食品中链格孢霉毒素残留分析的样品前处理技术研究进展

受链格孢霉菌(Alternaria)侵染的食品中会产生具有遗传毒性、细胞毒性、生殖和发育毒性的链格孢霉毒素。食品中链格孢霉毒素的结构和性质差异大、含量较低,其分析检测需要高效的样品前处理技术和准确的分析检测方法。样品前处理在分析检测过程中是非常重要的步骤,但目前是瓶颈环节。本文对含有链格孢霉毒素的食品样品前处理技术进行综述,分别阐述了QuEChERs(Quick,Easy,Cheap,Effective,Rugged,Safe)、分散液液微萃取、分子印迹固相萃取、直接稀释法在食品基质中链格孢霉毒素的提取过程的应用,以及固相萃取、分散固相萃取、低温冷冻、液液分配在食品中链格孢霉毒素的净化过程的应用。同时,总结了不同提取和净化技术的优缺点,分析了现有前处理技术的优势和局限性,展望了具有发展前景的前处理技术,如制备新型分子印迹固相萃取材料和性能较好的净化材料、建立促使食品中链格孢霉毒素的提取-分析一体化检测体系。

全自动QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定花类代用茶中链格孢霉毒素

本文建立了全自动Qu ECh ERS-超高效液相色谱-串联质谱法快速测定花类代用茶中5种链格孢霉毒素的分析方法。样品经全自动Qu ECh ERS前处理,以ACQUITY UPLCHSST3色谱柱分离,在电喷雾离子源负源模式下,进行多反应监测分析。在优化后的条件下,5种链格孢霉毒素在各自的线性响应范围内线性关系良好,相关系数(r)均大于0.999,在6种花类代用茶基质的3个不同加标水平下平均回收率为82.3%~105.7%,相对标准偏差(RSD)小于10%,方法检出限为0.5~1.5μg/kg。方法具有分析速度快、稳定性好、灵敏度高的特点,能够满足花类代用茶中链格孢霉毒素的快速检测需求。

典型链格孢霉毒素的污染现状与毒理学性质研究进展

链格孢霉毒素是链格孢霉菌产生的次级代谢产物,在谷物、果蔬、坚果、油料作物等农作物和农产品中污染广泛,对人和动物有不同程度的急性毒性、遗传毒性、生殖发育毒性等,然而,现有的污染水平、膳食暴露量及毒效应等资料有限且研究系统性不强,安全风险评估的理论支撑薄弱。基于此,本文系统梳理了典型链格孢霉毒素的污染现状及其毒理学性质,旨在为进一步评估其暴露水平,开展安全性评价,科学制定限量标准与法规提供较为全面、系统的理论依据。

QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法检测玉米中4种链格孢霉毒素

本研究旨在建立同时测定玉米中4种链格孢霉毒素——交链孢酚(AOH)、交链胞酚单甲醚(AME)、细交链孢菌酮酸(TeA)及腾毒素(TEN)的QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)法,并利用该方法检测山东省30份饲用玉米AOH、AME、TeA和TEN污染的背景值。将玉米样品加水溶解,用0.1%甲酸-乙腈溶液提取,氯化钠盐析,安捷伦EC-C18柱(100 mm×2.1 mm,2.7μm)为试验色谱柱,分别用乙腈(流动相A)和超纯水(流动相B)梯度洗脱,负离子电离模式(ESI-)作为电离条件,多反应离子监测模式(MRM)定量与定性分析,通过标准曲线、准确度和精密度试验评价建立的QuEChERS-UHPLC-MS/MS法。结果表明:4种链格孢霉毒素在1~100μg/L时线性关系良好;在5、10和50μg/kg 3种加标情况下,TeA、AOH、AME和TEN的加标回收率分别为74.70%~84.60%、 77.94%~103.84%、 72.61%~102.14%和71.16%~73.16%,相对标准偏差(RSD)分别为4.08%~8.36%、2.03%~4.07%、1.80%~4.61%和1.99%~2.40%。使用该方法检测的山东省30份饲用玉米中,TEN未检出,AOH、AME、TeA的检出率分别为96.67%、93.30%、40.00%。综上可知,本试验所建立的QuEChERS-UHPLC-MS/MS法,准确度、精密度高和稳定性好,可作为玉米中AOH、AME、TeA和TEN的检测方法;山东省饲用玉米样品中AOH、AME和TeA的检出率较高,应当引起重视。

超高效液相色谱-串联质谱法检测家禽配合饲料中4种链格孢霉毒素

试验旨在建立一种超高效液相色谱-串联质谱法(UHPLC-MS/MS)检测配合饲料中的交链孢酚(Alternariol,AOH)、交链孢酚单甲醚(Alternariol Monomethyl Ether,AME)、细交链孢菌酮酸(Tenuazonic Acid,TEA)及腾毒素(Tentoxin,TEN)4种链格孢霉毒素含量,并对配合饲料链格孢霉毒素进行污染调查。通过检出限(DL)和定量限(QL),准确度和精密度试验,评价该检测方法。结果表明:本试验方法的DL为0.02~0.15μg/L,QL为0.06~0.53μg/L;通过加标回收试验验证,在0.2~0.8 mg/kg的加标浓度下,4种毒素回收率为86.47%~112.86%,相对标准偏差≤9.74;肉鸡配合饲料中存在TEA、AOH和TEN毒素的污染,平均值分别为62.55、24.98μg/kg和29.92μg/kg,蛋鸡配合饲料中存在AOH和TEN毒素污染,平均值分别为51.71μg/kg和32.49μg/kg。由此可见,本研究建立了检测配合饲料中TEA、AME、AOH和TEN 4种毒素的UHPLC-MS/MS方法,准确度和精密度好,适合实际应用。

食品中链格孢霉毒素污染现状及检测技术研究进展

链格孢霉毒素是由链格孢霉属(Alternaria species)产生的次级代谢产物,具有致突变、致癌、致畸等多种毒性。文章概述了水果、蔬菜、谷物及其制品中链格孢霉毒素的污染现状,综述了链格孢霉毒素检测方法的研究现状,并展望了链格孢霉毒素检测技术今后的研究方向。

链格孢霉毒素细交链格孢菌酮酸的研究进展

链格孢霉(Alternara)是污染食品和饲料最普遍的真菌之一。细交链格孢菌酮酸(tenuazonic acid,TeA)是链格孢霉毒素中最为重要的一种,可广泛污染蔬菜、水果及谷物。本文综述TeA毒素的来源及污染情况、理化险质及其毒性、检测方法等,并就未来研究方向进行展望。

QuEChERS净化-超高效液相色谱-串联质谱法测定番茄中5种链格孢霉毒素的含量

取经粉碎匀浆的番茄样品(5.0g)于50mL聚丙烯离心管中,加入酸化乙腈(每升中加入甲酸4.0mL)10mL,超声提取30min,使得测定的5种链格孢霉毒素[链格孢酚(AOH)、交链格孢酚单甲醚(AME)、交链孢烯(ALT)、腾毒素(TEN)及细交链格孢菌酮酸(TeA)]溶入乙腈中,加入氯化钠0.5g,无水硫酸镁5g脱水后高速离心5min,取提取液1.5mL,加入C1825mg作为净化剂,涡旋1min除去其中色素等共提取物,取经净化的提取液0.5 mL,置于离心管中,加入1mmol·L-1碳酸氢铵溶液0.5mL,再次高速离心5min,取上清液供超高效液相色谱-串联质谱分析。选择ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱作为固定相,以不同比例的1mmol·L-1碳酸氢铵溶液(A)和甲醇(B)的混合液作为流动相进行梯度洗脱。串联质谱测定中采用电喷雾离子源正负离子切换扫描和多反应监测模式。用基质匹配法绘制标准曲线,所测定的5种链格孢霉毒素的线性范围均为0.5~100μg·L-1,其检出限(3S/N)在0.6~3.0μg·kg-1之间。以空白样品为基体,加入5种链格孢霉毒素的标准溶液按所述方法测定后计算其回收率,所得结果在81.6%~115%之间,测定值的相对标准偏差(n=6)在2.1%~11%之间。

SPE和QuEChERS净化测定番茄中链格孢霉毒素方法比较

通过加标样品的回收率对固相萃取和QuEChERS测定番茄中链格孢霉毒素净化效果进行比较,结果表明,固相萃取净化法的回收率在21%~69%,远低于QuEChERS方法的平均回收率81%~115%,且QuEChERS方法较固相萃取净化法操作简便快速,更适用于番茄中链格孢霉毒素含量的测定。

QuEChERS-高效液相色谱-串联质谱法测定水果中5种链格孢霉毒素

匀浆后的水果样品用1%甲酸乙腈溶液超声提取30min,离心后,取上清液加入N-丙基乙二胺和C18净化,离心后过0.22μm滤膜,采用高效液相色谱-串联质谱法测定滤液中5种链格孢霉毒素的含量。以Hypersil GOLD色谱柱为固定相,以不同体积比的乙腈和0.1%(体积分数,下同)甲酸溶液的混合液为流动相进行梯度洗脱,串联质谱分析中采用电喷雾离子源和多反应监测模式。5种链格孢霉毒素的质量浓度在一定范围内与其对应的峰面积呈线性关系,方法的测定下限(10S/N)为0.02~1.0μg·kg^-1。以空白样品为基体进行加标回收试验,所得回收率为93.3%~111%,测定值的相对标准偏差(n=6)为3.0%~9.7%。

超高效液相色谱串联质谱法快速检测柑橘中的5种链格孢霉毒素

建立了超高效液相色谱-串联质谱法快速检测柑橘中腾毒素、链格孢酚、交链格孢酚单甲醚、交链孢烯和细交链格孢菌酮酸5种链格孢霉毒素的新方法。样品经改进的QuEChERS(快速、简单、廉价、高效、灵活和安全)方法一步完成萃取净化,采用乙腈-甲酸(1.5%)提取,无水MgSO_4和NaCl盐析,以ACQUITY UPLC BEH C_(18)柱为分离柱,用乙腈和0.1%甲酸溶液进行梯度洗脱,电喷雾正离子(ESI^+)多反应模式监测,超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)测定。在本方法条件下,5种链格孢霉毒素在2.0-100μg/L浓度范围内均呈现良好的线性关系(R^2>0.9922),检出限在0.11-0.91μg/kg之间。在5.20和100μg/kg加标水平下,5种毒素的回收率在71%-112%之间,相对标准偏差为1.1%-9.9%,能满足柑橘中链格孢霉毒素检测的要求。

人工接种温州蜜柑后链格孢霉毒素的产生及分布规律

采用超高效液相色谱-串联质谱法结合Qu ECh ERS(quick,easy,cheap,effective,rugged,safe)前处理方法,研究温州蜜柑人工接种链格孢菌(Alternaria alternate)后,病斑部位全果、非病斑部位果皮和果肉中腾毒素(tentoxin,Ten)、链格孢酚(alternariol,AOH)、交链格孢酚单甲醚(alternariol monomethyl ether,AME)、交链孢烯(altenuene,ALT)和细交链格孢菌酮酸(tenuazonic acid,Te A)5种链格孢霉毒素的产生和分布规律。结果表明,病斑部位全果、非病斑部位果皮和果肉中的链格孢霉毒素含量随着病斑直径的扩大,不同链格孢霉毒素的变化趋势不同。Te A、Ten、AME和AOH在所有部位中均有检出,其中Te A检出含量最高,在病斑部位的含量范围为3.05×10~3~55.88×10~3μg/kg,在非病斑部位的含量范围为65.35~40.68×10~3μg/kg;Ten、AME和AOH在病斑部位的含量范围分别为69.16~373.94、22.63~1 395.82μg/kg和8.18~689.19μg/kg;非病斑部位的含量范围分别为0~67.56、0~195.96μg/kg和0~301.91μg/kg;ALT在非病斑部位果肉中未检出,但在非病斑部位的果皮和病斑部位的全果中均有检出,含量最高达16.61μg/kg。研究表明,由于柑橘感染链格孢菌后产生的毒素会从发病部位扩散到健康部位累积,因此,在鲜食加工和风险评估中应引起关注和重视。

果蔬制品中链格孢霉毒素检测与控制研究进展

链格孢霉属(Alternaria species)是链格孢霉毒素这种次级代谢产物的已知生产者。链格孢霉毒素具有明显的毒理学潜力,食用被其污染的果蔬和粮食产品会对消费者的健康造成威胁。果蔬营养丰富、含水量高,更易于被链格孢霉毒素感染,因此建立高效、简单、快速的检测技术和实现该毒素的高效控制一直是当今果蔬领域研究的热点。本文总结和分析了链格孢霉毒素常见的检测技术和控制方法,以期为链格孢霉毒素的快速检测和果蔬类食品安全控制与风险评估等提供参考。

失活乳酸菌去除柑橘汁中链格孢霉毒素TeA工艺优化

柑橘果实易受链格孢霉菌等病原微生物的污染产生并积累链格孢霉毒素,其中细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid,TeA)是毒性最强的一种链格孢霉毒素,具有潜在的致癌性和细胞毒性,对消费者的健康和安全构成严重威胁。为降低柑橘汁中TeA含量,本研究利用灭活乳酸菌菌体细胞作为吸附剂,主要研究其吸附去除柑橘汁中TeA的工艺条件。首先通过单因素试验分析灭活乳酸菌菌粉添加量、吸附时间、TeA初始质量浓度和pH值对TeA去除率的影响,然后采用响应面法Box-Behnken设计对吸附去除橙汁中TeA工艺条件进行了优化,得到最佳工艺参数为灭活乳酸菌菌粉添加量1.20g/20mL、吸附时间11.43h、TeA初始质量浓度250μg/L、橙汁pH3.15,在此条件下,TeA去除率为86.98%。同时建立了TeA去除率与各影响因素间的二次多项式回归模型,并对该模型进行了验证,结果表明模型拟合程度高,预测效果好。

加压毛细管电色谱-固相萃取测定链格孢霉毒素

以霉变柑橘为材料,建立同时检测链格孢酚甲基乙醚(AME)、链格孢酚(AOH)和链格孢毒素(ALT)3种链格孢霉菌毒素的固相萃取-加压毛细管电色谱(SPE-p CEC)快速检测、通过乙腈提取,无水Mg SO4和Na Cl脱水盐析,C_(18)SPE萃取净化,以C_(18)毛细管色谱柱为分离柱,以含0.1%甲酸的乙腈为流动相进行梯度洗脱,利用荧光检测器进行检测。该方法在2μg/L^200μg/L范围内线性关系良好,相关系数r2≥0.991 5,检出限为0.1μg/kg^0.9μg/kg。结果表明,该方法快速、准确、灵敏,适用于食品、水果中常见的3中链格孢霉毒素的快速分析及检测。

一种用于农产品检测的快速样品前处理技术超高效液相色谱-串联质谱法检测红枣中4种链格孢霉毒素

建立了一种用于农产品检测的快速样品前处理技术(QuEChERS)方法检测红枣中腾毒素(Ten)、链格孢霉素(ALT)、链格孢酚甲基乙醚(AME)和链格孢酚(AOH)4种链格孢霉毒素(ATs)的超高效液相色谱-串联质谱方法。红枣样品经(体积分数为1.5%)甲酸乙腈溶液提取,QuEChERS方法净化;4种ATs经十八烷基三氯硅烷(C18)分析色谱柱分离,以(体积分数为0.1%)甲酸水溶液和乙腈作为流动相进行梯度洗脱;以电喷雾离子源、正离子、多反应监测(MRM)模式检测,空白基质标准工作曲线进行定量。在优化的实验条件下,4种ATs在0.2~200μg/L质量浓度范围内呈现良好的线性关系(R^2>0.999),方法检出限和定量限分别为1和2μg/kg。在4种ATs的质量浓度为5,10,15μg/kg,n=6的条件下,平均回收率均为78.9%~112%,相对标准偏差(RSD)为1.1%~7.0%。

荧光光谱法研究链格孢霉毒素TeA与血清白蛋白的互作机理

链格孢霉毒素是由链格孢霉菌属(Alternaria species)产生的次级代谢产物,在水果、蔬菜以及粮食作物中污染率极高,可通过多种途径进入人类食物链,引发食品安全问题。为研究链格孢霉毒素细交链格孢菌酮酸(Tenuazonic Acid,TeA)在动物体内的吸收、分布、转运及代谢,本文采用稳态荧光光谱、同步荧光光谱、3D荧光光谱和圆二色光谱法等方法对TeA与人血清白蛋白(Human serum albumin,HSA)和牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)之间的分子相互作用及机理进行探究。结果表明,在模拟血液生理pH条件下(pH7.40)TeA对两种模式血清白蛋白均产生了静态猝灭作用,形成了稳定的非荧光复合物;结合位点数表明TeA和血清白蛋白以1:1比例结合;热力学分析表明TeA和两种血清白蛋白之间相互作用涉及的作用力主要为疏水作用力(ΔH>0,ΔS>格孢霉毒素0);3D荧光、同步荧光结果表明TeA的结合使两种血清白蛋白的氨基酸残基微环境极性改变;圆二色谱表明TeA与血清白蛋白结合使HAS与BSA中的α-螺旋结构含量增加。TeA与HAS和BSA的结合可自发进行,且有较强的结合能力,结合后两种血清白蛋白的构象均发生变化。该结果为链格孢毒素在动物体内暴露和代谢动力学研究等进一步研究打下坚实基础。

不同添加剂和发酵天数对残次枣营养成分及链格孢霉毒素含量的影响

本试验旨在研究植物乳杆菌、鼠李糖脂及丁酸钠3种添加剂对不同发酵时间残次枣营养成分及链格孢霉毒素含量的影响。以残次骏枣为材料,分别添加3种不同浓度的添加剂发酵:1)植物乳杆菌:105、 106、 107CFU/g;2)鼠李糖脂:20、 40、 60 g/kg;3)丁酸钠:40、 80、120 g/kg。对照组不添加任何添加剂,每组12个重复。在发酵0、15、45和60 d取样测定营养成分,并在发酵60 d时检测链格孢霉毒素含量。结果表明:1)与对照组相比,添加3种浓度的植物乳杆菌均可显著提高粗蛋白质(CP)含量(P<0.05),显著降低水分、粗脂肪(EE)含量和pH(P<0.05)。与发酵0 d相比,发酵45、60 d时,水分含量分别增加9.27%、10.24%(P<0.05),发酵15、45、60 d时,CP含量分别增加14.35%、22.49%、23.44%(P <0.05),pH显著下降(P <0.05)。与对照组相比,添加3种浓度的鼠李糖脂可显著提高CP含量(P<0.05),显著降低水分含量、pH(P<0.05)。但在发酵60 d时,添加鼠李糖脂的CP、EE、酸性洗涤纤维(ADF)含量分别下降2.21%(P<0.05)、19.89%(P>0.05)、2.87%(P>0.05)。与对照组相比,添加不同浓度的丁酸钠后,EE含量显著下降(P<0.05),对CP、ADF含量没有显著影响(P>0.05)。但添加丁酸钠发酵60 d后,CP含量升高10.96%(P>0.05),水分、EE含量分别下降27.21%、31.95%(P<0.05),pH显著下降(P<0.05)。2)残次枣中主要含细交链格孢菌酮酸(TeA)及少量链格孢酚(AOH)、链格孢酚甲基乙醚(AME)、腾毒素(TEN)和AAL毒素TA1(ATT-1)。在发酵60 d时,与对照组相比,添加105CFU/g植物乳杆菌使TeA含量降低了81.29%(P <0.05),添加60 g/kg鼠李糖脂使TeA含量降低了85.88%(P<0.05),添加40 g/kg丁酸钠使TeA含量降低了81.60%(P<0.05)。综上所述,添加植物乳杆菌能够提升残次枣的品质(CP含量上升,ADF含量下降);添加鼠李糖脂、丁酸钠对残次枣营养成分影响较小。3种添加剂都能降低TeA含量,鼠李糖脂降低TeA含量效果最好。

链格孢霉毒素的分析方法及其毒理机制研究进展

链格孢霉毒素是由链格孢霉属(Alternaria species)产生的次级代谢产物,因其大都具有细胞毒性、基因毒性、诱变性、致畸致癌性等毒性,食用被其污染的食物后会对人体健康造成严重危害。因此,筛选快速、简便的分析方法和研究其毒性作用机制都是当今的热点。本文主要概述了链格孢霉毒素的分类及理化性质,常见的分析方法及其毒理机制,旨在为链格孢霉毒素的风险评估和中毒防治等研究提供参考,同时对于人和动物的健康安全也具有重要意义。

QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定婴幼儿辅食果泥中5种链格孢霉毒素

建立婴幼儿辅食果泥中细交链孢菌酮酸、腾毒素、交链孢酚单甲醚、交链孢酚和交链孢烯5种链格孢霉毒素的QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱分析方法。待测样品经乙腈-水-甲酸混合液(79∶20∶1,V/V/V)提取,4 g无水硫酸镁、0.5 g无水乙酸钠和0.5 g氯化钠脱水盐析,100 mg C18净化,经Waters ACQUITY UPLC HSS T3(2.1 mm×100 mm,1.8μm)液相色谱柱分离,以5 mmol·L^(-1)的乙酸铵水溶液和甲醇作为流动相梯度洗脱,在电喷雾离子源电离,多反应监测模式条件下进行测定,基质外标法定量。该方法在0.1~200μg·L^(-1)范围内线性关系良好,决定系数(R^(2))均大于0.998,检测限和定量限分别为0.1μg·kg^(-1)和0.3μg·kg^(-1)。不同加标水平的平均回收率为73.8%~118.0%,相对标准偏差为2.3%~8.5%。结果表明,该方法高效、准确、灵敏,适用于婴幼儿辅食果泥中5种链格孢霉毒素确证检测。