响应面法研究链格孢菌Alternaria ochroleuca的产毒条件

比较了不同链格孢菌(Alternaria ochroleuca、Alternaria alternata和Alternaria tenuissima)的产毒能力,并通过单因素实验和响应面试验考察了不同的培养温度、培养时间和培养基初始pH对A.ochroleuca产主要链格孢霉毒素链格孢酚(AOH)、链格孢甲基醚(AME)和细交链格孢菌酮酸(TeA)3种毒素的影响。结果表明:3种毒素的产量均随培养温度、培养时间和培养基初始pH的增加呈先增加后逐渐减少的趋势,培养温度26.8℃、培养时间11.4 d、培养基初始pH 4.7是TeA的最佳产生条件,最大产量为4841.3 mg∕kg;当培养温度为25.9℃、培养时间为7.8 d、培养基初始pH为6.4时,AOH和AME的产量最高,分别达2096.1 mg∕kg和152.8 mg∕kg。培养温度和培养基初始pH对TeA的产生具有显著的交互作用,而培养温度和培养时间对AOH和AME的产生具有显著的交互作用。本研究明确了链格孢菌A.ochroleuca产生链格孢霉毒素的主要影响因素,对控制链格孢霉毒素污染、保障食品安全具有重要意义。

链格孢(Alternaria alternata)在枣、梨和苹果果实上的致病性分化研究

链格孢(Alternaria alternata)可侵染多种果树引起产前及产后果实黑斑病,造成严重的经济损失。不同果树来源的链格孢是否能交互传染还不清楚。本文探讨了引起北方枣、梨和苹果果实黑斑病的链格孢在这3种果实上的致病性分化和交互致病性,明确其交互传染特性。从北方不同地区果园采集枣、梨和苹果的黑斑病病果样品,通过组织分离法进行病原菌的分离,然后进行纯化及鉴定。利用离体果实接种法对分离到的各个病菌分别在枣、梨、苹果的果实上进行致病性测定,分析了其致病性的差异。结果显示:从3种病果实上共分离出45株链格孢,其中对枣、梨和苹果表现出强致病性的分别为5、11、7株,表现为弱致病的分别为17、8、20株;对3种果实的致病性均在次强等级以上的有6株,致病性均为弱等级的有3株,而在3种果实上致病性等级表现为次强等级以上的菌株有30株,占到总菌株的66.6%。总之,枣、梨和苹果病果上的链格孢存在致病性分化现象,并在这3种果实上是可以交叉侵染致病,互为侵染源。因此,在病害防治方面,临近的不同果园对黑斑病需联防联治。

链格孢霉所致肺部感染1例报道

肺部真菌感染发病率逐年增高,其中,链格孢属感染临床少见。报道该病例对于加强对链格孢霉所致肺部感染的认识,有助于指导临床实践中的诊断和治疗。本文回顾性分析1例临床诊断链格孢属所致肺部感染患者资料。该患者经积极抗真菌治疗,症状改善。肺部真菌感染发病率逐年增高,临床医师需提高警惕,对于不明原因反复咯血、咳血痰、肺部阴影患者,通过支气管镜活检、灌洗液等的检查具有重要临床意义。分子诊断方法可有效提高病原菌检出率。

继代培养对链格孢菌生长及产毒的影响

目的探究连续继代培养对链格孢菌(Alternaria alternata)菌株的生长以及产毒的影响。方法将10株链格孢菌在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(potato dextrose agar,PDA)上连续继代培养,分析菌株的生长、产孢情况;利用超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)检测并分析主要链格孢霉毒素[包括交链孢酚(alternariol,AOH)、交链孢酚单甲醚(alternariol monomethyl ether,AME)、交链孢烯(altenuene,ALT)、细交链格孢菌酮酸(tenuazonic acid,TeA)]的含量变化。结果在PDA培养基中,连续继代培养链格孢菌极易出现角变、菌丝变白、菌丝生长速率加快等菌株退化现象。随着继代培养次数的增加,菌株生长速度加快,菌落直径变大,角变率增大;10株链格孢菌中有7株(MY-4、MY-12、MY-15、MY-73、MY-80、MY-103、MY-117)产孢量随着继代次数的增加先增加后降低,3株(MY-65、MY-67和MY-108)产孢量随着继代次数的增加显著降低;10株链格孢菌中有4株可以产生TeA毒素,且Te A毒素的含量随着继代次数的增加先上升后下降,第五代菌株(F5)产毒能力最强。继代培养对ALT毒素含量影响较大,除MY-103以外,随着继代次数的增加,ALT毒素的含量显著降低(达91.13%~99.85%)。AOH和AME毒素含量随着继代次数的增加呈下降或者呈先上升后下降的趋势。结论连续继代培养5代对链格孢菌的生长、产孢、产毒等均会产生较大影响。在菌株的实际应用过程中,应该避免菌株过多次的继代培养,尽量使用5代以内的链格孢菌。

基于非靶向代谢组学解析猬木霉挥发性物质对香梨采后链格孢的抑制作用

本研究探讨猬木霉M6-5挥发性物质对香梨采后黑斑病菌链格孢(Alternaria alternata)代谢物质、呼吸和能量代谢的影响。基于非靶向代谢组学技术通过液相色谱-质谱联用仪测定链格孢受M6-5挥发性物质处理后体内代谢物质的变化;测定M6-5挥发性物质熏蒸处理后0、3、5、7d的链格孢呼吸速率,计算呼吸抑制率;采用液相色谱仪测定不同培养时间处理组和对照组链格孢ATP、ADP、AMP和能荷的影响。结果表明:M6-5挥发性物质处理后链格孢菌丝体上调的差异代谢物有6-戊基-2H-吡喃-2-酮、4-乙基苯甲醛、3,4-二甲基苯甲酸、4-苯基丁酸、2-甲氧基间苯二酚等,下调的差异代谢物有6-氨基烟酰胺、11-酮基乙酰胆甾醇、3-羟基康力龙、茉莉酸、苯甲酰芽子碱等。利用京都基因与基因组百科全书通路分析发现差异显著的通路为次生代谢物的生物合成。在培养时间结束(7d)时,M6-5挥发性物质对链格孢的呼吸抑制率为(49.64±2.04)%;与对照组相比,M6-5挥发性物质处理显著降低了链格孢ATP、ADP、AMP的含量和能荷水平,说明M6-5挥发性物质处理使链格孢胞内维持在更低的能荷水平,能量代谢失衡,呼吸速率受抑制,进而影响了代谢物质的变化。

精氨酸对引起采后蓝莓腐烂的链格孢靶标菌的抑制效果研究

目的旨在筛选引起蓝莓采后腐烂的链格孢靶标菌株,并比较L-精氨酸和山梨酸钾对其抑制效果,为蓝莓采后链格孢腐烂病的防控提供前期基础。方法通过组织分离法结合单孢分离法进行致腐菌的分离,采用ITS序列分析进行属水平鉴定,采用ATP序列分析结合形态学观察进行种水平鉴定,采用平板抑菌法比较L-精氨酸和山梨酸钾的抑菌效果。结果本研究分离获得的链格孢菌均有致病性,分别属于3个不同种群,分别为细极链格孢(Alternaria tenuissima)、互隔交链孢(A.alternata)和云南铁杉链格孢(A.dumosa)。以菌株B20190623E3(A.tenuissima代表菌株)、菌株B20190623B1(A.alternata代表菌株)、菌株B20190623C1(A.dumosa代表菌株)为靶标菌,发现L-精氨酸对供试3株靶标菌的EC50值均低于山梨酸钾。结论供试链格菌株均有致病性,其中引起蓝莓采后腐烂的优势链格孢种群为细极链格孢。云南铁杉链格孢为引起蓝莓果实腐烂的新纪录种。筛选获得了3株链格孢代表靶标菌。L-精氨酸对引起蓝莓采后腐烂的链格孢菌具有较好的抑制效果。

3种梨树链格孢病菌的鉴定、遗传多样性及其对杀菌剂的敏感性

梨黑斑病是梨树的主要真菌病害之一,可引起叶片早落,降低梨果产量及品质,造成巨大经济损失。本研究从各地区梨园采集病叶病果后进行病原菌分离,基于形态学观察和多基因串联进化树构建对分离的病原菌进行鉴定,并进行室内药剂敏感性试验。结果表明,从昆明、砀山、成都、贵阳等地采集的样品中分离鉴定到梨黑斑病菌41株,将其分为4个种,分别为乔木链格孢(Alternaria arborescens,3株)、梨黑斑链格孢(A.gaisen,1株)、棉链格孢(A.gossypina,1株)、链格孢(A.alternata,36株)。选取3种链格孢进行致病力分析,在翠玉梨叶片、库尔勒香梨果实上均表现致病性,但致病力存在差异。4种杀菌剂室内药剂敏感性测定结果表明,3种梨黑斑病菌对咪鲜胺、苯醚甲环唑、吡唑醚菌酯均有较好的敏感性,抑制中浓度(EC50值)为0.051 8~10.114 7 mg/L;乔木链格孢9-15菌株对嘧菌酯敏感性较好,EC50值为1.533 0 mg/L;乔木链格孢8-34、9-53,黑斑链格孢9-1,棉链格孢8-46对嘧菌酯敏感性较差。明确了3种可引起梨黑斑病的链格孢属真菌特性及其对不同药剂的敏感性,为后续药剂防治提供技术支撑。

新疆枣上链格孢菌(Alternaria alternata)对戊唑醇、异菌脲和咪鲜胺的敏感性

链格孢引起的黑斑病是新疆枣上危害严重的病害。采用菌丝生长速率法测定了47株互隔链格孢(Alternaria alternata)对戊唑醇、异菌脲和咪鲜胺的敏感性。结果表明,3种杀菌剂均可抑制链格孢菌的菌丝生长,EC_(50)平均值分别为(1.010±0.691)、(0.764±0.178)、(0.776±0.421)μg/mL。戊唑醇、异菌脲和咪鲜胺的EC_(50)频数分布均呈单峰曲线,其平均EC_(50)值可以作为敏感基线。皮尔森相关性分析显示,戊唑醇与异菌脲、咪鲜胺及咪鲜胺与异菌脲对链格孢菌株的抑制效果之间的相关系数分别为0.327、0.084、0.161。综上所述,3种杀菌剂之间不存在交互抗药性,因此,生产中可以将3种杀菌剂交替使用。

食品中链格孢霉毒素残留分析的样品前处理技术研究进展

受链格孢霉菌(Alternaria)侵染的食品中会产生具有遗传毒性、细胞毒性、生殖和发育毒性的链格孢霉毒素。食品中链格孢霉毒素的结构和性质差异大、含量较低,其分析检测需要高效的样品前处理技术和准确的分析检测方法。样品前处理在分析检测过程中是非常重要的步骤,但目前是瓶颈环节。本文对含有链格孢霉毒素的食品样品前处理技术进行综述,分别阐述了QuEChERs(Quick,Easy,Cheap,Effective,Rugged,Safe)、分散液液微萃取、分子印迹固相萃取、直接稀释法在食品基质中链格孢霉毒素的提取过程的应用,以及固相萃取、分散固相萃取、低温冷冻、液液分配在食品中链格孢霉毒素的净化过程的应用。同时,总结了不同提取和净化技术的优缺点,分析了现有前处理技术的优势和局限性,展望了具有发展前景的前处理技术,如制备新型分子印迹固相萃取材料和性能较好的净化材料、建立促使食品中链格孢霉毒素的提取-分析一体化检测体系。

全自动QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定花类代用茶中链格孢霉毒素

本文建立了全自动Qu ECh ERS-超高效液相色谱-串联质谱法快速测定花类代用茶中5种链格孢霉毒素的分析方法。样品经全自动Qu ECh ERS前处理,以ACQUITY UPLCHSST3色谱柱分离,在电喷雾离子源负源模式下,进行多反应监测分析。在优化后的条件下,5种链格孢霉毒素在各自的线性响应范围内线性关系良好,相关系数(r)均大于0.999,在6种花类代用茶基质的3个不同加标水平下平均回收率为82.3%~105.7%,相对标准偏差(RSD)小于10%,方法检出限为0.5~1.5μg/kg。方法具有分析速度快、稳定性好、灵敏度高的特点,能够满足花类代用茶中链格孢霉毒素的快速检测需求。

分散固相萃取净化-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定水果中7种链格孢霉毒素的含量

目的建立分散固相萃取净化-超高效液相色谱-串联质谱法快速、准确地同时检测水果中7种链格孢霉毒素的方法。方法试样用酸化乙腈提取,无水硫酸镁除水,氯化钠盐析,上层清液经C_(18)与石墨化碳黑分散固相萃取净化后,采用超高效液相色谱-串联质谱法测定,基质匹配标准溶液外标法定量。结果7种链格孢霉毒素在0.005~0.500mg/L范围内线性关系好(r^(2)>0.99),检出限为0.005mg/kg,定量限为0.01mg/kg,回收率在77.30%~114.34%之间,批内相对标准偏差为0.65%~14.81%,批间相对标准偏差为0.03%~18.59%。结论该方法简单、高效,精密度及准确度高,适用于水果中7种链格孢霉毒素的测定。

补骨脂种子提取物对链格孢菌生长及其侵染烟草的影响

为探究补骨脂种子提取物对烟草赤星病菌的作用效果及其对烟草抗氧化酶活性的影响,以烟草赤星病病原菌链格孢菌和云烟87为试验材料,研究了不同浓度补骨脂种子提取物处理下链格孢菌菌丝生长情况以及补骨脂种子提取物处理后接种链格孢菌的成熟烟叶中防御酶活性变化。结果表明,0.2%补骨脂种子提取物12.5 g/L对链格孢菌菌丝生长的抑制效果最好,处理3 d后抑制率达到74%以上,且具有浓度效应和时效性。0.2%补骨脂种子提取物2.5 g/L能提高烟草抗氧化酶活性,0.2%补骨脂种子提取物2.5 g/L处理24 h后接种链格孢菌,烟叶超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)活性均较喷施蒸馏水对照显著提高。补骨脂种子提取物既可抑制链格孢菌菌丝生长,又能提高烟株抗氧化能力和抗病性,有助于抵御病原物入侵。本研究可为进一步研究补骨脂种子提取物提高植物抗病性的作用及其在防治烟草赤星病方面的应用提供参考。

茄链格孢Alternaria solani DT-15除草活性及生物学特性初步研究

为了筛选获得高效除草生防菌株,本研究以青海省大通县野薄荷病样中分离到的DT-15菌株作为研究对象,对其进行离体致病性测定、活体除草效果评价、安全性评价、菌株分类鉴定及菌株最适碳氮源筛选研究。离体条件下DT-15菌株对3种杂草的致病性由强到弱依次为密花香薷>冬葵>藜。盆栽条件下藜、冬葵发病率高达91%以上,鲜重防效达94%以上,且对主栽作物蚕豆、小麦、豌豆、油菜表现为相对安全。菌株DT-15鉴定为茄链格孢Alternaria solani。对菌落直径、孢子悬浮液的OD值进行了测定,结果表明:小麦麸皮是最适的碳源,硝酸钠是最适的氮源。DT-15菌株具有蚕豆、小麦、豌豆、油菜田防除部分阔叶杂草的微生物除草剂开发潜力。

甘肃省药用植物上链格孢属(Alternaria)病原的种类及分布Ⅰ

2004年以来,在对药用植物病害进行调查时发现,链格孢属(Alternaria)是引起药用植物病害的重要病原之一。本文采用田间调查和室内鉴定相结合的方法对甘肃省药用植物上链格孢属的种类和危害情况进行了调查。调查结果表明,链格孢属可危害豆科、茄科、菊科等13科20种药用植物,发病轻重不一。已鉴定出病原菌12种,待定种(菌株)7个。本文结果为制定药用植物病害的防治措施奠定了基础。

UV-B辐射增强对链格孢菌(Alternaria alternata)生长、生理及致病力的影响

研究UV-B辐射增强对灯盏花(Erigeron breviscapus)叶斑病致病菌—链格孢菌(Alternaria alternata)的生长、生理及其致病力的影响,并探讨链格孢菌对UV-B辐射的响应机制。结果表明,UV-B辐射增强可延缓链格孢菌的生长,导致菌丝生长率、产孢量、纤维素酶活性及可溶性蛋白含量均显著降低(p<0.05),链格孢菌的致病力显著下降(p<0.05)。同一UV-B辐射强度下,20～60min的辐射处理对链格孢菌的生长、生理及致病力的影响没有显著性差异(p>0.05)。链格孢菌表现出形态学和生理生化方面的UV-B适应机制,来减轻UV-B辐射的损伤。经UV-B辐射处理后的病菌积累较多黑色素,菌落颜色加深,菌丝分布更加致密,菌丝干重显著增加(p<0.05);并且,链格孢菌的过氧化氢酶(CAT)活性显著升高(p<0.05)。

长柄链格孢(Alternaria longipes)和链格孢(A.alternata)的RAPD分析

对来自中国及亚、非、欧三大洲5个国家的10个烟草赤星病菌（Alternarialongies）及5个链格孢菌（A．alternata）标准菌株用6种随机引物（OPR01、OPR12、OPR13、OPR14、OPR15、OPK19）进行了基因组DNA随机扩增多态性分析，对RAPD带型所进行的聚类分析结果表明，所有参试菌株之间相似性很高（90．3％～94．7％），其系统聚类关系与寄主和地理来源没有相关性，证明A．longipes与A．alternata亲缘关系很近，建议将A．alternata确定为烟草赤星病菌的学名。

链格孢属(Alternaria)真菌病害的生物防治研究进展

综述了近年来国内外利用微生物制剂、植物源制剂及诱抗剂等对链格孢属真菌引起的植物病害进行生物防治的研究进展,并对目前生物防治中存在的问题和应用前景作了评述。

甘肃省药用植物上链格孢属(Alternaria)的种类及分布(Ⅱ)

对2004年以来甘肃省百合科、苋科、木犀科、大戟科、桔梗科药用植物链格孢属引起的病害进行了鉴定,结果如下:芍药叶斑病病原为细链格孢[Alternaria alternata(Fr.:Fr.)Keissler],青葙叶斑病病原为青葙链格孢[A.ce-losiae(Tassi)O.Sǎvul],连翘灰斑病病原为A.forsythiae Harter,引起连翘灰斑病、甘遂褐斑病病原为甘遂链格孢(A.kansuiae T.Y.Zhang&J.Z.Zhang),沙参黑斑病的病原为茄链格孢[A.solani(Ellis et Martin)Sorauer]。

一种快速、特异性检测小麦中链格孢菌(Alternaria alternata)的巢式PCR方法

为建立检测小麦中链格孢菌（Alternaria alternata ）的方法，从河南省小麦黑胚籽粒上分离得到7个优势 A．alternata 病原菌株，对其 rDNA 的内部转录间隔区序列（ITS）进行测序，序列比较表明，分离到的病原菌株与 GenBank 公布的 A．alternata 的 ITS 区序列一致性达到99％～100％。根据 Alternaria 属菌株（A．alternata、A．tenuis、A．tenuissima）和麦类根腐离蠕孢菌（Bipolaris sorokiniana ）的 ITS 序列比对结果，设计出1对 A．alternata 特异性引物 Aa1F/Aa1R。利用多种河南省小麦的主要病原真菌对该引物的特异性进行验证，只有在 A．alternata 中能特异性地扩增出1条443 bp 的 DNA 片段。以真菌通用引物 ITS1/ITS4为外侧引物、特异性引物Aa1F/Aa1R 为内侧引物进行巢式 PCR 扩增，能检测到 A．alternata DNA 的最低质量浓度为50 pg/μL。因此，建立的巢式 PCR 方法能够快速、特异地检测小麦中的 A．alternata。

一株拮抗链格孢(Alternaria spp.)抗生素产生菌研究

从冷冻菌种甘油管中分离到一株生长力极强的污染细菌,该细菌能产生抑制链格孢真菌的活性物质,在研究抑菌活性物质的过程中,对这株细菌进行分类鉴定.通过传统的表型及生理生化方法,将该菌定位到芽孢杆菌属(Bacillus),与枯草芽孢杆菌(B.subtilis)的相似性最大,最终确定这株菌为B.subtilis中的一个株型,即Bacillus subtilis subsp.subtilis str.168.以链格孢属真菌(包括原有的和从空气、小麦病斑分离的)为受试菌,对此株细菌产生抑菌物质的时间进行跟踪,当该菌进入稳定生长期后开始产生抑菌物质,72 h时积累达到最大值.对抑菌物质进行过滤、加热、调节pH值等多种处理,初步确定抑菌物质的特性为外泌型、脂溶性,可透过孔径0.22μm的微孔滤膜,可耐受100℃5 m in,80℃10 m in的高温,微碱性条件不影响其生物活性.