融合蛋白链间连接肽的优化设计探讨

以单链抗体为元件构建的基因工程双价抗体分子在肿瘤的治疗方面显示出良好的应用前景,但融合蛋白的亲和性及抗肿瘤活性分别较衍生因子的功能及活性有所变化.合适的链间连接肽(Linker)可以赋予单链双特异性抗体更适于临床应用需求的生物学活性,如何优化选择或设计Linker则成为构建单链双特异性抗体的关键步骤.在对影响融合蛋白亲和性及抗肿瘤活性的主要因素进行分析的基础上,文中提出采用生物信息学方法,同源模建后分析衍生因子的构效关系、衍生因子分子之间相互影响的空间位置关系,并综合考虑影响融合蛋白生物学活性的相关因素,尝试运用改进的遗传算法进行Linker的优化设计.对未来的研究工作进行了展望.

链间连接肽对单链双特异性抗体生物学活性的影响

单链双特异性抗体(ScBsAb)是具有良好临床应用前景的基因工程抗体,但不同的链间连接肽(interlinker)对其生物学活性的影响尚有待深入研究. 设计并合成3种不同的链间连接肽序列,分别命名为Fc,HSA和205C′,并构建成单链双特异性抗体通用表达载体,以抗人CD3改形单链抗体(ScFv)和抗人卵巢癌单链抗体为基础,构建成单链双特异性抗体.SDS-PAGE及 Western blot结果表明,3种不同的链间连接肽对抗体的表达量无明显影响.在此基础上,进行ELISA及血液药代动力学测定,发现不同链间连接肽的单链双特异性抗体与相应抗原的结合活性及其在小鼠体内的清除相T_(1/2)存在一定差异,链间连接肽HSA可以显著延长抗体在体内的滞留时间.上述研究结果提示,链间连接肽序列将会影响单链双特异性抗体的抗原结合活性及其在体内的稳定性等重要的生物学特性.因此,筛选理想的链间连接肽序列对于构建单链双特异性抗体具有重要意义. 合适的链间连接肽可以赋予单链双特异性抗体更适于临床应用需求的生物学活性.