链球菌抗原性和宿主遗传易感性在风湿热发病中的作用及临床意义

风湿热(RF)至今仍是严重危害我国青少年身心健康的常见病之一,链球菌(外因)和宿主遗传易感性(内因)的综合作用才能导致RF的发生。深入研究它们之间的关系,对于RF本质的认识及早期诊断和防治均具有重要意义。为此,本项目对链球菌膜和壁的抗原性及其在RF发病中的作用以及人类白细胞抗原(HLA)与RF的相关性进行研究,以期进一步探讨RF发病机制,并籍此寻找出早期特异性诊断方法和有效的防治手段。

链球菌溶血素O的表达、纯化及生物活性鉴定

目的重组表达链球菌溶血素O(SLO),纯化后验证其生物学活性。方法合成目的基因,采用聚合酶链反应扩增、酶切连接的方式构建SLO-pET28a载体,经酶切和测序验证后,转化大肠杆菌BL21(DE3)中,经诱导表达条件优化,采用镍亲和柱和分子筛纯化SLO。分别检测重组SLO和天然SLO对试剂盒校准品的响应情况和与临床样本匹配程度。结果成功构建了SLO-pET28a-BL21(DE3)菌株,在OD600=0.8时,25℃,0.4mmol IPTG诱导,大于90%目的蛋白会可溶性表达。纯化后SLO纯度大于95%。重组的SLO与提取的SLO对试剂盒校准品的响应相当,与临床样本的匹配程度一致。结论重组SLO的生物学活性与提取相当,为检测血清中的抗链球菌溶血素O奠定了基础。