基因在脑胶质瘤的表达及其临床意义。方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT PCR) 和链酶亲和素过氧化物酶复合物SABC法检测52例人脑胶质瘤和8例正常脑组织中Ang2基因表达。结果 50 例脑胶质瘤和8 例正常脑组织均可表达Ang2 mRNA片段。高恶度胶质瘤Ang2 mRNA及蛋白表达显著高于低恶度胶质瘤(P<0 01); 低恶度胶质瘤Ang2 mRNA及蛋白表达显著高于正常脑组织(P<0 05)。免疫组化染色显示, Ang2蛋白主要分布在高恶度胶质瘤组织的瘤细胞和内皮细胞, 低恶度胶质瘤呈低水平表达, 正常脑组织不表达。结论 Ang2的表达与胶质瘤的分级密切相关, 可能对胶质瘤的恶性演进起促进作用。

链霉菌L-183发酵条件优化

目的对链霉菌L-183生产链霉亲和素(streptavidin,SA)的发酵条件进行优化。方法通过单因子和正交实验,获得SA发酵培养基的最佳配方比。结果在优化条件下,SA的产量达到151.5 mg/L。与先前报道相比,产量提高36.5%,且成本降低,操作步骤更为简化。结论链霉菌L-183生产链霉亲和素的发酵条件优化为规模化生产奠定了基础。

新生血管抑制剂VEGFR2-Fc的检测方法建立与方法学验证

目的建立重组人血管内皮生长因子受体Fc融合蛋白(VEGFR2-Fc)血药浓度的检测方法并进行验证,为该药物的动力学研究提供方法学。方法以羊抗人IgG-Fc作为捕获抗体,以生物素标记羊抗人VEGF R2为检测抗体,建立双抗夹心的BA-ELISA检测方法,并开展方法学试验。结果标准品的线性范围为28～0.4375ng/ml,相关系数达到0.999;质控浓度(20ng/ml、10ng/ml和5ng/ml)的回收率分别为103.159%、116.092%和102.528%,板内和板间精密度分别是8.87%、3.27%、15.41%和12.38%、7.97%、16.74%;灵敏度为0.25ng/ml。结论建立的BA-ELISA检测VEGFR2-Fc方法符合生物技术药物的方法学标准,可以用于体内药代动力学研究的分析方法。

新型食物不耐受sIgG定量检测方法的构建

目的 以检测鸡蛋特异性免疫球蛋白G（sIgG）为例，探讨新型食物不耐受的定量检测方法。方法 选择行食物过敏原sIgG检测的患者173例，另择健康体检者78例为阴性对照。制备生物素化牛血清白蛋白-链酶亲和素酶标反应板，同时加入生物素化鸡蛋抗原和待检血清，洗涤后再加入酶标记抗人IgG，建立一种抗原间接包被-液相反应模式的酶联免疫方法；优化生物素化过敏原和酶标记抗体的浓度，确定反应条件。应用此方法检测血清标本中的sIgG。结果 选用生物素化蛋清作为抗原，其最适稀释比例是1∶2 000，酶标抗体的最适稀释比例是1∶12 000。此方法批内及批间变异系数分别为4.83%~8.55%,4.88%~7.93%；与蟹、牛奶、羊奶等的交叉反应率均〈10%；与临床现用食物不耐受sIgG检测法有较好的相关性（Y=0.977X＋8.45，r=0.961, P 〈 0.05）。结论 本检测方法可用于检测鸡蛋不耐受患者血清sIgG，操作简便，具有较高的准确性和特异度，重复性好，并显示较好灵活性潜能，为今后研制“个性化”随机组合食物品种的检测试剂盒奠定基础。

应用LsAB技术显示五羟色胺受体亚型1A在小鼠螺旋神经元上的分布

目的显示五羟色胺(serotonin,5-HT)受体亚型1A在螺旋神经元上的分布。方法采用出生后3～6天的乳小鼠耳蜗进行冰冻切片,应用酶标链亲和素-生物素(labeled streptavidin-biolin technique,LsAB)技术显示五羟色胺受体亚型1A在螺旋神经元上的分布。结果实验组的乳鼠耳蜗螺旋神经元的细胞膜显示阳性信号,阴性对照组的乳鼠耳蜗螺旋神经元的细胞膜上未发现阳性信号。结论五羟色胺受体亚型1A存在于耳蜗螺旋神经元的细胞膜上,推测当毛细胞释放兴奋性神经递质引起螺旋神经元兴奋时,五羟色胺作为神经递质对螺旋神经元的听觉传导活动起着重要的调节作用。

游离PSA与总PSA比值在前列腺疾病诊断中的应用

目的 :探讨总前列腺特异性抗原 (T_PSA)、游离前列腺特异性抗原 (F_PSA)及F_PSA/T_PSA(F/T)比值的变化在良性与恶性前列腺疾病诊断及鉴别诊断中的应用价值。方法 :应用链霉亲和素生物素酶联免疫吸附试验 (SAB_ELISA)方法 ,检测50例前列腺增生 (BPH)、41例前列腺癌 (PCa)及11例前列腺炎患者血清T_PSA、F_PSA含量并计算F/T比值。结果 :F/T比值在前列腺增生和前列腺癌中有显著性差异(P<0.01) ,当T_PSA在4～10μg/L之间时 ,前列腺增生和前列腺癌患者中F/T比值呈现显著差异(P<0.01)。结论 :同时检测T_PSA和F_PSA ,计算F/T比值 ,可弥补在诊断前列腺疾病的传统检验中单纯测定T_PSA的不足 ,尤其对T_PSA在4～10μg/L之间的诊断“灰色区”

尖锐湿疣皮损角质形成细胞ICAM-1及HLA-DR表达的研究

目的:研究细胞间黏附分子-1(ICAM-1)及人白细胞分化抗原DR区(HLA-DR抗原)在尖锐湿疣(CA)发病中的作用。方法:采用免疫组织化学技术一链酶亲和素一生物素复合物法(SABC法)对比研究CA初发组、CA复发组及正常人角质形成细胞(KC)表面ICAM-1及HLA-DR抗原的表达。结果:CA初发组与复发组间ICAM-1及HLA-DR抗原表达无显著性差异(P>0.05)。病例组中KC表面ICAM-1及HLA-DR抗原表达有一定相关性(r=0.4316,P<0.05)。结论:CA患者病损处KC表面表达ICAM-1及HLA-DR抗原使局部细胞免疫状态发生变化,诱导T细胞在病损处聚集、活化,是有效地启动并参与局部免疫应答、促进CA病损消退的关键。

上皮性卵巢癌组织中DLL4、Slit2表达相关性及意义

目的研究DLL4、Slit2在正常卵巢组织、上皮性卵巢良性肿瘤组织、上皮性卵巢交界性肿瘤组织、上皮性卵巢恶性肿瘤组织中表达情况,探讨两者在上皮性卵巢恶性肿瘤相互关系。方法标本来源于2009年1月至2016年12月包头市中心医院病理科收集的卵巢石蜡,采用免疫组化(SABC)法检测正常卵巢组织、良性肿瘤组织、交界性肿瘤组织、恶性肿瘤组织各30例,分析DLL4、Slit2在其表达情况及探讨两者关联性。结果 DLL4在正常卵巢组、良性肿瘤组、交界性肿瘤组、恶性肿瘤组中阳性表达依次为:13.33%、23.33%、33.33%、83.33%,其中卵巢恶性肿瘤组阳性表达与三者相比,均有显著性差异(χ~2值分别为29.433、21.696、15.429,均P<0.01),而正常卵巢组织、良性肿瘤组织、交界性肿瘤组织之间两两比较无统计学意义(χ~2值分别为1.002、3.354、0.739,均P>0.05)。Slit2在正常卵巢组、良性肿瘤组、交界性肿瘤组、恶性肿瘤组中阳性表达依次为63.33%、66.67%、46.67%、36.67%,恶性肿瘤组阳性表达率显著低于正常卵巢组、卵巢良性肿瘤组(χ~2值分别为4.267、5.406,均P<0.05)。正常卵巢组织、良性肿瘤组织、交界性肿瘤组三组两两比较均无统计学意义(χ~2值分别为0.073、1.684、2.443,均P>0.05)。结论DLL4、Slit2有可能通过生长因子相互制约,为上皮性卵巢癌发病机制提供新思路,同时为其分子靶向治疗开辟新道路。

APAAP和SP法测定TL-亚群的观察分析

目的:为了提高T淋巴细胞的检测,评价测定TL-亚群的两种方法——APAAP和SP法。方法:以APAAP和SP法分别对本院30例病人做了TL-亚群的观察分析。将两法的测定结果进行了配对t检验,相关分析及显著性检验。结果:CD_3^+;t=5.8,P<0.01,CD_4^+;t=2.2,P<0.05,CD_8^+;t=0.2,P>0.05,相关分析显著性检验:三者P<0.01。结论:表明两种方法的测定结果具有一定程度的差别,但两法的测定结果密切相关。

改进的反向斑点杂交方法

目的改进反向斑点杂交的操作方法,探索更为简便快捷的实验流程。方法优化杂交液II的组分,使用HPV基因分型、β-地中海贫血基因突变和HBV基因分型三个试剂盒验证改进的实验方法。结果 HPV基因分型、β-地中海贫血基因突变和HBV基因分型试剂盒的实验结果证实,使用优化后的杂交液II,链霉亲和素过氧化物酶在杂交温度能够有效地与生物素结合,试剂盒的灵敏度不受影响且膜条的背景低。结论改进的反向斑点杂交方法不影响试剂盒的灵敏度,并且操作简便、实验时间短、实验结果背景低。

纳米金标记基因芯片技术的优化

为了建立稳定的纳米金标记基因芯片技术,对点样液,预杂交,纳米金浓度,银染时间等进行了优化,并研究了该芯片方法的灵敏度。结果表明,使用50%DMSO作为点样液效果最好,预杂交会导致杂交信号降低70%,银染时间控制在15 min时候显色清晰且背景较低。该检测方法的灵敏度可达到80 fmol/L,可望在芯片检测领域得到更多的应用。

丙型肝炎患者PBMC的mIL-2R表达及其临床意义

目的 探讨丙型肝炎患者 m IL - 2 R表达水平及其临床意义。方法 用生物素 -链酶亲和素法对 5 6例抗 - HCV阳性患者外周血单个核细胞 (PBMC)进行植物血凝素 (PHA )诱导前后 m IL - 2 R的的检测。结果 急、慢性丙型肝炎患者静息状态 m IL - 2 R表达水平 ,诱导状态 m IL - 2 R表达水平分别与正常对照相比 ,差异均有显著性。结论 丙型肝炎患者体内存在明显的细胞免疫功能紊乱 ,T细胞活化障碍 ,并与肝病的慢性化有关。

基于磁性纳米颗粒和金纳米粒子构建DNA电化学生物传感技术

本文构建了一种基于纳米粒子、茎环DNA和丝网印刷电极(SPCE)的电化学生物传感技术用于乳腺癌基因的快速、灵敏检测。该传感技术中,探针DNA的两端分别标记了巯基和生物素,巯基用于与金纳米粒子(AuNPs)作用,生物素用于与磁性纳米颗粒(MNPs)表面修饰的链酶亲和素作用以达到富集的目的,之后利用SPCE进行电化学检测。无目标DNA存在时,双标记DNA保持茎环结构,使得生物素分子很难和MNPs上的亲和素接触。一旦加入目标DNA,茎环结构打开,生物素得以与MNPs上的链霉亲和素发生特异性结合,形成的复合物(MNPs-DNA-AuNPs)通过磁性富集到SPCE表面,从而获得AuNPs的电化学信号。该DNA电化学生物传感对单碱基错配有良好的分辨能力,完全互补DNA的检出限为8.0×10-13 mol/L。

整合素αvβ3对大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖影响的实验研究

目的研究整合素αvβ3对大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖的影响,为以整合素αvβ3为靶点治疗脑胶质瘤提供实验依据。方法采用MTT比色法和SABC免疫组化检测法,观察不同浓度的整合素αvβ3抗体对体外培养的大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖的抑制作用和对增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。结果整合素αvβ3抗体对体外培养的大鼠C6脑胶质瘤细胞的增殖和PCNA表达有明显的抑制作用,其作用表现出明显的量效关系(P<0.05)。结论整合素αvβ3对脑胶质瘤细胞的恶性增殖具有促进作用,而整合素αvβ3抗体对其有明显抑制作用,为抗整合素αvβ3治疗脑胶质瘤提供了实验依据和理论依据。

大鼠体内生物素示踪重组人胶原蛋白的方法研究

目的:建立一种在大鼠体内示踪外部重组人胶原蛋白的方法。方法:采用超级生物素标记重组人胶原蛋白,将标记后的重组人胶原蛋白植入大鼠体内,实验周期结束后取植入部位组织,制备石蜡切片,用辣根过氧化物酶标记链霉亲和素识别病理切片上生物素标记的蛋白,二氨基联苯胺法染色(DAB法染色),显微镜观察组织情况。结果:在病理切片中观察到生物素标记重组人胶原蛋白的棕褐色沉淀,实现了植入组织的重组人胶原蛋白的定位。结论:生物素标记重组人胶原蛋白的方法灵敏度高,操作简单,可快速实现对重组人胶原蛋白的追踪。本文通过设立生物素对照组,排除生物素本身体内代谢对实验结果的影响。