目的原核表达链亲和素-补体3d(SA-C3d)融合蛋白,体外探索蛋白活性。方法以C3 c DNA为模板扩增出C3d段DNA,使用一步克隆法将C3d段与酶切后的质粒p ET-24a-6His-SA-IL15相连,获得SA-C3d原核表达质粒。将测序正确的质粒转化入表达感受态大...目的原核表达链亲和素-补体3d(SA-C3d)融合蛋白,体外探索蛋白活性。方法以C3 c DNA为模板扩增出C3d段DNA,使用一步克隆法将C3d段与酶切后的质粒p ET-24a-6His-SA-IL15相连,获得SA-C3d原核表达质粒。将测序正确的质粒转化入表达感受态大肠杆菌Rosetta中,诱导蛋白表达。使用镍柱亲和层析及梯度逐级减低的变性剂脲素透析复性的方法获得目的蛋白。通过锚定生物素化的MB49细胞实验反映SA的功能,通过促进Raji细胞生长的实验检测C3d的功能。结果成功构建SA-C3d原核表达质粒,通过镍柱纯化与透析复性获得高纯度目的蛋白。该蛋白特异性的与生物素化的MB49细胞结合,促进Raji细胞增殖并呈现剂量依赖效应,体现蛋白SA-C3d具有双功能活性。结论成功制备的SA-C3d融合蛋白可在体外与生物素化的MB49细胞结合并促进Raji细胞增殖。展开更多
文摘目的原核表达链亲和素-补体3d(SA-C3d)融合蛋白,体外探索蛋白活性。方法以C3 c DNA为模板扩增出C3d段DNA,使用一步克隆法将C3d段与酶切后的质粒p ET-24a-6His-SA-IL15相连,获得SA-C3d原核表达质粒。将测序正确的质粒转化入表达感受态大肠杆菌Rosetta中,诱导蛋白表达。使用镍柱亲和层析及梯度逐级减低的变性剂脲素透析复性的方法获得目的蛋白。通过锚定生物素化的MB49细胞实验反映SA的功能,通过促进Raji细胞生长的实验检测C3d的功能。结果成功构建SA-C3d原核表达质粒,通过镍柱纯化与透析复性获得高纯度目的蛋白。该蛋白特异性的与生物素化的MB49细胞结合,促进Raji细胞增殖并呈现剂量依赖效应,体现蛋白SA-C3d具有双功能活性。结论成功制备的SA-C3d融合蛋白可在体外与生物素化的MB49细胞结合并促进Raji细胞增殖。
