锁阳提取物对肝纤维化模型大鼠的改善作用及其机制研究

目的:考察锁阳提取物对肝纤维化模型大鼠的改善作用及其机制。方法:将90只SD大鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组(阳性药物,0.2 mg/kg)和锁阳提取物低、中、高剂量组(50、100、200 mg/kg),每组15只。除正常组外,其余各组大鼠均采用四氯化碳法复制肝纤维化模型。成模后,各给药组大鼠ig相应药物,正常组和模型组大鼠ig生理盐水,每天1次,连续6周。给药结束后,检测大鼠血清肝功能指标[天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、肌酸激酶(CK)]水平;采用苏木精-伊红和Masson法染色后观察大鼠肝脏病理变化;检测血清和肝组织中转化生长因子β1(TGF-β1)水平并计算大鼠肝脏指数。结果:与正常组比较,模型组大鼠肝脏指数,血清中AST、ALT、CK、ALP水平以及血清和肝组织中TGF-β1水平升高(P<0.05);病理观察结果显示,模型组大鼠肝组织发生明显纤维化病变。与模型组比较,除锁阳提取物中剂量组大鼠血清中ALP、CK外,秋水仙碱组和锁阳提取物中、高剂量组其余各指标均显著改善,锁阳提取物低剂量组仅ALT得到明显改善(P<0.05);各给药组大鼠肝纤维化程度减轻。结论:锁阳提取物对大鼠肝纤维化有一定的改善作用,其机制可能与抑制TGF-β1的表达有关。

基于转录组测序探讨锁阳提取物对线虫衰老的影响

目的以秀丽隐杆线虫为模式生物,研究锁阳乙酸乙酯提取物(ECS)对衰老的影响和可能的作用机制。方法先设置空白组和ECS 0.1 mg/mL组、ECS 1 mg/mL组、ECS 5 mg/mL组、ECS 10 mg/mL组进行急性热应激实验初步筛选,然后在初筛的范围附近设置空白组和ECS 0.1 mg/mL组、ECS 0.4 mg/mL组、ECS 0.8 mg/mL组,分别进行急性热应激实验、寿命实验、生殖实验和运动能力实验,观察ECS对线虫的作用,结合转录组测序预测其可能的作用机制。结果急性热应激实验:ECS 1 mg/mL组、ECS 5 mg/mL组、ECS 10 mg/mL组线虫存活时间均明显短于空白组(P均<0.05),而ECS 0.1 mg/mL组、ECS 0.4 mg/mL组、ECS 0.8 mg/mL组线虫存活时间与空白组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。寿命实验:与空白组比较,ECS 0.1 mg/mL组线虫的存活时间无明显变化(P>0.05),ECS 0.4 mg/mL组线虫的存活时间明显延长(P<0.05),ECS 0.8 mg/mL组线虫的存活时间明显缩短(P<0.05)。生殖实验:各组产卵量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。运动能力实验:培养3 d和5 d后,ECS 0.4 mg/mL组线虫的头部摆动速率和身体正弦运动速率均明显高于空白组(P均<0.05)。KEGG分析富集排名前20的Pathway共富集到71个差异基因,包括超氧化物歧化酶(SOD)、硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)、脂肪酶(LIPS)、热休克蛋白(HSP)等基因,涉及长寿调节通路、溶酶体途径、脂肪酸代谢通路、MAPK信号通路等多条代谢通路,参与调控ECS影响线虫寿命和运动能力的过程。结论ECS能够在一定程度上延长秀丽隐杆线虫的寿命,改善其运动能力,其是通过多途径多基因共同作用起效的。

锁阳不同提取物抗氧化活性及对次黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶诱导细胞损伤保护作用的比较研究

目的比较不同锁阳提取物体外抗氧化活性及对次黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶(hypoxanthine/xanthine oxidase,HPX/XO)诱导细胞损伤的保护作用。方法通过建立XO/XTT氧自由基生成体系和XO致尿酸生成反应,以及HPX/XO诱导的细胞氧化损伤模型,分别研究不同锁阳提取物的自由基清除能力,对HPX活性的干预作用,和对氧化损伤细胞的保护作用。结果 100、10、1μg/ml锁阳乙酸乙酯和甲醇提取物均能显著地清除自由基,而各浓度的锁阳二氯甲烷和水提物没有明显的清除自由基能力。锁阳乙酸乙酯和甲醇提取物对细胞氧化损伤模型显示明显的保护作用,可显著提高细胞存活率,但不能明显抑制XO活性。结论锁阳抗氧化有效部位主要富集在乙酸乙酯与甲醇提取相中,具有良好的抗氧化作用,清除氧自由基是其主要机制之一。

锁阳乙酸乙酯提取物改善慢性应激小鼠认知功能障碍的神经保护机制

本实验以去卵巢后慢性应激模型,探究锁阳乙酸乙酯提取物(ECS)改善慢性应激小鼠认知功能障碍的神经保护机制。采用Morris水迷宫检测小鼠空间学习记忆能力,Western Blot检测海马组织突触蛋白中突触囊泡蛋白(synaptophysin,Syn)和突触后致密物(Postsynaptic density protein 95,PSD-95)表达量,通过海马组织形态学改变进一步证明ECS的神经保护作用。Morris水迷宫结果显示雌鼠锁阳乙酸乙酯组穿越平台次数增加(P<0.01)。Western Blot结果显示,ECS可增加Syn(P<0.05)与PSD-95(P<0.05)蛋白表达量。HE染色结果显示ECS可减轻海马神经元损伤,改善海马CA1区锥体细胞形态。结果表明ECS能够增加去势后慢性应激小鼠突触蛋白中Syn与PSD-95的表达量,保护海马神经元,改善慢性应激所致学习记忆障碍。

锁阳乙酸乙酯提取物改善慢性应激认知功能障碍MAPK/ERK1/2通路机制

目的探究锁阳乙酸乙酯提取物(ECS)对去势后慢性应激小鼠认知功能障碍MAPK/ERK1/2信号通路中磷酸化的胞外信号调控激酶1/2(P-Erk1/2)和磷酸化的c AMP反应元件蛋白(P-CREB)表达量的影响。方法将实验动物采用随机数字法分为对照组、模型组、ECS组,除对照组外,模型组和ECS组,采用去势后慢性应激造模,ECS组同步灌胃ECS。在造模8周后采用Morris水迷宫检测小鼠空间学习记忆能力,造模成功时取材海马组织检测Western Blot。结果:Morris水迷宫结果显示,模型组较对照组穿越平台次数减少(P<0.01),ECS组较模型组穿越平台次数增加(P<0.01)。Western Blot结果显示,P-Erk1/2蛋白表达量模型组较对照组显著减少(P<0.01),ECS组较模型组显著增加(P<0.01);P-CREB蛋白表达量模型组较对照组显著减少(P<0.05),ECS组较模型组显著增加(P<0.05)。结论 ECS改善去势后慢性应激小鼠认知功能障碍机制之一可能是通过上调MAPK/ERK1/2信号通路中P-Erk1/2与P-CREB的蛋白表达量。

锁阳通过抑制炎症因子的表达对抗CCL_4导致的小鼠肝纤维化

目的初步探索中药锁阳的粗提取物对抗CCL4诱导的小鼠肝纤维化的效果和可能机制。方法将C57BL/6J小鼠分为正常组、模型组、秋水仙碱组、锁阳低剂量组和锁阳高剂量组,正常组给予生理盐水,其余4个组给予橄榄油和CCL4混合物,按1∶3比例,4mL/kg剂量腹腔注射,2次/周,直到第4周,复制肝纤维化模型,从第5周开始每组给予相应的药物至第6周,分别检测小鼠肝脏指数,血清中ALT、AST指标以及炎症因子TGF-β1、TNF-α、IL-1的表达,Masson染色观察小鼠肝脏病理学变化,最后用Image J软件,分析各组中肝纤维化程度。结果相比正常组,模型组小鼠的肝脏指数增加,说明小鼠肝脏受到严重损伤;相比模型组,用药组小鼠的肝脏指数明显减轻,肝脏血清中AST、ALT的水平以及TGF-β1、TNF-α、IL-1的浓度均比模型组降低(P<0.05);同时,相比锁阳低剂量组,锁阳高剂量组纤维化降低更明显。结论中药锁阳粗提取物通过抑制炎症因子TGF-β1、TNF-α、IL-1的表达减弱了CCL4诱导的小鼠肝纤维化。

锁阳乙酸乙酯提取物对Aβ_(25-35)诱导损伤PC12细胞的影响

目的:探讨锁阳乙酸乙酯提取物对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤的影响。方法:将48只大鼠随机分为空白组、锁阳乙酸乙酯提取物83mg/kg、8. 3mg/kg、0. 83mg/kg剂量组,采血制备空白血清和含药血清;以Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤造模,锁阳乙酸乙酯提取物含药血清处理PC12细胞后,通过MTT法检测细胞活力,Hoechst 33342染色、流式细胞术检测PC12细胞凋亡情况,用相应的试剂盒测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮合酶(NOS)和一氧化氮(NO)的活性及含量。结果:与空白血清组相比,锁阳乙酸乙酯提取物各组10%血清显著提高细胞存活率,使细胞凋亡率明显下降,显著提高了SOD活性,显著降低了MDA、NOS、NO含量。结论:锁阳乙酸乙酯提取物对Aβ_(25-35)致PC12细胞损伤具有保护作用,其保护机制与其增强SOD活性,降低MDA含量,降低NOS活性,减少NO生成,减轻氧化应激对细胞的损伤有关。

锁阳乙酸乙酯提取物改善慢性应激认知功能障碍神经电生理长时程增强表现

目的:研究锁阳乙酸乙酯提取物(ECS)对去势小鼠慢性应激所致学习记忆障碍作用在Morris水迷宫和神经电生理长时程增强(LTP)方面的表现。方法:将小鼠随机分为对照组、模型组、ECS组。模型组与ECS组采用慢性应激方法造模,ECS组小鼠以0.47mg/m L、0.1mg/10g同步灌胃ECS提取物。在造模8周后进行Morris水迷宫实验,造模成功时进行海马组织的神经电生理LTP检测。结果:Morris水迷宫结果显示ECS组穿越平台次数显著增加(P<0.01)。神经电生理LTP结果显示ECS组小鼠的兴奋性突触后场电位斜率百分比显著升高(P<0.01)。结论:ECS在Morris水迷宫和神经电生理LTP两方面均表现出改善去势后慢性应激小鼠认知功能障碍的作用。

锁阳乙酸乙酯部位对去卵巢痴呆大鼠学习记忆功能和海马神经元形态的影响

目的研究锁阳乙酸乙酯部位提取物对去卵巢大鼠行为学和突触形态的影响。方法 SD大鼠40只,随机分为正常组、模型组、阳性药组、锁阳乙酸乙酯部位组(锁阳组)。采用双侧去卵巢造成大鼠老年痴呆模型,手术后1周,阳性药组给予雌二醇,锁阳组给予锁阳乙酸乙酯部位提取物(33 mg/kg)灌胃,给药8周后,连续6 d用Morris水迷宫观察大鼠学习记忆能力的改变。然后灌注取材,采用HE染色、免疫组化生长相关蛋白(GAP-43)和超微透射电镜来观察大鼠海马区神经元形态的变化。结果锁阳组潜伏路程、穿越平台次数较模型组有明显的改善(P<0.01)。HE染色显示,锁阳组海马CA3区锥体细胞形态得到改善,排列整齐、均一、结构清晰。GAP-43免疫组化显示,锁阳组灰度值较模型组显著增高(P<0.01)。透射电镜观察显示,锁阳组海马神经细胞较模型组有变化,神经元细胞核结构清晰,核仁呈圆形居中央,胞质呈空泡。结论锁阳乙酸乙酯部位可以提高去势所致老年痴呆大鼠在Morris水迷宫中的学习记忆功能,并且可以促进大脑海马区GAP-43蛋白的含量,从而促进神经细胞突触的形成。

ECS对去势小鼠学习记忆障碍作用在Morris水迷宫和神经电生理长时程增强方面的研究

目的研究锁阳乙酸乙酯提取物(ECS)在Morris水迷宫和神经电生理长时程增强(LTP)方面对去势小鼠学习记忆障碍的作用。方法选用36只SPF级雌性ICR小鼠,将其随机分为对照组、模型组、ECS组,每组12只,模型组、ECS组经7%水合氯醛0. 06 ml/10 g麻醉后摘除双侧卵巢以制备去势小鼠模型,造模成功后,ECS组给予0. 47 mg/ml ECS提取物0. 1 mg/10 g灌胃,对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃,1次/d,连续给药8周。8周后对各组小鼠进行Morris水迷宫实验及神经电生理实验。分析小鼠穿越原平台次数与兴奋性突触后场电位(fEPSP)斜率百分比的相关性。结果实验第5天,模型组潜伏期较对照组显著延长,ECS组逃避潜伏期较模型组显著缩短,差异有统计学意义(P<0. 05);模型组穿越原平台次数较对照组显著减少,ECS组穿越原平台次数较模型组显著增加,差异有统计学意义(P<0. 05); HFS刺激后,模型组fEPSP斜率百分比较对照组显著下降,ECS组fEPSP斜率百分比较模型组显著升高,差异有统计学意义(P <0. 05); 36只小鼠穿越原平台次数与fEPSP斜率百分比呈相关性(P <0. 05)。结论 ECS在Morris水迷宫和神经电生理LTP方面对去势小鼠突触传递可塑性及学习记忆能力有明显改善,可为临床防治学习记忆障碍提供理论依据。