降低氯化锂-匹罗卡品大鼠癫痫模型死亡率的实验研究

[目的]探讨有效控制氯化锂-匹罗卡品诱发癫痫持续状态,提高癫痫大鼠存活率的最佳条件。[方法]选用SD大鼠30只,腹腔注射氯化锂和匹罗卡品后,诱发大鼠癫痫持续状态1 h后,随机分为A组：只给东莨菪碱;B组：东莨菪碱＋安定;C组：东莨菪碱＋水合氯醛。比较3组大鼠间癫痫发作的持续状态、癫痫大鼠的死亡率、死亡发生的时间。[结果]A组大鼠癫痫发作的持续状态为16-20 h,死亡率为87.5%;B组大鼠在用药后15 min内可控制癫痫发作的持续状态,死亡率为62.5%;C组大鼠在用药后3-10 min可完全控制大鼠的癫痫发作持续状态,大鼠全部存活。[结论]水合氯醛可有效控制氯化锂-匹罗卡品诱发大鼠的癫痫持续状态,提高癫痫大鼠的存活率。

全蝎醇提物与丙戊酸干预氯化锂-匹罗卡品慢性点燃模型大鼠癫痫发作的疗效比较

目的探讨全蝎醇提物(Ethanol Extracts of Scorpion,EES)与丙戊酸(Valproic Acid,VPA)干预氯化锂-匹罗卡品(Lithium Chloride-Pilocarpine,Licl-Pilo)慢性点燃模型大鼠癫痫发作的疗效。方法 186只成年雄性大鼠除6只设为正常对照组外,其余均建立Licl-Pilo慢性点燃大鼠模型,造模成功后分为模型组、VPA干预组、低EES剂量干预组(EESL干预组)、中EES剂量干预组(EESM干预组)和高EES剂量干预组(EESH干预组)各36只。正常对照组、模型组分别灌胃给予等容积的生理盐水,VPA干预组灌胃给予VPA溶液[浓度为120 mg/(kg.d)],EESL干预组、EESM干预组、EESH干预组灌胃给予EES溶液[浓度分别为290 mg/(kg.d)、580 mg/(kg.d)及1160 mg/(kg.d)],观察30天内致痫大鼠慢性癫痫自发性发作(spontaneous seizures,SRS)、发作级别、发作次数,并进行组间比较。结果 Licl-Pilo慢性点燃模型鼠的造模成功率为85.65%,各实验组SRS发生频率5～15次/周。治疗后,EESM干预组、EESH干预组和VPA干预组癫痫大鼠痫性发作级别及SRS发作次数与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);EESL干预组治疗效果不明显,与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论一定剂量的EES能显著降低癫痫大鼠的自发性发作,且与疗效呈明显的量效关系,即剂量越大疗效越好,该结果为EES的抗癫痫作用提供了行为学依据。

锂-匹罗卡品致颞叶癫痫小鼠模型的建立及苔藓纤维出芽的实验研究

目的探讨腹腔注射锂-匹罗卡品建立小鼠颞叶癫痫(EP)模型方法及其行为学改变与苔藓纤维出芽的关系。方法小鼠腹腔注射锂-匹罗卡品建立颞叶EP模型,应用ZnSe金属自显影技术(AMG)检测3d、7d、15d、30d及60d的苔藓纤维出芽情况。结果锂-匹罗卡品注射后,约40%的小鼠呈现癫痫持续状态,并出现慢性自发发作。形态学检查发现海马齿状回分子层苔藓纤维出芽,并且随着时间的延长,苔藓纤维出芽逐渐增多。结论腹腔注射锂-匹罗卡品小鼠模型是一种理想的颞叶EP动物模型,苔藓纤维出芽可作为判断SE模型是否成功的形态学标准。

氯化锂-匹罗卡品癫痫模型研究

氯化锂-匹罗卡品(LI-PILO)点燃大鼠癫痫模型具有同人类癫痫持续状态或颞叶癫痫相似的特征,是理想的颞叶癫痫模型。本文重点对模型的制作、病理改变机制及致病机制等进行综述。

锂-匹罗卡品致痫模型海马星形胶质细胞缝隙连接研究

目的应用锂-匹罗卡品致痫动物模型研究急性癫痫持续状态(status epilepticusSE)及继发性慢性自发性发作海马星形胶质细胞的缝隙连接的改变。方法 60只SD大鼠分为实验组与对照组,应用锂-匹罗卡品腹腔注射诱发大鼠急性SE。实验组又分为8个亚组,分别为出现急性SE后2、12、24h,3、7、15、30、60d组,分属急性期(急性SE24h内)、静止期(急性SE后3～15d)和慢性期(急性SE后30～60d),应用尼氏染色观察各期大鼠海马病理改变,用免疫组化检测胶质原纤维酸性蛋白(GFAP),缝隙连接蛋白43(CX43)表达以了解各期大鼠海马各区星形胶质细胞反应及其缝隙连接的改变。结果锂-匹罗卡品腹腔注射后,诱发大鼠急性SE持续6～30h后进入静止期,存活大鼠30～45d后出现慢性自发性发作。尼氏染色显示致痫后12～24h可见明显海马神经元损害,7d后海马各区开始出现反应性胶质细胞增多,以后持续性加重,到观察终点60天最明显。致痫后7dGFAP免疫阳性反应开始增强,30d时较前更明显,60d最明显。CX43在对照组大鼠海马显示散在分布免疫阳性细胞;致痫后2h,CA1区与CA3区的分子层与起层出现散在曲张静脉状阳性突起;12h突起增多增粗,24h最明显(P<0.05),CA1、CA3区比齿状回明显(P<0.05),进入静止期3～7d逐渐下降,15d与对照组无区别,慢性期30～60d未见有明显阳性细胞及突起。结论急性SE星形胶质细胞的缝隙连接增强,有助于维持胞外微环境的稳定;慢性颞叶癫痫动物模型海马星形胶质细胞缝隙连接缺陷,可能是引起慢性自发性发作的因素之一。

锂-匹罗卡品癫痫模型中大鼠苔藓纤维发芽机制研究

目的:通过观察锂-匹罗卡品癫痫模型中大鼠实验性癫痫发作时的行为、脑电图及病理生理变化,探讨苔藓纤维发芽(MFS)在癫痫中的发病机制。方法:利用锂-匹罗卡品(Li-PC)制作大鼠急性癫痫持续状态(SE)的癫痫模型,造模后7 d、14 d、28 d,进行苔藓纤维发芽评分。结果:模型组大鼠2周时可见MFS穿过齿状回内分子层颗粒细胞层,进入内分子层及CA3区锥体细胞始层黑色颗粒形成,4周时形成连续密集颗粒带,MFS评分显著高于生理盐水对照组(P<0.05)。结论:急性期SE神经元损伤致苔藓纤维发芽,可能是慢性颞叶癫痫的病理基础。

锂-匹罗卡品点燃大大鼠急性癫痫模型

采用锂一匹罗卡品化学点燃建立大鼠急性癫痫模型，雄性Wistar大鼠55只，随机分为生理盐水对照组、地西泮组和致痫组。生理盐水对照组大鼠均为0级发作，地西泮组中8只大鼠为0级发作，2只出现Ⅰ级发作；致痫组均达到Ⅲ级以上发作，其中Ⅲ级2只(5.71％)，Ⅳ级3只(8．57％)，Ⅴ级30只(85．71％)。致痫组大鼠在匹罗卡品腹腔注射后10～90min内全部出现急性痫性发作。锂一匹罗卡品点燃大鼠癫痫模型具有制作方便、致痫成功率高和动物死亡率低等特点，具有同人类癫痫持续状态和颞叶癫痫相似的行为和脑电图改变。本文结合文献对该模型的相关问题进行了讨论。

对锂-匹罗卡品致颞叶癫痫模型大鼠学习记忆功能影响的研究

目的:探讨锂-匹罗卡品致颞叶癫痫模型大鼠自发性癫痫发作后学习记忆功能障碍的情况。方法:建立锂-匹罗卡品颞叶癫痫模型,应用Morris水迷宫和八臂迷宫实验评价颞叶癫痫模型大鼠自发性癫痫发作后的学习记忆功能障碍。结果:颞叶癫痫模型大鼠自发性癫痫发作后,Morris水迷宫和八臂迷宫实验均出现不同程度的障碍,障碍程度随着自发性癫痫发作时间延长而加重。结论:锂-匹罗卡品诱导颞叶癫痫长期自发性癫痫发作后会出现明显的学习记忆功能障碍。

PTEN在氯化锂-匹罗卡品癫痫模型中的表达研究

目的:检测第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)在癫痫模型大鼠中的表达情况,初步探讨其在癫痫发病中的作用。方法:成年雄性SD大鼠腹腔注射氯化锂-匹罗卡品(lithium-pilocarpine)构建癫痫模型,分别在癫痫发作后不同时间点(1 d、3 d、7 d、14 d、30 d)提取海马组织,利用荧光定量PCR和western blot分别测定PTEN mRNA和蛋白质的表达。结果:荧光定量PCR和western blot显示,PTEN mRNA和蛋白质在癫痫发作后1 d的表达显著降低(P<0.05),到30 d时仍维持在较低的水平(P<0.05)。结论:PTEN在氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠海马组织中表达的降低,提示PTEN可能参与了癫痫的发生发展过程。

钠氢交换体1在氯化锂-匹罗卡品点燃癫痫大鼠模型海马组织内的表达

目的 检测钠氢交换体1(NHE1)在氯化锂-匹罗卡品点燃癫痫大鼠模型海马组织中的表达。方法 选取雄性SD大鼠90只,其中45只采用腹腔注射氯化锂-匹罗卡品构建癫痫模型作为模型组,45只采用腹腔注射生理盐水组作为对照组;取模型组和对照组大鼠各36只,采用蛋白印迹(Western blot)法检测造模后第1、3、7、14、30及60天时2组大鼠海马组织匀浆中NHE1蛋白的定量表达;取模型组和对照组大鼠各3只,采用免疫组织化学分析造模后第14天时2组大鼠海马组织NHE1的蛋白表达;取模型组和对照组大鼠各6只,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测造模后第14天2组大鼠海马组织NHE1 m RNA的的表达特点。结果造模后第1、3、7、14、30及60天时,模型组大鼠海马组织匀浆中NHE1蛋白表达较对照组增高(P<0.05),且模型组大鼠海马组织NHE1蛋白表达从第1天开始增高、第14天时达到高峰、第30天和第60天逐渐下降(P<0.05);造模后第14天时,模型组大鼠海马组织不同亚区NHE1阳性表达较对照组相应区域增强,且NHE1m RNA水平也高于对照组(P<0.05)。结论 氯化锂-匹罗卡品点燃模型癫痫大鼠海马组织中NHE1表达随时间呈动态变化,且在第14天表达最高,提示NHE1可能与癫痫的发生发展过程密切相关。

熄风胶囊对氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠海马损伤影响的研究

[目的]探讨熄风胶囊对氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠海马损伤的影响。[方法]应用氯化锂-匹罗卡品复制难治性癫痫大鼠模型。观察实验大鼠的反复自发性发作(SRS)情况、海马形态学改变和苔藓纤维出芽(MFS)。[结果]1)治疗组癫痫大鼠SRS的发作次数均明显低于模型组(P<0.01)。2)光、电镜结果显示:各治疗组中联合治疗组海马结构损伤最轻。3)Timm染色结果显示:联合治疗组对海马CA3区及齿状回MFS有较强的干预作用,优于单药治疗组。这种干预作用的强弱与熄风胶囊的剂量呈现一定正相关关系。[结论]熄风胶囊单药及与卡马西平(CBZ)联合用药能够有效的控制氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠的SRS,降低海马神经元损伤的程度,抑制苔藓纤维异常出芽。

氯化锂-匹罗卡品诱发大鼠癫痫持续状态后脑内c-fos蛋白表达的动态观察

目的在氯化锂-匹罗卡品诱发癫痫持续状态模型中观察c-fos蛋白表达的时程变化。方法采用氯化锂-匹罗卡品诱发癫痫持续状态大鼠模型,观察大鼠的行为改变,并用免疫组化方法观察癫痫持续状态后不同时间点脑内c-fos蛋白表达的变化。结果癫痫持续状态后6h,1d时脑内c-fos蛋白表达最高,3d时表达次之,7d时极少数表达并接近对照组表达水平。结论癫痫持续状态后脑内c-fos蛋白表达持续较长时间;在此时期应给予干预措施,以减低脑内神经元损伤可能。

银杏叶提取物对锂-匹罗卡品癫痫大鼠海马结构c-Fos蛋白表达的影响

目的:研究银杏叶提取物(GBE)对癫痫的干预作用及其对癫痫大鼠海马结构c-Fos蛋白表达的影响。方 法:采用锂-匹罗卡品癫痫(LPS)大鼠模型。观察动物行为改变,应用免疫组化方法观察海马结构c-Fos蛋白的表达。结 果:GBE对该模型癫痫发作的预防有效率和治疗有效率分别为94．44％和35．48％。与LPS组相比,GBE预处理组的4 级以上发作率和发作分级明显下降;站立发作潜伏期延长。注射匹罗卡品后3小时,生理盐水对照组、GBE单独给药组 和GBE预处理组大鼠海马结构c-Fos蛋白表达阴性。LPS组和GBE急性给药组大鼠海马结构c-Fos蛋白表达阳性。 结论:GBE预处理和急性给药两种给药模式均有一定的抗LPS作用,前者明显优于后者。GBE抗LPS作用的机制可能 与GBE能抑制海马结构c-Fos蛋白表达有关。

石菖蒲挥发油对锂-匹罗卡品诱发癫痫大鼠c-fos表达的影响

目的探讨石菖蒲挥发油对锂-匹罗卡品(毛果芸香碱)致痫大鼠癫痫发作时间及其脑内c-fos表达的影响。方法选择Wistar大鼠96只,随机分为六组,正常对照组(6只),模型组(18只),丙戊酸钠预处理组(18只),石菖蒲预处理低、中、高剂量组(各18只)。观察石菖蒲挥发油对锂-匹罗卡品致痫大鼠发作时间的影响。以锂-匹罗卡品诱导制作癫痫动物模型,应用免疫组化方法观察石菖蒲挥发油对其脑内c-fos表达的影响。结果石菖蒲低、中、高剂量组大鼠首次抽搐发作时间(SB)和第1次达到Ⅴ级发作时间(RFSⅤS)较模型组明显延长,差异均有统计学意义(P<0.05),锂-匹罗卡品致痫大鼠脑内c-fos表达水平明显增强,丙戊酸钠预处理组、石菖蒲预处理高剂量组大鼠海马部位c-fos阳性细胞较模型组及石菖蒲预处理低、中剂量组明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论该研究方法快速、简便、准确、重现性好,石菖蒲挥发油能缓解锂-匹罗卡品所致的癫痫发作,其作用机制可能与降低脑内c-fos基因表达水平有关。

锂-匹罗卡品癫癎模型的建立及脑电图特征

目的:探讨锂-匹罗卡品癫癎模型发作过程的脑电图(EEG)变化。方法:制作大鼠锂-匹罗卡品癫癎模型于造模前30min清醒状态至造模时连续EEG监测12h及造模后第1、3、7、14、28天每天监测EEG1h,观察EEG变化并总结分析。结果:EEG改变与表现症状衍变过程之间有阶段性、规律性性放电的特征。结论:EEG的特征性改变是锂-匹罗卡品急慢性癫癎模型点燃成功的判断标准之一。

氯化锂-匹罗卡品癫痫模型中海马神经元钾通道Kv1.1的表达变化

目的:研究A型钾通道亚型Kv1.1在癫痫大鼠海马神经元中的蛋白表达和电生理功能变化,初步探讨Kv1.1在癫痫发生中的作用和意义。方法:2019年1-12月选取24只成年雄性SD大鼠,根据随机数字表法分为对照组和模型组,每组12只。模型组通过向腹腔注射氯化锂-匹罗卡品制备癫痫模型,对照组采用0.9%氯化钠溶液代替处理。每组6只进行免疫印记和电生理检测。利用Western blot方法检测并比较两组海马区Kv1.1的蛋白表达。利用全细胞膜片钳技术记录并观察两组海马区锥体神经元细胞膜上总的外向钾离子电流和Kv1.1介导的钾电流变化。结果:模型组海马区Kv1.1的蛋白表达量低于对照组(P<0.05)。全细胞膜片钳结果显示:与对照组相比,癫痫模型组海马区锥体神经元总的外向钾电流峰值曲线右移,钾电流峰值从膜电压-40 mV开始明显下降(P<0.05)。与对照组相比,模型组海马区锥体神经元Kv1.1介导的钾电流峰值曲线右移,峰值从膜电压-30 mV开始明显下降(P<0.05)。结论:癫痫模型中海马区Kv1.1的蛋白表达降低和其介导的钾电流的下降,提示其表达变化可能与癫痫的发生相关。

cox-2抑制剂塞来昔布对氯化锂-匹罗卡品诱发大鼠癫痫持续状态后脑内cox-2、Glu表达的影响

目的观察环氧化酶-2(cox-2)抑制剂塞来昔布对氯化锂-匹罗卡品诱发大鼠癫痫持续状态后脑内cox-2、谷氨酸(Glu)表达的影响,探讨其抗癫痫的作用机制。方法采用免疫组化法对氯化锂-匹罗卡品诱发癫痫大鼠模型脑内cox-2和Glu的表达进行测定,并研究塞来昔布对癫痫影响及可能的作用机制。结果癫痫模型组大脑皮质及海马区cox-2和大脑皮质Glu免疫反应较空白对照组明显增多(P<0.05),给药组免疫反应较模型组明显减少(P<0.05)。结论癫痫持续状态后脑内cox-2、Glu表达明显增加;塞来昔布能够有效减轻脑内cox-2、Glu的表达,塞来昔布可能具有减轻癫痫发作和保护神经元的作用。

氯化锂-匹罗卡品诱导癫痫大鼠海马组织差异表达circRNA的筛选及功能分析

目的:探究氯化锂-匹罗卡品诱导癫痫大鼠海马组织差异表达共价闭合、单链环状RNA(circRNA)及功能分析。方法:通过构建氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠模型,取癫痫大鼠及对照大鼠海马组织通过Illumina高通量测序平台进行转录组测序,并通过EdgeR包对circRNA进行差异分析、通过R语言进行GO及KEGG信号通路富集分析,通过Targetscan与miRanda软件进行circRNA与miRNA互作分析寻找circRNA核心调控靶标。结果:对照组及癫痫组大鼠海马的circRNA进行差异分析获得的262个差异表达circRNA,信号通路富集分析发现与胞蛋白修饰过程、蛋白质变性过程、树突形态调控、神经元分化调节、离子跨膜转运的调节等生物过程相关。并进一步确定了可能与circRNA存在互作的核心调控miRNA,包括miR-322-5p、miR-322-3p、miR-323-5p、miR-323-3p、miR-301a-5p、miR-301a-3p、miR-324-5p、miR-324-3p等。结论:本研究筛选了氯化锂-匹罗卡品点燃癫痫大鼠与正常大鼠脑组织差异circRNA,系统地分析了其可能的作用功能机制,为癫痫诊断或治疗寻找到可靠的生物标志物。

电针穴位刺激对锂-匹罗卡品诱导性致痫大鼠认知功能的影响

目的观察电针刺激百会穴对锂-匹罗卡品诱导致痫大鼠认知能力的影响,为进一步揭示穴位刺激治疗癫痫的抑痫机制提供理论依据。方法锂-匹罗卡品诱导的致痫大鼠随机分为穴位刺激(电针刺激百会穴)组、非穴位刺激(电针刺激与百会穴相邻的非穴位处)组和癫痫对照组,另选取未致痫大鼠作为正常对照组。分别采用Morris水迷宫测试及穿梭箱避暗实验的方法测定电针刺激百会穴对锂-匹罗卡品诱导致痫大鼠学习记忆变化的影响。结果与对照组相比,电针刺激百会穴可明显缩短致痫大鼠在Morris水迷宫寻找平台的时间(P<0.01),避暗实验潜伏期显著增加,出错次数显著减少(P<0.01)。结论电针刺激百会穴对锂-匹罗卡品诱导致痫大鼠的认知功能具有明显的改善作用。

氯化锂-匹罗卡品致痫幼鼠成年后少突胶质细胞转录因子Olig2在脑白质区的表达

目的探讨氯化锂-匹罗卡品(lithium-pilocarpine,LI-PILO)点燃幼鼠癫痫持续状态(status epilepticus,SE),成年后发展为自发反复性癫痫发作(spontaneous recurrent epileptic seizure,SRS)的大鼠脑内转录因子Olig2的表达。方法采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射诱导幼鼠SE模型,应用多道生理信号采集处理系统检测大鼠脑电图(electroencephalogram,EEG)痫样活动波和Nissl染色方法观察神经元鉴定,证实SRS模型大鼠诱导成功;应用免疫组织化学染色技术观察少突胶质细胞(oligodendrocyte,OL)转录因子Olig2变化。结果 SRS模型组脑电图与正常对照组相比,可见频发尖波、棘-慢、尖-慢综合波;海马CA1、CA3和齿状回区Nissl染色显示神经元数目减少,部分细胞变性和坏死。SRS模型组在胼胝体与扣带回区域内Olig2的免疫组织化学染色细胞数量明显减少,与正常对照组相比有显著差异。结论氯化锂-匹罗卡品致痫幼鼠,成年后仍伴有慢性自发反复性癫痫发作的脑内少突胶质细胞转录因子Olig2的表达明显降低。