Streptomyces griseus ATCC 13273对4种黄酮生物转化的初步研究

研究Streptomyces griseusATCC 13273对黄酮类化合物柚皮苷,橙皮苷,黄芩苷及木犀草素的生物转化。用标准马铃薯培养基培养的S.griseus中加入底物后继续培养4 d,发酵液经乙酸乙酯萃取后采用硅胶柱层析分离纯化,产物的结构根据光谱数据予以鉴定。有6个转化产物得到分离鉴定,分别是柚皮素-7-O-葡萄糖苷,柚皮素,橙皮素,黄芩素、黄芩素-6-甲氧醚和柯伊利素。结果表明此转化过程中涉及到两类反应即糖苷水解和甲基化反应,S.griseus产生的L-鼠李糖苷酶对底物有特异选择性,β-D-葡萄糖苷酶的选择性不强,甲基转移酶仅对黄酮类化合物的特异位点进行甲基化。该研究首次报道S.griseus对黄酮L-鼠李糖苷键和β-D-葡萄糖苷键的水解及对黄酮类化合物特异位点的甲基化。

Streptomyces sahachiroi ATCC 33158中一个Ⅲ型聚酮合酶基因的克隆及功能分析

从链霉菌Streptomyces sahachiroi ATCC 33158基因组中克隆到1个聚酮合酶(polyketide synthase,PKS)基因orf18。生物信息学及进化树分析表明它可能属于rppA类Ⅲ型PKS基因。通过RT-PCR证实了该基因在野生型S.sahachiroi中是可以进行转录表达的。HPLC和LC-MS分析的结果表明orf18在S.lividans中异源表达时可产生1,3,6,8-四羟基萘(THN),并且发现该基因也可以在革兰氏阴性菌Pseudomonas stutzeri中异源表达并产生明显的棕红色色素。证明orf18编码的蛋白属于RppA类Ⅲ型PKS,可催化THN的合成,而产物THN在革兰氏阴性菌P.stutzeri中可进一步氧化及聚合形成棕红色色素。

生物转化合成左旋紫堇达明诱导剂筛选及优化

目的:左旋紫堇达明为中药延胡索中痕量高效镇痛活性成分,灰色链霉菌(Streptomyces griseus ATCC 13273)具有生物转化左旋四氢巴马汀产生左旋紫堇达明的转化活性。筛选合适的生物转化诱导剂并优化诱导条件,提高左旋紫堇达明的转化产率。方法:以左旋紫堇达明的转化产率为指标,选用苯甲酸、正己烷、苯巴比妥钠作为诱导物,筛选合适的诱导物并优化转化体系诱导条件。结果:苯甲酸、正己烷、苯巴比妥钠均能显著提高左旋紫堇达明的转化产率。结论:正己烷廉价易得且不影响转化产物分离,适合工业化生产使用,为该转化体系的合适诱导剂。

酪蛋白水解物对雷帕霉素产生菌Streptomyces hygroscopicus ATCC29253接合转移效率的影响

吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)ATCC29253能够产生非常丰富的次级代谢产物,除了雷帕霉素外,还可以分泌尼日利亚菌素、洋橄榄叶素、六烯类抗生素等多种具有生物活性的物质,具有重要的研究价值和应用前景。【目的】而建立高效的遗传操作系统是研究该链霉菌相关代谢产物合成机理和构建基因工程菌株的基础。【方法】我们测试了不同培养基及供体菌对吸水链霉菌及其它链霉菌接合转移效率的影响。【结果】我们发现酪蛋白水解物和镁离子能显著提高S.hygroscopicus ATCC29253接合转移效率。通过随机组合试验,筛选出最佳的MgCl2和酪蛋白水解物浓度组合,使得S.hygroscopicus ATCC29253接合转移效率达到1.5×10-4。同时我们还发现酪蛋白水解物可以明显改变S.lividans、S.albus、S.avermitilis的接合转移效率。【结论】本研究首次发现酪蛋白水解物不光对S.hygroscopicus ATCC29253接合转移有作用,对其它常用的链霉菌如S.lividans、S.albus、S.avermitilis等的接合转移效率都有显著的影响。

微生物转化左旋四氢巴马汀产生左旋紫堇达明高产菌株的紫外诱变选育

紫堇达明为中药元胡中高效、微量活性成分,灰色链霉菌(Streptomyces griseus ATCC 13273)具有转化左旋四氢巴马汀产生左旋紫堇达明的生物转化活性。本研究采用紫外诱变法对原始菌株进行诱变处理,以期获得左旋紫堇达明高产突变菌株。正交试验结果显示:孢子浓度为107个/mL,照射距离为30 cm,照射时间为30 s为最佳诱变条件。筛选得到的突变株UV-056对底物的转化率达到62.58%,左旋紫堇达明转化产率达到33.12%,分别较出发菌株提高了51.00%和67.63%。检测表明,突变株经连续传代后仍可保持较好的遗传稳定性。