链球菌蛋白G的结构域重构、表达及鉴定

链球菌蛋白G(streptococcal protein G,SPG)具有与多种动物IgG结合的特性。本研究对链球菌蛋白G进行生物学分析,设计重组蛋白G的基因序列,构建重组蛋白G的原核表达质粒,并在大肠杆菌中进行表达,得到带有GST标签的融合蛋白,通过GST亲和层析纯化蛋白。Western blot结果显示,重组蛋白具备与IgG结合的能力。ELISA测定重组蛋白与牛、山羊、兔、鼠4个物种IgG的亲和力,显示重组蛋白G的亲和力普遍高于商品化链球菌蛋白G。本研究成功重构并表达、纯化了链球菌重组蛋白G,得到其与4个物种抗体IgG的亲和力常数,有助于SPG在其他相关研究中的应用。

链球菌蛋白G——一种优于葡萄球菌蛋白A的IgG结合物

用蛋白酶消化链球菌C、G群菌株所得G蛋白,对人IgG的4种亚类以及兔、羊、牛多克隆IgG,大鼠和小鼠的单克隆IsG具独特的结合能力,亲和力均高于葡萄球菌蛋白A(SPA),已应用于免疫学与免疫化学试验。本文对G蛋白的有关特性与应用前景作了简要介绍。

链球菌蛋白G快速纯化人源生物工程抗体

目的 根据链球菌蛋白Ｇ与人抗体的Ｆａｂ片段有弱结合位点的行生，探索应用蛋白Ｇ亲合纯化原核表达的人源ｍＡｂ片段的可行性，为人源基因工程抗体的批量制备提供依据。方法 扩增抗ＨＢｓ＋菌株。经ＩＰＴＧ诱导表达后制备表达产物上清，上商品化链球菌蛋白Ｇ亲合胶（ＧａｍｍａＢｉｎｄ）反应。ＰＢＳ洗去非特异结合蛋白。梯６度酸洗脱结合ＵＶ检测观察解离效果。聚丙烯酰胺凝胶电脉（ＰＡＧＥ）检验纯化产物的纯度，Ｄｏｔｙ

链球菌蛋白G-ELISA用于华支睾吸虫病诊断的方法初探

目的评价链球菌蛋白G-ELISA法在华支睾吸虫病诊断上的价值。方法重组链球菌G蛋白用于快速酶联免疫吸附试验(ELISA)检测华支睾吸虫病患者、其他寄生虫感染者(日本血吸虫病、肺吸虫病、囊虫病)和健康人血清特异性IgG抗体。结果华支睾吸虫病患者血清特异性IgG的阳性检出率为94%(47/50),健康人血清的阴性率为100%(50/50)。检测日本血吸虫病血清、肺吸虫病血清及囊虫病血清,交叉反应率分别为5%(1/20)、0(0/20)、20%(2/10)。检测健康人及其他寄生虫感染者的总阴性率为97%(97/100)。结论链球菌蛋白G-ELISA用于华支睾吸虫病血清学诊断具有较高的敏感性及特异性。

链球菌G蛋白在检测实验动物特异性抗体中的应用

用卫生部武汉生物制品研究所研制的酶联链球菌Ｇ蛋白（ＨＲＰ－ＳＰＧ），配以自制的检测鼠肝炎病毒和仙台病毒抗体的试剂盒，测定小鼠、仓鼠、大鼠、豚鼠和沙鼠血清中的相应抗体，并与ＨＲＰ－ＳＰＡ对比。动物经病毒感染后，产生以ＩｇＧ为主的抗体。以ＨＲＰ－ＳＰＧ作为酶结合物，其结合谱比ＳＰＡ大。用于检测病毒特异抗体时，对大鼠和仓鼠的检出率，明显高于ＨＲＰ－ＳＰＡ，对小鼠和豚鼠则结果近似。用两种酶结合物均未查出沙鼠血清中的抗体。在ＥＬＩＳＡ中选用ＨＲＰ－ＳＰＧ以检测病毒抗体，特异性强，敏感性高，用量少，有实用潜能。

链球菌Fc结合蛋白G基因的克隆与原核表达

为研制SPG相关免疫试剂盒,设计了1对引物,从C群链球菌C40株基因组中扩增出了387 bp的细胞壁结合蛋白G(streptococcal protein G,SPG)基因,该基因编码125个氨基酸,包含了C1和C2两个Ig G结合结构域.构建了原核表达载体p ET28a(+)-SPG,IPTG诱导表达出分子质量约15.0 ku的SPG蛋白,并应用亲和层析柱纯化了SPG蛋白,Western blot分析表明纯化SPG蛋白具有生物学活性.

链球菌G蛋白提取方法的建立

本文建立了一种新型免疫试剂SPG的制备方法 ,该方法是从链球菌G148菌株的细胞壁中提取SPG ,用木瓜蛋白酶消化 ,再经离子交换层析、亲和层析法提纯精制。用ELISA法检测活性 ,用SDS

一种新的IgG结合物——链球菌蛋白G

链球菌蛋白G是A、C、G群链球菌的细胞壁内存在的一种表面蛋白。它具有与哺乳动物IgG结合的能力,由于G群链球菌的这种蛋白与IgG的结合能力最强,因此得名蛋白G。虽然早在1973年Kron-avall用致敏绵羊红细胞检测A、C、G群链球菌与γ球蛋白反应时就发现有26％的菌株能与γ球蛋白反应,但真正系统广泛地研究蛋白G的理化特性及实际应用,还是80年代的事情。现在已基本肯定蛋白G比葡萄球菌A蛋白(SPA)对IgG的结合更为优越,是一种新的更有效的IgG结合物,在免疫学研究方面将有可能取代SPA。

链球菌蛋白G免疫球蛋白结合域C3区串联体的表达、筛选与初步应用

筛选并制备高效结合抗体的重组蛋白G亲和层析介质。以链球菌蛋白G C3区为结构单元,拼接形成3、4、5、6个重复C3片段的串联体,分别克隆至PET21,并在E.coli BL21(DE3)中表达。经Ni^(2+)纯化的重组蛋白分别偶联至Purose 4 Fast Flow制备亲和层析介质,比较介质的吸附情况,发现重组四串体对h IgG的吸附量最高,其静态饱和吸附量为66.79 mg×mL^(-1),动态吸附载量为35 mg×mL^(-1)介质,优于同类型商品介质。利用该介质分离纯化小鼠腹水和人血清中的IgG,纯度在95%左右,回收率不低于80%。

重组链球菌蛋白G的SUMO融合表达策略和活性表征

目的:链球菌蛋白G(Streptococcus Protein G,SPG)是一种能够和多种哺乳动物的IgG相结合的蛋白质,广泛用于重组蛋白和抗体的纯化,目前市场产品主要为His-SPG,本研究拟采用类泛素蛋白修饰分子(Small Ubiquitin-Like Modifier,SUMO)融合表达SPG,以提高SPG产量,降低纯化柱料的生产成本。方法:将SPG基因分别连接至pET28a和pSmartⅠ质粒,经大肠杆菌重组表达两种蛋白,并比较产量、纯度和活性的差异。结果:His-SUMO-SPG产量为12.5 mg/L,较His-SPG(8.4 mg/L)提高约49%;包被两种SPG于96微孔板作为固定相,检测其捕获兔多抗和鼠单抗能力,His-SUMO-SPG的检测信号(OD_(450))较His-SPG更高,具有更高载量;生物素化His-SPG对小鼠的IgG1、IgG2a、Ig2b以及兔IgG最低检测浓度分别为0.703 pmol/L、0.098 pmol/L、0.524 pmol/L和0.927 pmol/L,生物素化His-SUMO-SPG最低检测浓度分别为0.887 pmol/L、0.084 pmol/L、0.667pmol/L和0.865 pmol/L,两种SPG最低检出限接近。结论:His-SUMO-SPG和His-SPG在检测性能方面比较接近,His-SUMO-SPG结合IgG载量略高于His-SPG,且His-SUMO-SPG产量更高,SUMO融合表达蛋白G方法为工业大规模生产提供了一种有效策略。

检测人血清中肺炎球菌10A型荚膜多糖IgG抗体的包被抗原适用性研究

目的 确定用于23价肺炎多糖疫苗免疫后临床血清样本检测的包被用10A型肺炎球菌荚膜多糖(Pn10A)。方法 根据WHO推荐的检测人血清中肺炎球菌荚膜多糖IgG抗体含量的ELISA(PnPSELISA),包被不同来源(ATCC、A公司、B公司、5个公司混合)的10A多糖[Pn10A(ATCC)、Pn10A(A)、Pn10A(B)、Pn10A(mix)],检测38份血清中Pn10AIgG抗体的几何平均浓度(GMC)和相同样本免疫前、后的阳转率(免疫后/免疫前≥2为阳转),确定用于临床血清检测的包被Pn10A。结果 用Pn10A(ATCC)、Pn10A(A)、Pn10A(B)包被检测38份相同样本免疫前、后血清中Pn10AIgG抗体的GMC和阳转率,Pn10A(A)与Pn10A(ATCC)包被的检测结果差异无统计学意义(P>0.05),数据一致性好(r>0.9);Pn10A(B)与Pn10A(ATCC)包被的检测结果差异有统计学意义(P<0.05),数据一致性差(r<0.8);再以Pn10A(A)、Pn10A(ATCC)、Pn10A(mix)包被检测另46份相同样本免疫前、后血清中Pn10AIgG抗体的GMC和阳转率,Pn10A(A)、Pn10A(mix)与Pn10A(ATCC)包被的检测结果差异无统计学意义(P>0.05),数据一致性好(r>0.9),免疫前、后GMC值相近,阳转率相近,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Pn10A(A)、Pn10A(mix)与Pn10A(ATCC)均可以作为包被多糖用于检测人血清中肺炎球菌Pn10AIgG抗体;但从长久使用相同抗原检测大批量临床样本的需求考虑,Pn10A(mix)更具有足量、经济的优势。

用于小鼠及兔源IgG的通用型二抗PA/G-HRP融合蛋白的真核表达及活性检测

目的制备可与小鼠及兔来源IgG结合的通用型二抗,并用于多种免疫检测实验。方法全基因合成金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)、链球菌蛋白G(SPG)与辣根过氧化物酶(HRP)融合基因片段,定向克隆至真核表达载体pcDNATM3.1骨架中,瞬时转染入人胚肾HEK293F细胞进行表达。通过SDS-PAGE、Western blot法鉴定融合蛋白表达情况,通过Western blot法、ELISA、免疫组织化学实验验证其应用。结果酶切鉴定和基因测序显示pPA-HRP、pPG-HRP和pPA/G-HRP表达质粒构建成功。考马斯亮蓝染色和Western blot法结果表明,融合蛋白PA-HRP、PG-HRP和PA/G-HRP在HEK293F细胞中成功表达。Western blot法、ELISA和免疫组织化学结果显示,三种融合蛋白均能识别结合小鼠及兔来源的IgG,其中PA/G-HRP表现出更为灵敏的结合活性。结论成功制备了具有高亲和力、通用型二抗功能的融合蛋白,PA/G-HRP能够替代传统抗小鼠IgG及抗兔IgG,可用于多种免疫检测实验。

链球菌蛋白G应用于ELISA的实验研究

对酶标记链球菌蛋白Ｇ（ＳＰＧ）在ＥＬＩＳＡ的应用条件进行了研究并与ＳＰＡ作了系统比较。ＳＰＧ与ＩｇＧ结合受温度影响，３７℃结合活性高于室温和４℃；反应时间定为２ｈ反应溶液ｐＨ值升高，ＳＰＧ的结合力亦增强。在同等条件下与酶标记ＳＰＡ进行比较，结果表明ＳＰＧ对小鼠单克隆抗体、羊抗人、兔抗ＩＦＮ－γ和驴抗兔Ｉｇｇ以及牛、大鼠和人ＩｇＧ的结合力均明显高于ＳＰＡ。ＳＰＧ用于大鼠血清抗ＩＦＮ－γ抗体的检测，其阳性率和抗体滴度均大大高于ＳＰＡ。因此，ＳＰＧ作为一种广谱的、高亲和力的ＩｇＧ结合物，是应用于ＥＬＩＳＡ的理想的替代二抗。

链球菌G蛋白IgG结合域(GBx)的融合表达及其IgG结合活性的比较分析

链球菌G蛋白的IgG结合域能够特异性地结合IgG的Fc区,是制备免疫微阵列的一种理想的IgG固定材料。克隆表达了具有IgG结合活性的3种IgG结合域的GST融合蛋白(GST-GBx),该3种蛋白分别含有1个、2个和3个IgG结合域。采用ELISA对三蛋白IgG结合能力进行了比较分析。结果表明在含B-Domain的量相同的情况下,GST-GB3蛋白固定IgG的量最多,其次为GST-GB2,GST-GB1最弱;对IgG的灵敏度也是GST-GB3最强,GST-GB1最弱,提示GST-GB3固定IgG的能力较其他两蛋白具有明显优势。

链球菌G蛋白——一种新型、广谱的免疫检测剂

某些链球菌菌株的细胞壁中含有一种能与免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)结合的蛋白质成分,称为IgGFc段受体或链球菌G蛋白(streptococcal protein G)。近年来此种蛋白质已被成功分离、纯化并应用于免疫学研究。与经典的葡萄球菌A蛋白(staphylococcal protein A,SPA)相比,链球菌G蛋自(以下简称SPG)更易与IgG发生反应,亲和力强,结合谱广。

链球菌G蛋白用于组织化学染色的实验研究

用理化方法制得链球菌G蛋白(SPG)-辣根过氧化物酶及SPG-胶体金探针,并将其用于常规病理组织切片、电镜包埋后、包埋前及冰冻超薄切片的抗原定位。组织化学染色显示,SPG定位准确、标记密度高,背景清晰,显著优于经典的葡萄球菌A蛋白(SPA)。研究结果表明,SPG的一个最重要的优点就是在免疫组化染色条件下仍有着比SPA更稳定、更可靠、更强的IgG亲合力,尤其适用于单克隆抗体,可获得更为理想的标记结果,因而是一种能用于多种不同条件组织化学染色的新型、高效免疫学检测剂。

链球菌G蛋白的特性及应用前景

链球菌G蛋白（Streptococcal Protein G,SPG）是一种能与抗体IgG的Fc片段结合的蛋白质。它可与人IgG4种亚类.以及许多哺乳动物的单克隆、多克隆IgG有较强的结合力,具有与SPA显著不同的特性和更强的IgG亲和力,更广的结合谱,在免疫学上具有广泛的应用价值。本文对SPG的特性及应用前景进行简述。

链球菌蛋白G分子生物学研究进展

C和G组链球菌细胞壁中含有一种能与免疫球蛋白结合的蛋白质成分称为链球菌蛋白G(SPG)。近年来此种蛋白已被成功分离、纯化,并应用于免疫学研究。与经典的葡萄球菌蛋白A相比,SPG更易与IgG发生反应,亲和力强,结合谱广,已受到密切关注。