肺癌病理应用支气管冲洗细胞块免疫组化链霉菌亲生物素蛋白-过氧化物酶连接法染色的诊断效果及检出率评价

目的探讨肺癌病理应用支气管冲洗细胞块免疫组化链霉菌亲生物素蛋白-过氧化物酶连接法(SP)染色的诊断效果及检出率。方法选取2017年2月至2021年12月广东省开平市中心医院收治的70例经支气管冲洗液检查阳性患者作为研究对象。采用液基薄层细胞学(TCT)技术制备细胞块,分别采用免疫组化SP法、苏木精伊红染色(HE)进行常规细胞学检查,比较两种检测方法诊断效能及不同肺癌类型免疫组化SP法检查后不同抗体阳性表达率比较。结果免疫组化SP法对恶性肿瘤诊断的灵敏度为96.15%、准确度为95.71%,均高于HE染色的69.23%、70.00%(P<0.05),特异度为94.44%,高于HE染色的72.22%,但差异无统计学意义。免疫组化SP法对肺癌病理类型总检出率高于HE染色,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化SP法对肌上皮(p63)、细胞角蛋白5/6抗体(CK5/6)、细胞角蛋白7(CK7);甲状腺转录因子-1(TTF-1)、突触素(Syn)、人表皮生长因子受体-5(CD56),增殖细胞的核抗原(Ki67),天冬氨酸蛋白酶(Napsin-A)表达阳性率均高于HE染色,差异统计学意义(P<0.05)。不同类型肺癌患者p63、CK5/6、CK7、TTF-1、Syn、CD56、Ki67、Napsin-A阳性表达率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论支气管冲洗液细胞块免疫组化SP法染色对肺癌有较高的诊断价值,对不同类型肺癌有较高的检出率及鉴别率,具有重要的临床意义。

链酶卵白素-生物素法检测乙型肝炎产妇分娩的死胎肝组织中乙型肝炎病毒及其标志物的研究

目的 探讨乙型肝炎病毒 (HBV)通过产妇传播在胎儿肝组织中表达的高危因素。方法 采集 40例患乙型肝炎的产妇分娩的死胎 ,常规尸检 ,取肝组织 ,链酶卵白素 -生物素法检测HBsAg ;回访孕妇产前静脉血HBV及其标志物的检测结果 ;取百分率行u检验。结果 HBsAg阳性颗粒在肝细胞胞浆内呈弥散分布 ,肝细胞核不着色 ;含HBsAg颗粒的肝细胞胞浆呈弥漫性棕黄色 ,呈点、灶片状分布于肝组织中 ;毛细胆管上皮和管腔内也可见到棕黄色HBsAg颗粒。 40例乙型肝炎产妇分娩的死胎肝组织中HBsAg阳性 2 0例 (5 0 0 0 %) ,其中静脉血HBV :①单项阳性 (两对半任一项阳性 )、②小三阳 [HBsAg(+) ,HBeAb(+) ,HBcAb(+) ]和③大三阳 [HBsAg(+) ,HBeAg(+) ,HBcAb(+) ]的孕妇分娩的死胎肝组织中HBsAg阳性分别为 13例 (13/ 2 7) (4 8 15 %)、1例 (1/5 ) (2 0 0 0 %)、6例 (6 / 8) (75 0 0 %) ,①和③比较差异不显著 (P >0 0 5 ) ;②和①、③比较 ,差异显著 (P <0 0 5 )。结论 死胎肝组织HBsAg表达与孕妇静脉血中HBV标志有关 ;孕妇静脉血HBV大三阳 [HBsAg(+) ,HBeAg(+) ,HBcAb(+) ]是乙型肝炎病毒通过母婴传播在胎儿肝组织中表达的高危因素。

生物素-链霉亲和素酶免疫法PSA测定的评价

目的评价生物素-链霉亲和素酶免疫分析法(BSA-ELISA)测定前列腺特异性抗原(PSA)并与化学发光法(CLIA)进行比较。方法根据EP9-A文件要求采集数据,并以相应软件分析这两种方法的相关性;同时对BSA-ELISA的测定范围,变异系数(CV),最小检测限进行测定。结果两种方法测定的结果具有较好的相关性,回归方程У=0.985Х-0.131,相关系数(r)=0.997。PSA的批内平均CV为2.21%,批间平均CV为3.08%。测定范围为1.50～85.00μg/L。最小检测限为0.30μg/L。结论采用全自动酶免疫分析仪的BSA-ELISA与CLIA自动分析仪测定PSA的相关性好,结果稳定,偏差小,可以在临床上常规应用。

谷氨酸脱羧酶抗体检测的生物素．链霉亲合素放大ELISA系统构建及其临床应用

目的建立检测谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)的新方法,即生物素-链霉亲合素放大ELISA系统(ELISA,BAS ELISA),并进行验证及初步临床应用。方法人脑组织经过破碎、抽提、二次凝胶过滤层析与阴、阳离子交换层析分离蛋白,收集纯化的谷氨酸脱羧酶(GAD);以链霉亲和素(SA)预包被,使GAD生物素化(bio-GAD),探讨检测GADA的最优实验条件,并对BAS ELISA的灵敏度、特异性、准确性及精密性进行验证。然后选择新诊断的成年1型糖尿病患者106例(T1DM组),以健康体检者98例为对照组,抽取空腹外周静脉血3 ml,分离血清冷冻标本,用构建的BASELISA和德国宝灵曼公司Anti-GAD65 ELISA检测血清中的GADA,对比研究并进行统计学分析。结果成功构建了检测GADA的BAS ELISA新方法;在T1DM组中,BAS ELISA方法测得T1DM的GADA阳性率显著高于anti-GAD65 ELISA方法(82.08%vs 52.83%,P<0.01);在对照组中BASELISA方法测得T1DM的GADA阳性率也明显高于anti-GAD65 ELISA方法(10.20%vs 6.12%,P<0.05)。结论利用生物素-链霉亲合素放大系统可以构建检测GADA的ELISA新方法;生物素-链霉亲合素放大ELISA系统在检测GADA方面具有较高的特异性、灵敏度、准确性和精密性,提高了GADA检测的阳性率,降低T1DM的漏检率,为早期检测T1DM提供新方法。

链霉卵白素——生物素染色技术

免疫细胞化学是利用免疫反应定位细胞和组织中的抗原成份的一门新技术,已成为病理学研究及临床病理诊断的重要手段。本文介绍一种刚刚发明的免疫细胞化学染色技术——链霉卵白素生物素染色技术(LSAB染色),并与目前广泛使用的抗生物素——生物素过氧化酶复合物染色技术(ABC染色)作了比较。实验证明,LSAB技术操作简单,

链霉菌生物转化制备葫芦素B产酶的培养基优化

目的:提高葫芦素B葡萄糖苷(CuBg)生物转化为葫芦素B(CuB)的得率。方法:采用单因素实验,优化链霉菌(Streptomyces sp.)RW-2菌株产β-葡萄糖苷酶培养基中的碳源、氮源、初始pH和培养时间。结果:200 g·L^(-1)的马铃薯煮沸后汁液中,加入30 g·L^(-1)的蔗糖、14 g·L^(-1)的大豆粉,调节pH为7.5,作为产酶培养基,接种链霉菌RW-2孢子液后,于30℃、180 r·min^(-1)条件下培养4 d,除去菌体的粗酶液转化甜瓜蒂提取物,CuBg转化为CuB的得率最高,达到69.1%。结论:在马铃薯汁中仅加入蔗糖和大豆粉作为链霉菌RW-2产β-葡萄糖苷酶的培养基,具有组分少,配制方法简单,成本低的优点。

促甲状腺激素生物素-亲和素酶促化学发光免疫分析方法的建立

目的建立一种低成本、高灵敏度的检测血清促甲状腺激素(TSH)的生物素-亲和素酶促化学发光免疫分析方法。方法引入生物素-亲和素放大系统,一株抗TSH的单克隆抗体包被微孔板,另一株标记生物素,辣根过氧化物酶标记链亲和素,鲁米诺作为发光底物,采用夹心法,建立TSH酶促化学发光免疫分析方法。结果方法分析灵敏度为0.01mIU/L,批内变异系数为2.01%～5.40%,批间变异系数为2.96%～17.9%,回收率为90.6%～114.4%,高值促甲状腺激素血清样品经系列倍比稀释后,测定值与稀释度呈线性关系,相关系数大于0.99,与原子高科TSH免疫放射分析方法和罗氏电化学发光分析法的测定值具有良好的相关性。结论生物素-亲和素TSH酶促化学发光免疫分析方法具有成本低、灵敏度高、特异性高和稳定性好的特点,具有广阔的应用前景。

核酸适配体筛选中单链DNA制备方法的研究进展

核酸适配体是人工合成的短链核酸,作为分子识别元件,能够与各类靶标物质高特异性、高亲和力的结合,分为单链DNA和RNA两种类型。其中单链DNA适配体由于其稳定性比RNA适配体更好而更受欢迎,因此得到广泛应用。核酸适配体筛选通常是通过配体指数富集系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)实现的,筛选能否成功在很大程度上取决于其最关键的单链制备步骤,即将双链DNA转化为相应的单链DNA。目前,存在许多方法可以制备单链DNA,包括热变性法、生物素-链霉亲和素亲和分离法、变性胶电泳分离法、核酸外切酶消化法、不对称聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)法等。本文在总结文献报道的基础上,具体阐述了各种单链DNA制备方法的原理、优缺点及近5年的应用情况,并对这些单链DNA制备方法进行了比较和展望,以期能为成功筛选各类靶标的核酸适配体提供参考。

生物素—链霉亲和素免疫学测定地高辛的研究

方法为竞争酶联免疫吸附方法，待测物质为血清中地高辛，采用国产链霉素和素直接包被塑料板孔，生物素标记地高辛抗体。其测定灵敏度为0．0964μg/L,最低检测限为0．225μg/L,测定三份低、中、高浓度的血清标本，批内变异系数分别为8．9％、5．9％和2．4％；批间变异系数分别为15．8％，10．1％和9．2％，测定回收率在89．1％－107．22％之间，此法与FPIA方法相关良好（r=0.9488).

心肌营养素-1 ELISA测定法的建立及初步应用

目的应用生物素链霉亲和素酶联免疫吸附法(BSA ELISA)建立血浆心肌营养素1(CT1)测定法,并初步应用于冠心病患者血浆CT1水平的检测。方法用鼠抗重组人CT1单抗包被酶标板,加入待测抗原,并依次加入生物素化羊抗重组人CT1多克隆抗体、辣根过氧化物酶标记链霉亲合素,用H2O2邻苯二胺显色。检测35名冠心病患者及对照组血浆CT1含量的变化。结果方法的线性范围为10～2000pg/ml,检测下限为10pg/ml,批内变异系数为1.76%～7.64%,批间变异系数为5.96%～9.04%。结论该方法简便、快速,特异性、敏感性、重复性均在临床检测可接受范围内,标准曲线线性良好,适用于基础研究与临床检验。

卡托普利晚期预处理对人内皮细胞缺氧复氧损伤时内皮素1和一氧化氮合酶表达的影响

观察缺氧复氧损伤时内皮细胞表达内皮素、一氧化氮合酶和一氧化氮的变化 ,并探讨卡托普利晚期预处理对内皮细胞在缺氧复氧损伤时三者的影响及机制。选用体外培养的第 3代人脐静脉内皮细胞 ,设正常对照组、单纯缺氧组、缺氧复氧组、卡托普利预处理组、卡托普利 +缓激肽B2 受体阻断剂组、卡托普利 +蛋白激酶C阻断剂组和卡托普利 +核因子κB阻断剂组 ,然后提取总RNA ,运用半定量逆转录—聚合酶链反应检测内皮素、一氧化氮合酶的mRNA表达。并利用分光光度计检测总一氧化氮合酶和一氧化氮蛋白的表达。结果发现 ,内皮素的灰度值在单纯缺氧组、缺氧复氧组均升高 ,在卡托普利组降低 ,而在三种阻断剂组均升高 ;诱导型一氧化氮合酶和内皮型一氧化氮合酶灰度值的变化规律与内皮素相反 ,其中诱导型一氧化氮合酶的变化较为轻微。与对照组相比 ,单纯缺氧组和缺氧复氧组一氧化氮合酶和一氧化氮有不同程度的降低 (P <0 .0 1) ;与单纯缺氧组和缺氧复氧组相比 ,卡托普利组一氧化氮合酶和一氧化氮均明显升高 (P <0 .0 1) ;与卡托普利组相比 ,3种阻断剂均可使一氧化氮合酶和一氧化氮的表达下降 (P <0 .0 1) ,而与缺氧复氧组相比表达升高 (P <0 .0 1)。结果提示 ,缺氧复氧可以使内皮细胞表达的内皮素增加 ,一氧化氮合酶降低 ,

尿D-氨基酸氧化酶的ELISA检测和临床应用

目的为探索尿Ｄ－氨基酸测定的临床意义。方法 采用多克隆的ＩｇＧ片段和生物素－链霉亲和素－过氧化物酶系统测定尿Ｄ－氨基酸的含量。检测了２１例正常人和４４例各种肾脏疾病患者尿ＤＡＯ浓度，同时测定尿Ｎ－乙酸－β－Ｄ－氨基葡萄糖苷酶（ＮＡＧ）和α１－微球蛋白（ＡＭＧ）。结果尿ＤＡＯ在各种肾脏疾病患者中均有不同程度的增高，并显示尿ＤＡＯ与ＮＡＧ和ＡＭＧ有高度相关性（ｒ＝０．７２９，Ｐ＜０．０１，ｒ＝０．６４３，Ｐ＜０．０１）。结论提示尿 ＤＡＯ检测可作为临床判断肾功能不良的监测指标之一。

应用生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附法检测原发性肝癌特异性γ-谷氨酰转移酶

目的观察生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附（ELISA）法检测原发性肝癌（PHC）特异性欧曼陀罗凝集素强结合的γ-谷氨酰转移酶（DSA-GGT）的临床应用价值。方法对45例正常对照者、58例PHC患者和203例非PHC患者（包括其他肿瘤患者36例，肝良性病变患者167例），应用生物素-链霉亲和素ELISA法检测受试者血清中DSA—GGT的水平，同时用ELISA法检测受试者血清中甲胎蛋白（AFP）的水平。结果58例PHC患者中，DSA—GGT阳性38例，检测DSA-GGT诊断PHC的灵敏度为65．5％；203例非PHC患者中，DSA—GGT阳性18例，检测DSA—GGT诊断PHC的特异度为91．1％。该方法的平均批内及批问变异分别为8．9％和11．5％。58例PHC患者中，AFP阳性40例，检测AFP诊断PHC的灵敏度为69．0％；203例非PHC患者中，AFP阳性19例，检测AFP诊断PHC的特异度为90．6％。DSA-GGT与AFP联合检测诊断PHC的灵敏度和特异度分别为93．1％和85．7％。结论生物素-链霉亲和素ELISA法检测DSA—GGT和ELISA法检测AFP对PHC诊断的灵敏度和特异度相近，且前者的重复性良好，可作为PHC诊断的较好检测方法；DSA—GGT与AFP联合检测可显著提高PHC诊断的灵敏度。

新生血管抑制剂VEGFR2-Fc的检测方法建立与方法学验证

目的建立重组人血管内皮生长因子受体Fc融合蛋白(VEGFR2-Fc)血药浓度的检测方法并进行验证,为该药物的动力学研究提供方法学。方法以羊抗人IgG-Fc作为捕获抗体,以生物素标记羊抗人VEGF R2为检测抗体,建立双抗夹心的BA-ELISA检测方法,并开展方法学试验。结果标准品的线性范围为28～0.4375ng/ml,相关系数达到0.999;质控浓度(20ng/ml、10ng/ml和5ng/ml)的回收率分别为103.159%、116.092%和102.528%,板内和板间精密度分别是8.87%、3.27%、15.41%和12.38%、7.97%、16.74%;灵敏度为0.25ng/ml。结论建立的BA-ELISA检测VEGFR2-Fc方法符合生物技术药物的方法学标准,可以用于体内药代动力学研究的分析方法。

水产品中孔雀石绿BA-ELISA检测方法的建立及应用

建立了基于生物素-链霉亲合素放大的酶联免疫吸附法(BA-ELISA)检测水产品中的孔雀石绿(MG)含量的方法。优化了包被原和生物素化抗体的工作浓度,以及封闭液、温育时间、pH值和盐离子强度等实验条件。结果显示,最佳实验条件为:包被原和生物素化抗体的稀释倍数均为1∶ 2 000,封闭液为1%明胶,抗原抗体反应时间为 60 min ,缓冲液的pH值为7.0,盐离子强度为0.1 mol/L。在此条件下,该方法的线性范围为0.05~20.00 ng/mL,检出限(LOD)为0.037 μg/kg,回收率为83.5%~115.0%,变异系数( CV )为4.53%~13.80%。将该方法用于实际样品的分析检测,检测结果与LC/MS相比,具有较好的相关性。上述结果表明,本实验建立的方法灵敏度高,特异性和稳定性较好,可用于水产品中MG的分析筛查。

基于磁性纳米颗粒和金纳米粒子构建DNA电化学生物传感技术

本文构建了一种基于纳米粒子、茎环DNA和丝网印刷电极(SPCE)的电化学生物传感技术用于乳腺癌基因的快速、灵敏检测。该传感技术中,探针DNA的两端分别标记了巯基和生物素,巯基用于与金纳米粒子(AuNPs)作用,生物素用于与磁性纳米颗粒(MNPs)表面修饰的链酶亲和素作用以达到富集的目的,之后利用SPCE进行电化学检测。无目标DNA存在时,双标记DNA保持茎环结构,使得生物素分子很难和MNPs上的亲和素接触。一旦加入目标DNA,茎环结构打开,生物素得以与MNPs上的链霉亲和素发生特异性结合,形成的复合物(MNPs-DNA-AuNPs)通过磁性富集到SPCE表面,从而获得AuNPs的电化学信号。该DNA电化学生物传感对单碱基错配有良好的分辨能力,完全互补DNA的检出限为8.0×10-13 mol/L。

基于生物素化纳米抗体的果蔬中百草枯超灵敏免疫检测方法研究

通过纳米抗体活性口袋生物素化修饰实现识别活性提升,并以生物素化纳米抗体(Biotin-Nb2-12)作为识别元件,结合生物素-多聚辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(polyHRP-SA)亲和识别信号系统,建立了检测果蔬中百草枯的生物素-链霉亲和素酶联免疫分析方法(BA-ELISA)。经多参数系统优化,所建方法的检出限(LOD)达0.58 pg/mL,半数抑制浓度(IC_(50))为14.1 pg/mL,线性范围为1.7~116.2 pg/mL,且与功能及结构类似物无显著交叉反应。相比传统间接竞争酶联免疫分析方法(icELISA),该法的IC_(50)提高了85倍,抗体消耗量降低至1/8,在大白菜和雪梨样品中的平均加标回收率为94.5%~116%,可用于果蔬中百草枯的痕量检测。

丙型肝炎患者PBMC的mIL-2R表达及其临床意义

目的 探讨丙型肝炎患者 m IL - 2 R表达水平及其临床意义。方法 用生物素 -链酶亲和素法对 5 6例抗 - HCV阳性患者外周血单个核细胞 (PBMC)进行植物血凝素 (PHA )诱导前后 m IL - 2 R的的检测。结果 急、慢性丙型肝炎患者静息状态 m IL - 2 R表达水平 ,诱导状态 m IL - 2 R表达水平分别与正常对照相比 ,差异均有显著性。结论 丙型肝炎患者体内存在明显的细胞免疫功能紊乱 ,T细胞活化障碍 ,并与肝病的慢性化有关。

E-coli和Yeast菌体蛋白ELISA定量测定方法的建立

目的:提高酶联免疫吸附测定(ELISA)方法的灵敏度。方法:将聚苯乙烯微孔板(PS)经过紫外线(UV)辐照后,用葡萄球菌A蛋白(SPA)预包被,再应用生物素-链霉亲和素(BSA)反应建立双抗体夹心ELISA。结果:检测低限为1.95ng/ml,方法的批内变异分别为7.96%和8.63%。结论:为菌体蛋白的测定提供了一种新的方法。