锌带蛋白基因ZNRD1高表达胃癌细胞模型的建立

为建立高表达ZNRD1胃癌细胞模型 ,通过分子克隆技术将ZNRD1基因全长cDNA片段克隆入真核表达载体pcDNA3 1+的多克隆位点之间 ,对重组质粒进行酶切鉴定 ,经显微注射将重组质粒导入人胃癌细胞SGC790 1,G4 18筛选后应用Northernblot检测ZNRD1基因的表达。结果经酶切鉴定证实正确地构建了真核表达质粒 ,转染SGC790 1细胞后获得有效表达。表明已成功地构建了ZN RD1基因真核表达载体 ,并经显微注射法建立了高表达锌带蛋白基因ZNRD1的胃癌细胞模型 ,为深入研究ZNRD1的作用和机制奠定了基础。

锌带蛋白(ZNRD1)小干扰RNA对HL-60/VCR细胞耐药性逆转的研究

为探讨以锌带蛋白(ZNRD1)基因作为靶分子进行白血病多药耐药基因治疗的可行性,以Western blot检测ZNRD1在白血病细胞中的表达;构建ZNRD1基因的小干扰RNA载体并将其转导入HL-60/VCR细胞,G418筛选稳定转染细胞株;MTT法检测细胞转染前后生长速度和药物敏感性的变化;western blot检测细胞转染前后凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和耐药相关蛋白P-gp,MRP的表达变化。结果表明,ZNRD1在HL-60/ VCR细胞中的表达明显高于HL-60细胞;转染后的细胞对长春新碱和阿霉素的敏感性增强,且低表达P-gp 和Bcl-2。结论:该小干扰RNA真核表达载体能在一定程度上逆转白血病细胞的耐药性。

一个新的家蚕转录相关锌带蛋白基因的克隆及序列分析

锌带蛋白(zinc ribbon protein )是锌指类蛋白的一种,它的Cys4 Zn(2 +)结合位点由3个β2片层折叠而成,而不是α螺旋结构。锌带结构与锌指结构同为转录因子结合核酸的结构域,锌带蛋白作为转录相关因子在调节基因表达活性等方面具有重要作用。在对家蚕Bombyx mori蛹cDNA文库测序中,发现一个新的编码家蚕锌带蛋白基因的EST序列(GenBank登录号DY230964) ,以此序列为信息探针检索家蚕EST数据库,通过同源筛选,获得一个新的家蚕锌带蛋白基因cDNA全序列并经RT-PCR检测和克隆、测序验证,结果表明与电子克隆序列完全一致。我们将其命名为BmZNRD1(Zinc Ribbon Domain Containing 1)(GenBank登录号DQ432055)。该基因全长为675 bp,由363 bp的开放阅读框序列(ORF)、10 bp的5′端非翻译区序列(5′UTR)和302 bp的3′端非编码区序列(3′UTR)组成,其编码的120个氨基酸序列与其他真核生物间具有较高的同源性(达60 %左右) ,预测分子量为13·54 kD,等电点为6·8。BmZNRD1编码的氨基酸序列是一种锌带蛋白,推测有2个功能结构域,分别是位于N-端的Cx2Cx14Cx2C和C-端的Cx2Cx24Cx2C,其中C-端保守氨基酸序列Cx2Cx6Yx3QxRSADEx2TxFx2Cx2C在生物进化中保守性很高,从酵母、果蝇、线虫到两栖类、哺乳类都有发现该结构域的存在,与酵母RNA聚合酶A亚单位9和转录相关蛋白有很高的相似性,推测其具有相同的功能。将BmZNRD1基因cDNA序列与家蚕基因组序列进行比对,结果表明该基因具有3个外显子,2个内含子,外显子/内含子边界符合经典的GT-AG规则。

ZNRD1在肝癌中的表达及对HepG2细胞增殖的影响

[目的]检测ZNRD1基因在肝癌中的表达并探讨其对HepG2细胞增殖的影响。[方法]Westernblot技术检测ZNRD1在7例肝癌组织和相应癌旁组织中的表达;脂质体介导法将ZNRD1的真核表达载体转染肝癌细胞系HepG2,G418筛选后应用Westernblot进行鉴定;MTT法检测细胞转染前后生长速度的变化。[结果]ZNRD1基因在肝癌组织中的表达显著低于癌旁组织;成功建立了ZNRD1高表达的肝癌细胞模型;转染后的肝癌细胞生长速度明显下降。[结论]ZNRD1基因可能参与肝癌的发生,对肝癌细胞的生长可能起重要调控作用,具备一定的基因治疗应用前景。

脑梗死医院感染危险因素及与ZNRD1基因多态性的关联

目的探究脑梗死医院感染危险因素及与锌带蛋白基因1(ZNRD1)基因多态性的关联.方法选取2022年3月-2023年5月武汉市汉口医院收治的303例脑梗死患者为研究对象,将发生医院感染及未发生医院感染患者分别纳入感染组52例和非感染组251例.统计脑梗死医院感染现况,通过单因素及多因素分析法分析脑梗死医院感染危险因素.采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)检测两组患者ZNRD1基因多态性.结果303例脑梗死患者医院感染发生52例,医院感染发生率为17.16%;多因素Logistic回归分析结果显示,有糖尿病史、入院时美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)评分>3分、有肺部疾病史、有侵入性操作、住院天数长是脑梗死医院感染危险因素(P<0.05).与非感染组相比,感染组ZNRD1 rs16896970位点GG基因型及G等位基因频率升高,AA基因型及A等位基因频率降低(P<0.05).结论脑梗死医院感染发生率高,脑梗死患者医院感染与糖尿病、肺部疾病史、入院时NIHSS评分、侵入性操作及住院天数密切相关,临床可据此予以早期针对性防治而降低脑梗死患者医院感染的发生风险;ZNRD1基因多态性可能参与脑梗死患者医院感染病情进展.

脑梗死患者感染与CD_(4)^(+)T细胞及ZNRD1基因多态性分析

目的探讨脑梗死患者感染风险与CD4^(+)T细胞及ZNRD1基因多态性的相关性。方法选取2015年1月-2019年12月南阳医学高等专科学校第一附属医院神经内科收治的200例脑梗死患者为研究对象。依据是否感染分为感染组(86例)和非感染组(114例)。采用流式细胞仪检测CD4^(+)T细胞水平,应用PCR及限制性内切酶酶切技术检测ZNRD1基因多态性,并分析脑梗死患者感染风险与CD4^(+)T细胞及ZNRD1基因多态性的相关性。结果感染组患者性别、年龄、BMI等基线资料与非感染组比较差异无统计学意义;感染组患者CD4^(+)T细胞水平低于非感染组(P<0.05);感染组ZNRD1基因rs 16896970位点基因型为AA的分布频率和等位基因为A的分布频率均高于非感染组(P<0.05);ZNRD1基因rs 3869068、rs 1048412位点,显性模型及隐性模型均未发现与脑梗死感染发病风险相关,而rs 16896970位点显性模型与脑梗死感染发病风险相关(P<0.05)。结论ZNRD1 rs 16896970位点突变纯合子AA及等位基因A和CD4^(+)T细胞水平与脑梗死后感染发生密切相关,有望为脑梗死后感染的诊断或预防提供重要参考信息。

调控甜瓜败育基因AMS转录因子的筛选

作物雄性不育在农业生产上有巨大的应用价值,雄性不育材料能够减少人力物力投入,降低杂交育种成本。AMS (ABORTED MICROSPORES)是调控绒毡层后期的重要转录因子,在绒毡层发育过程中,任何一阶段受阻都会引起植株的雄性不育。为探究甜瓜雄性不育分子机制,本研究通过克隆AMS基因启动子,分析其启动子顺式作用元件,以AMS启动子序列作为核心序列构建诱饵载体,转化酵母菌株。通过构建甜瓜酵母单杂交cDNA文库,共转化诱饵菌株筛选得到15个阳性克隆,其中带有锌带蛋白基序的基因在所有阳性克隆中表现强阳性信号,确定该基因为AMS上游调控基因,本研究结果为研究甜瓜雄性不育产生的机理提供新的依据。