肝细胞肝癌患者miR-495、miR-96表达水平及其与新型转录抑制因子锌指和同源框2的相关性

目的研究舟山海岛地区肝细胞肝癌(HCC)组织与相应癌旁肝组织新型转录抑制因子锌指和同源框2(ZHX2)、miR-495、miR-96的表达差异及其与临床病理特征的关系。方法收集17例原发性肝癌患者手术切除肿瘤组织及相应癌旁肝组织,逆转录实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ZHX2和miR-495、miR-96表达,分析其与临床病理特征的关系。结果 miR-495、miR-96和ZHX2 mRNA相对表达量(RQ)值≥2的比例分别为58.8%(10/17)、52.9%(9/17)、17.6%(3/17)。Spearman相关性检验显示HCC患者ZHX2 mRNA表达与miR-495、miR-96均呈负相关,(r=-0.553 3,r=-0.491 0,P<0.05)。结论 miR-495、miR-96可能调控ZHX2参与肝细胞肝癌的发生发展。

肝细胞癌中ZHX2基因启动子甲基化增强AFP的表达

目的探讨肝细胞癌中锌指和同源框2(ZHX2)基因启动子甲基化表达与血清AFP水平的关系,分析AFP基因的表达调控机制。方法以0.5、1.0及5.0μmol/L甲基化抑制剂5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-Dc)培养人肝癌细胞株HepG2,采用RT-PCR及Western blot法检测用药前后ZHX2及AFP基因的mRNA和蛋白表达差异。运用甲基化特异性PCR检测肝细胞癌组织38例中ZHX2基因启动子表达情况,分析其与血清AFP水平的关系。结果 HepG2可见少量ZHX2 mRNA扩增,未检测到ZHX2蛋白表达,而AFP却高表达;应用终浓度为1.0μmol/L和5.0μmol/L的5-Aza-Dc处理肝癌细胞6 d,ZHX2表达明显增加,而AFP却表达下调。血清AFP高于25 ng/mL肝细胞癌组织中ZHX2启动子甲基化51.6%,明显高于血清AFP小于25 ng/mL组(P<0.05)。结论 ZHX2基因启动子甲基化与AFP基因的表达有关。

结直肠癌组织中ZHX2、p53、survivin的表达变化

目的观察结直肠癌组织中ZHX2、p53、survivin的表达变化。方法用免疫组化Supervision二步法法检测73例结直肠癌组织(观察组)及其相对应的癌旁正常组织(对照组)中的ZHX2、p53和survivin蛋白,并分析ZHX2表达变化与p53、survivin蛋白表达变化的相关性。结果观察组ZHX2、p53和survivin蛋白的阳性率分别是82.2%(60/73)、72.6%(53/73)、52.1%(38/73),对照组分别是94.5%(69/73)、38.4%(28/73)、20.5%(15/73)。与对照组相比,观察组ZHX2阳性表达率明显降低(P<0.05);结直肠癌组织中ZHX2蛋白表达与p53、survivin表达无显著相关(P均>0.05)。结论结直肠癌组织中中ZHX2表达降低,其与p53、survivin可能是通过各自不同的通路影响结直肠癌的发生。

ZHX2在调控背根神经节m阿片受体表达致神经病理性痛中的作用

目的探讨背根神经节(DRG)转录因子锌指和同源框蛋白2(ZHX2)在调控外周神经损伤m阿片受体(MOR)表达致痛觉过敏的作用,为临床治疗神经病理性疼痛(NP)提供实验理论依据。方法取48只8周龄雄性C57BL6J小鼠,按随机数字表法分为4组:DRG内分别注射无义阴性对照序列(siNC)、ZHX2 siRNA的坐骨神经慢性缩窄性损伤模型(CCI组)和siNC、ZHX2siRNA的假手术组,每组12只。注射药物后7 d收集DRG组织,RT-qPCR和Western blot分别检测小鼠DRG ZHX2和MOR转录和翻译的表达及机械痛阈(PWF)改变。取6只21 d龄SPF级健康成年雄性C57BL6J小鼠,提取上述小鼠DRG组织行原代细胞培养,分为2组(每组3个重复):转染siNC和ZHX2 siRNA组。转染后48 h,收集细胞分别检测ZHX2和MOR转录和翻译的表达。结果与注射siNC和siRNA的假手术组比较,注射对照的siNC CCI组DRG ZHX2 mRNA和蛋白质表达均增加,而MOR mRNA和蛋白质表达均下调,差异均有统计学意义(P<0.05)。而与注射siNC的CCI组比较,注射siRNA的CCI组小鼠DRG ZHX2 mRNA和蛋白质表达下调,同时增加MOR mRNA和蛋白质表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。在痛行为上,与注射siNC的CCI组比较,注射siRNA的CCI组小鼠患侧PWF降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与转染siNC组比较,转染ZHX2 siRNA组ZHX2的mRNA和蛋白质表达降低同时促进MOR转录和翻译表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论敲减外周神经损伤引起的DRG ZHX2高表达,逆转MOR表达下调,从而缓解神经损伤引起的痛觉过敏行为。

AFP、GPC3、ZHX2及ZBTB20基因在小鼠肝脏再生过程中的表达及其意义

目的探讨小鼠肝脏再生过程中甲胎蛋白(AFP)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖￣3(GPC3)、锌指和同源框2(ZHX2)、锌指蛋白ZBTB20基因的表达及其意义。方法 30只C57/BL6小鼠,按随机数字表法分成肝脏再生模型组(肝再生组)和肝微量切除组(肝微切组),各15只。肝再生组切除肝组织约占肝脏质量的70%;肝微切组切除肝组织约占肝脏质量的5%。分别取两组小鼠肝切除时(0 h)及切除术后2、4、24、48及72 h的肝脏组织,应用实时荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR),检测不同时间点甲胎蛋白(AFP)信使核糖核酸(mRNA)表达;同时应用RQ-PCR法检测24、48及72 h的肝脏组织GPC3、ZHX2、ZBTB20 mRNA表达。采用t检验比较各组AFP、GPC3、ZHX2、ZBTB20 mRNA表达变化。结果肝再生组AFP mRNA术后2、4、24、48及72 h分别为0 h正常肝组织基因表达的(70±20)%、(80±20)%、(90±10)%、(240±40)%、(870±120)%。72 h的AFP基因表达变化与24、48 h相比较,差异均有统计学意义(t=11.2、8.6,P=0.001、0.001),术后24 h AFP表达开始上升;术后24、48、72 h的GPC3mRNA分别为0 h正常肝组织基因表达的(50±10)%、(120±20)%、(190±50)%。72 h的GPC3基因表达变化与24 h相比较,差异有统计学意义(t=4.8,P=0.01),术后48 h GPC3表达开始上升;ZHX2、ZBTB20mRNA在术后24、48 h分别为0 h正常肝组织基因表达的(50±10)%,(60±10)%和(70±20)%,(50±10)%。72 h的ZHX2升高(120±30)%,与24、48 h相比,差异有统计学意义(t=3.8、3.3,P=0.04、0.04)。72 h的ZBTB20升高(140±30)%,与24、48 h相比,差异有统计学意义(t=3.4、4.9,P=0.04、0.01)。结论小鼠肝大部切除术后肝脏再生启动,AFP、GPC3基因可能在肝脏再生中参与了细胞增殖的主动调控,转录抑制因子ZHX2、ZBTB20 mRNA在肝脏再生中表达下调,对AFP、GPC3启动子的转录抑制作用下降,从而促进肝组织再生,对肝脏再生具有一定的意义。

背根神经节ZHX2在外周神经损伤痛觉过敏中的作用研究

目的探讨背根神经节（DRG）锌指和同源框蛋白家族（ZHX）在外周神经损伤痛觉过敏中的作用，为神经病理性疼痛（NP）的分子生物学机制提供新的思路。方法（1）24只8周龄雄性C57BL6小鼠，按随机数字表法分为坐骨神经慢性缩窄性损伤模型（CCI）组、假手术组，每组12只，造模前1d、造模后7d检测小鼠机械缩爪反应频率（PwF）和热缩爪反应潜伏期（PWL）的变化。造模后7d采用反转录实时定量PCR（RT-qPCR）检测小鼠DRGZHX1、ZHX2、ZHX3mRNA的表达；采用Westernblotting检测小鼠DRGZHX2蛋白的表达。（2）36只8周龄雄性C57BL6小鼠，按随机数字表法分为DRG内注射等剂量溶剂、无义阴性对照序列（siNC）、ZHX2小f扰RNA（siRNA）的CCI组和DRG内注射等剂量溶剂、siNC、ZHX2siRNA的假手术组．每组6只。注射药物前1d、注射药物后7d观察6组小鼠机械缩爪反应频率（PWF）和热缩爪反应潜伏期（PWL）的变化：RT-qPCR检测小鼠DRGZHX2mRNA的表达。结果（1）造模后7d，与假手术组患侧比较，CCI组小鼠患侧后爪PWF明显增加、PWL明显缩短，差异均有统计学意义（P〈0．05）：与假手术组比较，CCI组小鼠DRGZHX2mRNA的表达增加1．71倍，差异有统计学意义（P〈0．05）；与假手术组患侧比较，CCI组小鼠患侧DRGZHX2蛋白的表达增加2．15倍，差异有统计学意义（P〈0．05）；（2）与注射溶剂、siNC、siRNA的假手术组比较，注射溶剂、sinC的CCI组小鼠患侧PWF增加、PWL降低、DRGZHX2mRNA的表达增加，差异均有统计学意义（P〈0．05）。与注射溶剂、siNC的CCI组比较，注射siRNA的CCI组小鼠患侧PWF降低、PWL增加、DRGZHX2mRNA的表达降低，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论外周神经损伤上调受损DRG内ZHX2的表达，抑制ZHX2高表达可缓解神经损伤引起的痛觉过敏行为。