DNA损伤激活的长链非编码RNA促进多发性骨髓瘤细胞增殖及耐药研究

目的:探讨DNA损伤激活的长链非编码RNA(NORAD)对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖及对硼替佐米(BTZ)化疗耐药性的影响。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测健康人和骨髓瘤患者、不同MM细胞系中NORAD表达差异,并分析其与MM患者生存率关系;运用慢病毒转染技术,干扰细胞系中NORAD的表达,检测其表达差异;定量PCR(qPCR)检测骨髓瘤细胞系中人类非编码RNA-144a-3p(hsa-miR-144a-3p)的表达;采用双荧光酶素报告验证NORAD和hsa-miR-144a-3p的结合;通过RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验进一步验证LncRNA和miRNA的结合;细胞计数试剂8(CCK8)法检测各细胞处理后细胞活性。细胞克隆试验检测细胞增殖能力。结果:MM患者细胞系中NORAD常高表达,提示预后差,生存期短;敲除NORAD基因后,MM耐药细胞系对BTZ药物敏感性增加。MM患者hsa-miR-144a-3p高表达,在骨髓瘤细胞系中加用miR-144a-3p类似物时细胞增殖能力下降;NORAD低表达可显著抑制细胞增殖,细胞对药物敏感性增强。细胞克隆形成实验也证实NORAD低表达可抑制癌细胞增殖。结论:NORAD高表达可增强MM对BTZ化疗耐药性,NORAD可直接与hsa-miR-144a-3p结合,上调其在MM细胞中的表达,进一步调控癌细胞增殖,同时调控患者对BTZ药物敏感性。

肝细胞癌上调的长链非编码RNA在肝癌中的表达及作用机制

长链非编码RNA(lncRNA)是一种多位于细胞核内、没有编码蛋白质能力的转录本,长度超过200 nt。lncRNA功能广泛,可参与基因表达、蛋白质翻译及稳定、细胞分化、器官形成过程,并可通过多种方式参与调控恶性肿瘤的发生发展过程。肝细胞癌上调的lncRNA(HULC)是人类肝癌组织中特异性过表达的lncRNA。近年来研究发现,HULC在肝癌的发生发展过程中可能扮演着重要角色。本文对HULC在肝癌中的表达及作用机制的研究进展进行综述。

新发展格局下提升我国汽车产业链供应链稳定性和竞争力研究

具有较强国际竞争力的汽车产业,是支撑高质量发展的重要基础。为了研究我国汽车产业链稳定性和竞争力问题,本研究通过对比中美德日四国智能电动汽车产业链现代化水平,总结出我国汽车产业链的长板和短板,并提出相关政策建议。

丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶激活的长链非编码RNA对甲状腺癌细胞凋亡和自噬行为的影响

目的:探讨丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(serine/threonine-protein kinase B-Raf,BRAF)激活的长链非编码RNA(BRAF-activated long-chain non-coding RNA,lnc RNA-BANCR)对甲状腺癌细胞凋亡和自噬行为的影响及其机制。方法:RT-PCR检测lnc RNA-BANCR在甲状腺癌组织和癌旁正常甲状腺组织中的表达情况;分析lnc RNA-BANCR和甲状腺癌患者的临床病理资料之间的关联;采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测lnc RNA-BANCR对甲状腺癌细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测lnc RNA-BANCR对甲状腺癌细胞凋亡行为的影响;Transwell侵袭实验检测lnc RNA-BANCR对甲状腺癌细胞侵袭能力的影响,Wsetern印迹检测抑制lnc RNA-BANCR的表达后自噬蛋白LC3-I和LC3-II表达的变化情况。结果:与正常甲状腺组织相比,甲状腺癌组织中lnc RNA-BANCR表达水平较高(P<0.05);lnc RNABANCR的表达与甲状腺癌的病理分期和淋巴结转移情况有关,分期越高,lnc RNA-BANCR在甲状腺癌组织中表达越高(P<0.05);抑制lnc RNA-BANCR的表达后,在一定程度上可抑制甲状腺癌细胞的增殖和侵袭能力(均P<0.05);同时可使甲状腺癌细胞的凋亡行为得到一定的促进(P<0.05);自噬蛋白LC3-I和LC3-II的表达水平相应增高(均P<0.05)。结论:lnc RNA-BANCR的表达通过影响甲状腺癌细胞的自噬行为而对其增殖、侵袭及凋亡行为产生影响。

长链非编码RNA BANCR与恶性肿瘤关系的研究进展

目前各种恶性肿瘤在我国的发病率逐年升高,肿瘤的防治已然成为现代医学研究的重点。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在肿瘤细胞的增殖、凋亡、分化及侵袭转移中发挥重要作用。BRAF激活的长链非编码RNA(BRAF-activated lncRNA,BANCR)是新近发现的lncRNA。BANCR在多种恶性肿瘤,如恶性黑色素瘤、直肠结肠癌、甲状腺乳头状癌、非小细胞肺癌、胃癌、眼癌及胆囊癌中呈现显著性差异表达,是多种癌症的独立预后因子,并对肿瘤的发生和发展起关键作用。本文结合最新的国内外报道,对BANCR与恶性肿瘤的研究进展做一综述,以期寻找有效的肿瘤诊断与预后标志物及治疗靶点。

宫颈癌DExH-box解旋酶9抑制转录本来源的长链非编码RNA在高糖诱导的心肌细胞氧化应激损伤过程中的作用及其机制

目的探讨宫颈癌DExH-box解旋酶9抑制转录本来源的长链非编码RNA(lnc-CCDST)对高糖诱导的新生小鼠心肌细胞(NMC)中活性氧(ROS)生成和细胞凋亡的影响,以及微RNA-339-5p(miR-339-5p)负向调节lnc-CCDST的机制。方法①构建小鼠1型糖尿病模型后,检测其心肌细胞lnc-CCDST表达,体外实验采用高浓度葡萄糖(35 mmol/L)培养基刺激NMC后测定细胞内lnc-CCDST表达;②小干扰RNA(siRNA)抑制NMC中lnc-CCDST表达再予高糖刺激24 h,测定细胞内ROS含量、胱天蛋白酶-3(caspase-3)活性,以及DNA片段(DNA fragmentation);③过表达和抑制miR-339-5p,验证其参与lnc-CCDST的调节;④过表达miR-339-5p后再予高糖刺激,检测细胞内ROS生成、caspase-3活性,以及DNA fragmentation;⑤过表达lnc-CCDST和(或)miR-339-5p,分析miR-339-5p对心肌细胞氧化应激损伤的保护作用。结果糖尿病小鼠心肌组织中和高糖诱导后的NMC中lnc-CCDST的表达分别较相应的对照组均显著增加(P值均<0.01);高糖诱导后NMC的ROS生成、caspase-3活性和DNA fragmentation均显著增加(P值均<0.05),而抑制lnc-CCDST表达可减少高糖诱导的ROS生成、caspase-3活性和DNA fragmentation增加(P值均<0.05)。在NMC中过表达miR-339-5p,可显著抑制lnc-CCDST表达;抑制miR-339-5p可促进lnc-CCDST表达(P值均<0.05)。此外,过表达miR-339-5p能够显著抑制高糖诱导的ROS生成、caspase-3活性和DNA fragmentation增加(P值均<0.05),而此作用可被过表达lnc-CCDST所抵消。结论lnc-CCDST参与高糖诱导的心肌细胞氧化应激损伤过程,而这一作用受miR-339-5p负向调节。

下调DNA损伤激活的长链非编码RNA抗心房颤动大鼠心肌纤维化的机制研究

目的:探究下调DNA损伤激活的长链非编码RNA(lncRNA NORAD)抗心房颤动(房颤)大鼠心肌纤维化作用及可能的作用机制。方法:SD大鼠随机分为对照组、房颤组、重组腺相关病毒血清型9阴性对照(rAAV9-NC)组、重组腺相关病毒血清型9载体含用于沉默lncRNA NORAD的小干扰RNA(rAAV9-siNORAD)组、p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂SB203580组、rAAV9-siNORAD+SB203580组,每组8只。建立各组模型大鼠并进行对应干预措施,实验结束后对大鼠进行心电图测试,记录房颤的发生率和持续时间;并检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)和炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;Masson染色检测心房组织纤维化,计算心房胶原容积分数(CVF);实时荧光定量PCR检测心房组织lncRNA NORAD、Ⅰ型胶原(COL1-A1)和Ⅲ型胶原(COL3-A1)的mRNA表达情况;Western blot检测心房组织丝裂原活化蛋白激酶激酶6(MKK6)、p38MAPK和核因子κB p65(NF-κB p65)及其磷酸化蛋白的表达情况。结果:与对照组相比,房颤组大鼠可观察到P波消失,出现大小不等、不规则的f波,心房组织有明显的纤维化改变,CVF、血清c TnI、CK-MB、TNF-α、IL-6水平、心房组织COL1-A1和COL3-A1的mRNA水平以及lncRNA NORAD表达水平、MKK6蛋白水平、磷酸化p38 MAPK与p38 MAPK的比值和磷酸化NF-κB p65与NF-κB p65比值升高,差异具有统计学意义(P均<0.05);与房颤组相比,rAAV9-siNORAD组和SB203580组大鼠房颤的发生率降低,持续时间缩短(P<0.05),CVF,血清cTnI、CK-MB、TNF-α、IL-6水平,心房组织COL1-A1和COL3-A1的mRNA水平以及lncRNA NORAD表达水平、MKK6蛋白水平、磷酸化p38 MAPK与p38 MAPK的比值及磷酸化NF-κB p65与NF-κB p65的比值降低,差异均具有统计学意义(P均<0.05);分别与单用SB203580和r AAV9-siNORAD相比,两者联合应用后p38 MAPK/NF-κB p65信号通路的激活被进一步抑制,心肌纤维化程度进一步降低。结论:下调lncRNA NORAD可能通过抑制p38 MAPK/NF-κB p65信号通路激活对房颤大鼠发挥抗心肌纤维化作用。

联合检测被转化生长因子b激活的长链非编码RNA和糖链抗原19-9对胰腺癌的诊断和预后价值

目的探讨联合检测被转化生长因子b激活的长链非编码(lncRNA-ATB)和糖链抗原19-9(CA19-9)在胰腺癌诊断和预后评估中的价值。方法选取2012年4月至2014年7月在安阳市人民医院肝胆外科接受手术治疗的胰腺癌病人103例(观察组)、良性疾病150例(良性组)以及同期健康体检者150例(健康组)。分别检测三组研究对象血清lncRNA-ATB的表达和CA19-9水平;采用受试者工作特征曲线(ROC)分析lncRNA-ATB和CA19-9对胰腺癌的诊断价值,采用比例风险(COX)回归模型分析影响胰腺癌病人预后的独立危险因素。结果观察组lncRNA-ATB和CA19-9水平[lncRNA-ATB(4.03±1.35),CA19-9:89.02±24.63)U/mL]均显著高于良性组[lncRNA-ATB(2.76±0.84),CA19-9(58.74±18.62)U/mL]和健康组[lncRNA-ATB(1.68±0.43),CA19-9(16.93±6.31)U/mL,均P<0.05],良性组lncRNA-ATB和CA19-9水平显著高于健康组(P<0.05)。ROC曲线显示,血清lncRNA-ATB、CA19-9以及两者联合的曲线下面积(AUC)分别为0.833(95%CI:0.793~0.868,P<0.001)、0.765(95%CI:0.720~0.805,P<0.001)、0.884(95%CI:0.849~0.914,P<0.001)。其中,两者联合检测与lncRNA-ATB及CA19-9的AUC差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析显示,lncRNA-ATB与CA19-9呈显著正相关(r=0.307,P<0.001)。COX回归分析显示较高血清lncRNA-ATB[OR(95%CI):1.11(1.04~1.17)]相对表达量是影响胰腺癌病人术后生存的独立危险因素。结论血清lncRNA-ATB和CA19-9在胰腺癌病人中表达显著上调,两者联合检测对胰腺癌的诊断效能更佳,是胰腺癌早期诊断和预后评估的潜在生物标志物。

被转化生长因子β活化的长链非编码RNA对人淋巴瘤Raji细胞增殖、周期及凋亡的影响

目的研究被转化生长因子β活化的长链非编码RNA(LncRNA-ATB)对人淋巴瘤Raji细胞增殖、凋亡和周期的影响及其潜在机制。方法通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LncRNA-ATB短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)和miR-200c模拟物(miR-200c mimics)效果,以及LncR NA-ATB、miR-200c和鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)的表达;噻唑蓝(MTT)法检测沉默LncRNA-ATB对Raji细胞增殖的影响;流式细胞术检测LncR NA-ATB对Raji细胞凋亡和周期的影响;荧光素酶报告基因(Luciferase)实验检测KRAS是否为miR-200c的直接靶基因。结果 LncR NA-ATB-shRNA可有效沉默Raji细胞中LncRNAATB的表达,沉默LncRNA-ATB的表达可抑制Raji细胞的增殖能力,促进Raji细胞的凋亡能力,并使Raji细胞的周期阻滞于G_1期。进一步研究显示LncRNA-ATB可作为ceRNA与miR-200c竞争性地调控miR-200c直接靶分子KRAS的表达而促进肿瘤细胞增殖。结论LncRNA-ATB可通过上调KRAS的表达而在淋巴瘤细胞的增殖、凋亡和周期过程中发挥着重要的作用。

人参皂苷Rh2调节转化生长因子β活化的长链非编码RNA对胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨人参皂苷Rh2(G-Rh2)调控转化生长因子β活化的长链非编码RNA(LncRNA-ATB)对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测人星形胶质细胞NHA和胶质瘤细胞(SHG-44、A172、Ln229、U87、U251)的LncRNA-ATB水平。培养U251细胞,将细胞分为si-NC组(阴性对照)和si-ATB组(干扰LncRNA-ATB),采用CCK-8、Transwell小室实验和划痕实验分别评价细胞增殖、迁移和侵袭能力。不同浓度G-Rh2处理U251细胞以计算G-Rh2的半数抑制浓度(IC_(50))值。将细胞分为对照组、G-Rh2组(20μg/ml G-Rh2)和G-Rh2+ATB组(20μg/ml G-Rh2+过表达LncRNA-ATB),检测细胞增殖、迁移和侵袭情况,qPCR和Western blotting检测基质金属蛋白酶(MMP)-9和Snail的水平。结果LncRNA-ATB在胶质瘤细胞的水平低于NHA细胞(P<0.05)。与si-NC组相比,si-ATB组U251细胞增殖、迁移和侵袭能力均受抑制(P<0.05)。G-Rh2的IC_(50)值为20.992μg/ml,并能够抑制U251细胞中LncRNA-ATB的表达(P<0.05)。G-Rh2组U251细胞增殖活力、迁移和侵袭能力低于对照组;G-Rh2+ATB组U251细胞增殖活力、迁移和侵袭能力明显高于G-Rh2组。G-Rh2组MMP-9和Snail的水平低于对照组(P<0.05),G-Rh2+ATB组MMP-9和Snai水平高于G-Rh2组(P<0.05)。结论干扰LncRNA-ATB表达抑制U251细胞的增殖、迁移和侵袭过程,G-Rh2可能下调LncRNA-ATB表达来抑制U251细胞的增殖、迁移和侵袭,发挥抗肿瘤功效。

重编程相关的长链非编码RNA与肿瘤的研究进展

人类基因组中存在大量长链非编码RNA(lincRNA),其在多种水平调控基因的表达且与多种疾病发生发展密切相关。重编程相关的长链非编码RNA(lincRNA ROR)是新近发现的对细胞重编程有重要调控作用的lincRNA,在多能干细胞形成、DNA损伤、氧化应激等过程中起重要作用。LincRNA ROR在多种肿瘤细胞中异常表达并在其发生、发展及治疗等过程中发挥作用。本文主要就lincRNA ROR在多种肿瘤中的表达及其对肿瘤发生发展中的作用机制作一综述。

LncRNA TINCR和FGF-1与儿童肥胖型支气管哮喘的相关性研究

目的探讨终末分化诱导的长链非编码RNA(lncRNA TINCR)和成纤维细胞生长因子-1(FGF-1)与肥胖型支气管哮喘患儿病情严重程度及肺功能的关系。方法采用随机抽样法选取我院2021年12月—2023年1月收治的120例支气管哮喘患儿为研究对象,其中肥胖型支气管哮喘患儿60例,非肥胖型支气管哮喘患儿60例;另选取同期于我院进行健康体检的健康儿童120例作为对照组研究对象。又根据肥胖型哮喘患儿的病情严重程度分为轻度组(29例)、中度组(24例)、重度组(7例)。检测所有研究对象的LncRNA TINCR和FGF-1 RNA相对表达水平、嗜酸性粒细胞百分比、第一秒用力呼气容积(FEV1)、最大呼气中段流量(MMEF)等,并分组进行比较分析。结果与非肥胖型支气管哮喘组和对照组相比,肥胖型支气管哮喘组患儿的LncRNA TINCR和FGF-1 RNA相对表达值明显升高(P<0.05);同时,非肥胖型支气管哮喘组患儿的LncRNA TINCR和FGF-1 RNA相对表达值也高于对照组(P<0.05)。肥胖型支气管哮喘组患儿的FEV1%和MMEF显著低于其他2组(P<0.05);另外,非肥胖型支气管哮喘组患儿的FEV1%和MMEF也低于对照组(P<0.05)。在肥胖型支气管哮喘患儿中,重度组的LncRNA TINCR与FGF-1 RNA相对表达水平高于轻度组及中度组(P<0.05)。重度组和中度组的肥胖型支气管哮喘患儿的FEV1%和MMEF都显著低于轻度组(P<0.05)。肥胖型支气管哮喘患儿的LncRNA TINCR、FGF-1与病情严重程度呈正相关(P<0.05),与FEV1%和MMEF呈负相关(P<0.05)。另外,LncRNA TINCR与嗜酸性粒细胞百分比呈正相关(P<0.05)。结论肥胖型支气管哮喘患儿的LncRNA TINCR和FGF-1水平较高,且与病情严重程度及肺功能密切相关。

LncRNA-ATB在肿瘤中的表达及调控作用研究

长链非编码RNA(lncRNA)是长度>200 nt非编码RNA家族中的重要成员。随着研究的不断深入,人体恶性肿瘤内异常表达的lncRNA对肿瘤发生、发展所起到的调控作用正逐渐被认知。被转化生长因子b激活的长链非编码RNA(lncRNA-ATB)在诸多肿瘤中呈现异常表达,并能够调控肿瘤增殖、侵袭转移、抗凋亡及耐药等恶性生物学行为。

长链非编码RNA MYC诱导的长链非编码RNA靶向miR-584-3p对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖侵袭和迁移能力的影响

目的研究MYC诱导的长链非编码RNA(MINCR)靶向miR-584-3p对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RA-SFs)增殖、侵袭和迁移的影响。方法收集25例RA患者和25例接受关节置换手术的关节创伤患者的滑膜组织样本。实时定量PCR检测滑膜组织中MINCR和miR-584-3p表达。分离RASFs进行体外培养,并将MINCR小干扰RNA(si-MINCR)、miR-584-3p模拟物、si-MINCR与miR-584-3p抑制物(anti-miR-584-3p)转染RASFs,分别通过细胞计数试剂盒(CCK-8)法、平板克隆实验、划痕愈合实验、Transwell实验检测细胞活力、克隆形成、迁移和侵袭能力的变化。采用双荧光素酶报告基因法评价miR-584-3p对MINCR荧光素酶活性的影响。采用独立样本t检验分析2组间差异,采用单因素方差分析和SNK-q检验分析多组间差异。结果与正常滑膜组织相比,RA患者滑膜组织中MINCR表达显著上调[(3.27±0.36)与(1.00±0.08),t=30.777,P<0.01],miR-584-3p表达显著下调[(0.43±0.05)与(1.00±0.06),t=36.491,P<0.01]。干扰MINCR表达后RASFs活力[(0.52±0.04)与(1.05±0.09),t=16.144,P<0.05]、克隆形成数[(45±5)个与(99±9)个,t=15.960,P<0.05]、划痕愈合率[(28±3)%与(69±6)%,t=18.013,P<0.01]和侵袭数[(53±5)个与(113±12)个,t=14.019,P<0.01]显著降低。过表达miR-584-3p后RASFs活力[(0.65±0.05)与(1.02±0.09),t=26.063,P<0.05]、克隆形成数[(52±5)个与(98±8)个,t=14.619,P<0.01]、划痕愈合率[(35±3)%与(68±6)%,t=13.711,P<0.01]和侵袭数[(62±5)个与(117±11)个,t=13.346,P<0.01]显著降低。miR-584-3p与MINCR特异性结合,并显著抑制荧光素酶活性[(0.45±0.04)与(0.97±0.06),t=21.633,P<0.01]。与干扰MINCR比较,同时抑制miR-584-3p与MINCR后RASFs活力[(0.92±0.07)与(0.49±0.04),t=16.000,P<0.01]、克隆形成数[(86±8)与(45±5),t=14.008,P<0.01]、划痕愈合率[(59±7)%与(27±3)%,t=13.200,P<0.01]、侵袭数[(99±9)%与(54±5)%,t=13.414,P<0.01]显著升高。结论干扰lncRNA MINCR通过靶向上调miR-584-3p表达可抑制RASFs的增殖、迁移和侵袭。

转座子来源的植物长链非编码RNA

转座子是基因组的重要组分,影响基因组的结构与稳定。长链非编码RNA(lncRNA)在转录及转录后水平调控多个生物学过程。转座子与lncRNA是物种进化的重要驱动力。含有转座子序列的lncRNA在自然界广泛存在。该文对植物lncRNA的发掘策略和功能研究进行概述,围绕植物转座子来源lncRNA(TE-lncRNA)的分布和功能展开综述,并对植物TE-lncRNA的调控机制、表观修饰及育种潜势等进行探讨与展望。

LncRNA-ATB通过调节miR-200c表达对肾移植大鼠急性排斥反应的影响

目的:探讨被转化生长因子β活化的长链非编码RNA(LncRNA-ATB)调节微小RNA(miRNA)-200c对肾移植大鼠移植后急性排斥反应(AR)和受体组织炎症反应的影响,分析肾移植AR潜在的分子机制,为临床诊断和治疗AR提供理论参考。方法:30只SD大鼠为供体,30只Wistar大鼠为受体,通过手术将供体肾脏移植到受体大鼠体内,建立肾移植AR模型,将建模成功大鼠(27只)随机分为模型组、LncRNA-ATB短发夹RNA(shRNA)组和LncRNA-ATB-NC组,每组9只。选取10只Wistar大鼠为假手术组。术后2 h,LncRNA-ATB-shRNA组和LncRNA-ATB-NC组大鼠按每只200μL分别尾静脉注射含LncRNA-ATB-shRNA和LncRNA-ATB-NC的psiCHECK2基因重组质粒脂质体复合物,假手术组和模型组大鼠按每只200μL尾静脉注射Opti-MEM培养基。干预7 d后,RT-PCR法检测各组大鼠外周血中LncRNA-ATB和miR-200c表达水平,全自动生化分析仪检测各组大鼠血肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠血清中白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,苏木精-伊红(HE)染色法观察各组大鼠肾组织病理形态表现并对AR进行诊断分级和半定量评分,RT-PCR法和Western blotting法检测各组大鼠肾组织中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)和核转录因子κB(NF-κB)mRNA及蛋白表达水平。结果:HE染色,与假手术组比较,模型组大鼠肾脏出现AR,表现为炎性细胞浸润、动脉炎症、间质细胞水肿和皮质出血等,LncRNA-ATB-NC组与模型组大鼠肾脏组织病理形态表现相似,LncRNA-ATBshRNA组大鼠肾组织病理学形态表现较模型组和LncRNA-ATB-NC组均减轻。与假手术组比较,模型组、LncRNA-ATB-NC组和LncRNA-ATB-shRNA组大鼠外周血中LncRNA-ATB表达水平,血清中Scr、BUN、IL-6、IL-8和TNF-α水平,AR半定量评分,肾组织中TLR4、MyD88和NF-κB mRNA及蛋白表达水平均升高(P<0.05),外周血中miR-200c表达水平均降低(P<0.05);与模型组和LncRNA-ATB-NC组比较,LncRNAATB-shRNA组大鼠外周血中LncRNA-ATB表达水平,血清中Scr、BUN、IL-6、IL-8和TNF-α水平,AR半定量评分,肾组织中TLR4、MyD88和NF-κB mRNA及蛋白表达水平均降低(P<0.05),外周血中miR-200c表达水平升高(P<0.05);模型组与LncRNA-ATB-NC组大鼠外周血中LncRNA-ATB和miR-200c表达水平,血清中Scr、BUN、IL-6、IL-8和TNF-α水平,AR半定量评分,肾组织中TLR4、MyD88和NF-κB mRNA及蛋白表达水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:沉默LncRNA-ATB可以减轻肾移植大鼠移植后AR,抑制受体组织发生炎症反应,其机制可能是通过上调miR-200c,抑制TLR4、MyD88和NF-κB mRNA及蛋白表达而发挥炎症抑制作用。

BRAF激活的长链非编码RNA介导促甲状腺激素受体基因甲基化促进甲状腺乳头状癌细胞的增殖和迁移

目的探讨BRAF激活的长链非编码RNA(BANCR)调控甲状腺乳头状癌(PTC)促甲状腺激素受体(TSHR)基因甲基化及其表达的作用及其机制。方法应用实时定量荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测PTC细胞中BNACR表达;应用慢病毒载体构建ihBANCR、绿色荧光蛋白(GFP)和isBANCR的PTC细胞株并应用甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)法检测BANCR对TSHR甲基化水平的影响;通过细胞计数试剂盒(CCK-8)细胞增殖和细胞划痕实验探讨BANCR对PTC细胞增殖和迁移能力的影响;使用肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库分析PTC数据集中TSHR甲基化相关酶,并通过蛋白质印迹法(Western blot)实验进行验证。组间比较采用t检验,χ^(2)检验及方差分析。结果BANCR在PTC细胞系(TPC-1和IHH-4)中高表达(F=7.410,P<0.05);BANCR可显著上调THSR基因甲基化水平(t=8.072,P<0.05);ihBANCR组的PTC细胞较GFP组其增殖能力(232.7±107.7比165.8±68.6,F=11.100,P<0.05)和迁移能力(0.058±0.041比0.307±0.033,t=4.669,P<0.05)显著增强,进一步应用甲基化酶抑制剂后可削弱上述结果;ihBANCR组的PTC细胞株中TSHR的表达水平较GFP组显著降低(2.095±0.045比3.375±0.191,F=51.540,P<0.05),进一步应用甲基化酶抑制剂后可减弱BANCR对TSHR表达的抑制作用(0.646±0.149比1.564±0.493,F=51.540,P<0.05)。生物信息学分析显示PTC中TSHR表达减低与TSHR基因甲基化水平(r=-0.351,P<0.05)及甲基化酶EZH2(r=-0.313,P<0.05)和DNMT1(r=-0.224,P<0.05)表达呈负相关,进一步上调BANCR后可显著增加甲基化酶EZH2(0.689±0.099比1.326±0.221,t=2.634,P<0.05)和DNMT1(0.617±0.068比1.427±0.066,t=8.500,P<0.05)。结论BANCR在PTC细胞中表达上调,并可通过TSHR基因甲基化促进PTC的增殖和迁移。

表观遗传学诱导的长链非编码RNA1在肝细胞癌中的表达及功能

目的观察表观遗传学诱导的长链非编码RNA1(lncRNA EPIC1)在肝细胞肝癌(HCC)的表达及其对肝癌细胞株增殖、侵袭、凋亡的影响。方法通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测EPIC1在7例HCC组织和其癌旁组织和五株肝癌细胞株(HepG2、SK-HEP-1、HuH-7-80、SMMC-7721、SNU-387)和人正常肝细胞株(HL-7702)的表达量。使用携带有EPIC1目的基因的重组慢病毒颗粒[LV-小干扰RNA(siRNA)]转染Hep G2、HuH-7-80作为实验组,转染阴性对照慢病毒颗粒(LV-NC)的Hep G2、HuH-7-80作为对照组。转染后细胞计数试剂盒(CCK-8)增殖实验检测Hep G2、HuH-7-80的增殖能力;Transwell侵袭实验检测HepG2、HuH-7-80的侵袭能力;流式细胞术检测Hep G2、HuH-7-80的凋亡率。结果EPIC1在HCC组织的表达量(8.77±0.36)显著高于其癌旁组织(2.39±0.45),差异有统计学意义(P<0.01)。EPIC1在5株肝癌细胞株(HepG2、SK-HEP-1、HuH-7-80、SMMC-7721、SNU-387)的表达量(7.24±0.81、3.11±0.35、5.17±1.12、4.38±0.48、2.69±0.65)均较人正常肝细胞株HL-7702的表达量(1.29±0.13)明显增高,其中,在HepG2、HuH-7-80中表达量最高,约为HL-7702的(5.61±0.12)、(4.01±0.16)倍,差异有统计学意义(P<0.01)。低表达EPIC1组的HepG2在24、48、72 h细胞增殖能力(LV-siRNA1:0.43±0.02、0.72±0.02、1.31±0.01,P<0.05;LV-siRNA2:0.42±0.02、0.76±0.04、1.03±0.02,P<0.05)比对照组的Hep G2(0.59±0.02、0.98±0.02、1.63±0.02)显著下降;低表达EPIC1组的HuH-7-80在24、48、72 h细胞增殖能力(LV-siRNA1:0.59±0.01、0.73±0.02、1.31±0.05,P<0.05;LV-siRNA2:0.43±0.04、0.74±0.04、1.26±0.04,P<0.05)比对照组的HuH-7-80(0.64±0.02、0.82±0.02、1.78±0.02)显著下降。低表达EPIC1组的HepG2、HuH-7-80穿过基底膜的细胞数量[(43.35±6.16)、(55.40±8.18)个]比对照组相对细胞数量[(80.67±5.14)、(74.73±6.13)个]明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。低表达EPIC1组HepG2、HuH-7-80细胞凋亡率[(23.20±0.37)%、(18.60±0.46)%]较对照组细胞凋亡率[(2.60±0.96)%、(3.60±0.33)%]明显增高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论lncRNA EPIC1在HCC组织和细胞中高表达,低表达EPIC1会降低肝癌细胞的增殖和侵袭能力,促进肝癌细胞凋亡。

血浆肝癌微血管侵袭相关的长链非编码RNA对子痫前期的预测价值

目的研究肝癌微血管侵袭相关的长链非编码RNA(LncRNA MVIH)在子痫前期患者血浆中的表达,探讨其单独或联合其他指标对子痫前期的预测价值。方法选取本课题组在研项目孕期前瞻性队列留取的2016年12月至2018年4月间孕7~16周患者血浆标本,根据妊娠结局有无子痫前期进行分组,将产妇分为子痫前期组和正常对照组,进行病例对照研究。收集产妇孕早期相关临床资料及血浆,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)法检测两组患者血浆LncRNA MVIH表达水平,对所有统计指标进行单因素分析,将具有统计学差异的指标进行Logistic回归分析,采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析各独立危险因素及回归模型对子痫前期的预测价值。结果孕16周前体质量指数(BMI)、收缩压、舒张压、平均动脉压(MAP)、白细胞、血红蛋白、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、血尿酸、尿蛋白与子痫前期呈正相关,LncRNA MVIH与子痫前期呈负相关。具有预测价值的独立标志物依次是LncRNA MVIH、尿酸、白细胞、ALT、尿蛋白,预测子痫前期的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.763、0.741、0.663、0.666、0.601,联合方程AUC为0.890,敏感度和特异度分别为86.4%和83.1%,准确度为84.7%。结论血浆LncRNA MVIH与子痫前期密切相关,且对子痫前期发生有一定的预测价值,联合LncRNA MVIH、尿酸、白细胞、ALT、尿蛋白可提高子痫前期预测率。

lncRNA-ATB、miR-34a和miR-145在高龄肺腺癌患者癌组织中的表达水平及临床价值

目的探讨高龄肺腺癌患者癌组织内转化生长因子-β激活的长链非编码RNA(lncRNA-ATB)、微小RNA34a(miR-34a)和微小RNA-145(miR-145)的表达水平与其生存情况的关系。方法选取2014年8月至2016年8月在该院治疗的112例高龄肺腺癌患者为研究对象,采用qRT-PCR检测患者癌组织及癌旁组织中lncRNA-ATB、miR-34a和miR-145表达水平,分别根据lncRNA-ATB、miR-34a和miR-145的表达水平将患者分为高、低表达组,以总生存率(OS)作为检测指标,采用Kaplan-Meier法分别分析两组患者的预后情况,并采取Cox法探讨影响患者预后的独立危险因素。结果肺腺癌组织lncRNA-ATB表达水平显著高于癌旁组织,肺腺癌组织miR-34a和miR-145表达水平显著低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。随访发现共24例患者死亡,所有患者的3年OS为78.57%。其中lncRNA-ATB高、低表达组3年OS分别为71.43%、85.71%;miR-34a高、低表达组3年OS分别为91.07%、66.07%;miR-145高表达组高、低表达组3年OS分别为89.29%、67.86%,Log-rank检验显示,各指标高、低表达患者的OS比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。影响患者预后的多因素Cox分析结果显示,肿瘤TNM分期升高、发生淋巴结转移和胸膜侵犯、lncRNA-ATB高表达以及miR-34a、miR-145低表达是影响患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论lncRNA-ATB在高龄肺腺癌患者癌组织中呈高表达,miR-34a、miR-145在高龄肺腺癌患者癌组织中呈低表达,且lncRNA-ATB高表达,miR-34a、miR-145低表达是影响患者预后的独立危险因素。