南昌霉素高产菌株的链霉素抗性基因突变诱变筛选研究

通过链霉素对南昌霉素 (Nanchangmycin)产生菌NS 41 80菌株孢子的致死浓度测定基础上 ,采用诱变剂甲基磺酸乙酯 (EMS)的不同诱变剂量对菌株孢子进行诱变处理 ,诱变处理的孢子涂布在含链霉素 ( 1 0 μg/mL)致死浓度的高氏平板上 ,获得了大量的链霉素抗性基因 (str)突变株。然后从 3,0 0 0株链霉素抗性基因 (str)突变株中通过初筛获得比诱变出发菌株产素能力提高 2 0 %以上的菌株 2 0 2株。再进一步通过摇瓶复筛 ,获得比出发菌株产素能力分别提高 1 0 0 %、 2 0 0 %和 30 0 %高产菌株为 48株 ,7株和 1株 ,分别为复筛菌和初筛菌株的 2 3 76%和 1 60 % ;3 46%和 0 2 3% ;0 5 %和 0 0 3%。将产素能力提高 2 4 0 %以上 5个菌株连同出发菌株连续 3批次进行摇瓶发酵结果 ,5个突变株的产素能力均比出发菌株的产素能力提高 5 7%～ 96 4% ,其中突变株 80 5 3 1 65菌株摇瓶发酵单位达 6,0 0 0 μg/mL以上 ,3批次摇瓶平均发酵单位达 5 ,85 5 μg/mL。建立了南昌霉素高产菌株的链霉素抗性基因突变诱变快速高效的筛选方法。

梅岭霉素高产菌株链霉素抗性基因突变株筛选

通过链霉素对梅岭霉素 (Meilingmycin)产生菌南昌链霉菌NS 41 80菌株孢子致死浓度的测定 ,采用诱变剂EMS 4种不同剂量对菌株孢子进行诱变处理 ,然后涂布在含链霉素致死浓度的高氏平板上 ,获得了大量的链霉素抗性基因 (str)突变株。并进一步筛选到梅岭霉素高产菌株 80 5 1 1 2 2 1 ,在摇瓶条件下 ,只产梅岭霉素不产南昌霉素 ,梅岭霉素活性单位达 1 ,52 1 μg/mL,比NS 41 80的摇瓶发酵单位 855μg/mL提高了 77 9% ,该菌株连续传 6代进行摇瓶发酵 ,其F2 代和F3 代发酵单位稳定 ,F4代至F6 代随着代数增加 ,梅岭霉素发酵单位急速下降。通过EMS诱变剂量分别与抗药性突变率和str突变株产梅岭霉素产量的产势统计分析表明 ,菌株抗药性突变与产量突变密切相关。产量突变的EMS剂量高于str突变剂量 ,从而建立了梅岭霉素产生菌链霉素抗性基因突变筛选方法。

杀虫抗生素高产菌株的选育

在链霉素对杀虫抗生素菌株GX-29孢子的致死浓度测定基础上,采用紫外和微波诱变相结合的方法对菌株孢子进行诱变处理,诱变处理的孢子涂布在含链霉素最小抑制浓度(18.2μg/ml)的高氏平板上,获得了大量的链霉素抗性基因(sty)突变株。进一步通过摇瓶复筛,获得高产突变株L8,其摇瓶发酵的杀虫活性为出发菌株1.94倍。该菌株经多次传代,遗传性状较稳定。