基于链替代信号放大灵敏检测端粒酶活性的电化学方法

利用标记二茂铁基团的DNA(T-DNA)分子作为信号探针,基于端粒酶特异性延长其底物链(TS)所引发的链替代反应,建立了一种检测端粒酶活性的电化学信号放大法.将巯基化的发夹型DNA分子(H-DNA)通过金-硫键自组装于金电极表面,辅助DNA(A-DNA)与二茂铁修饰的T-DNA部分互补杂交形成双链AT-DNA;当端粒酶存在时,可在TS的3′末端合成TTAGGG的重复序列;A-DNA与TS延长链杂交置换出T-DNA;T-DNA与发夹H-DNA杂交使得二茂铁靠近电极表面;一条TS延长链可以释放出多条T-DNA,将二茂铁富集到金电极表面,从而实现信号放大检测端粒酶活性.HeLa细胞个数在5~100范围内与电流值成正比,最低可检测5个HeLa细胞中端粒酶的活性.因此,本文建立了一种简单灵敏检测端粒酶活性的电化学方法.