锌指转录因子snai1高表达质粒构建和稳定株的筛选

背景:研究表明Snai1和E-钙黏素在肿瘤组织中有负向表达关系,且与Snai1与CDH1启动子区box盒结合,抑制CDH1基因转录。目的:构建针对snai1的高表达载体,建立稳定转染的细胞株。方法:根据GenBank中snai1的基因序列人工合成snai1全序列,将合成好的序列装入Pmd-18T载体并转化感受态细胞DH5α,进行阳性克隆筛选。测序验证重组克隆中基因序列正确后,用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切Pmd-18T/snai1质粒,将所得的snai1全基因片段转入pcDNA3.1(+)空质粒,构建pcDNA(+)/snai1真核表达质粒,同时构建阴性对照质粒,并分别对结肠腺癌细胞HT-29进行转染,最后利用G418进行稳定表达株的筛选,并采用RT-PCR和Western blot鉴定宿主细胞内snai1基因的表达情况。结果与结论:成功构建了真核表达质粒pcDNA(+)/snai1,顺利转染结肠癌细胞HT-29后于600mg/LG418浓度时筛选21d得到snai1基因稳定表达株,构建的snai1基因正义表达质粒pCDNA3.1(+)/snai1转染宿主细胞后可促进snai1基因的表达。

急性髓细胞白血病模型小鼠B细胞易位基因1和Ikaros家族锌指转录因子1表达水平及相关性分析

目的:探讨急性髓细胞白血病(AML)模型小鼠B细胞易位基因1(BTG1)和Ikaros家族锌指转录因子1(IKZF1)表达水平,并进行相关性分析。方法:36只小鼠随机等分为模型A组、模型B组和对照组。模型A组和模型B组分别经尾静脉注射HL60细胞1×10^(7)/只、5×10^(6)/只,对照组注射等量0.9%氯化钠溶液。采用Western blot检测骨髓组织BTG1和IKZF1蛋白相对表达水平,并与体重、红细胞、血小板及白细胞CD33阳性率进行相关性分析。结果:模型A组和模型B组小鼠在接种第7、14、28天的体重、血小板低于对照组,红细胞高于对照组(均P<0.05),但模型A组与模型B组上述指标比较无统计学差异(均P>0.05)。模型A组和模型B组接种第28天白细胞CD33阳性率高于对照组,BTG1和IKZF1蛋白相对表达水平低于对照组(均P<0.05),但模型A组与模型B组上述指标比较无统计学差异(均P>0.05)。Pearson相关性分析显示,AML小鼠BTG1、IKZF1蛋白相对表达水平与白血病CD33阳性率、体重、红细胞、血小板均存在相关性(均P<0.05)。结论:BTG1、IKZF1蛋白在AML模型小鼠呈高表达,且表达水平与小鼠体重、外周血及肿瘤浸润程度存在相关性。

辅激活因子SRC/p160家族与炎症相关转录因子的关系

SRC/p160(steroid receptor coactivator/p160)家族作为一类辅激活因子,可以辅助多种转录因子,包括炎症相关转录因子,如核转录因子κB,激活蛋白-1,过氧化物酶体增殖物激活受体-γ,糖皮质类固醇激素受体,进而在转录水平上调节多种基因的表达。SRC/p160家族的作用决定于上游的配体、信号通路和转录因子类型,并在不同的组织细胞中表现出一定的特异性及复杂性。而对SRC/p160家族与炎症相关转录因子关系的研究有利于更深入地了解机体对炎症相关基因转录的精细调节和炎症相关性疾病的可能机制,并为抗炎治疗提供新靶点。

BMAL1减轻H_(2)O_(2)诱导的心肌细胞损伤机制研究

目的探讨脑和肌肉组织芳香烃受体核转运蛋白的类似蛋白1(BMAL1)通过核因子E2相关因子2(NRF2)调节活性氧(ROS)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体通路对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的心肌细胞损伤的影响。方法体外培养H9c2细胞和BMAL1稳定过表达的H9c2细胞,建立H_(2)O_(2)诱导的H9c2细胞损伤模型,并将细胞分为对照(Control)组、H_(2)O_(2)组、BMAL1过表达(BMAL1-OE)组、BMAL1过表达+H_(2)O_(2)(BMAL1-OE+H_(2)O_(2))组、BMAL1过表达+NRF2抑制剂(BMAL1-OE+ML385)组、BMAL1过表达+NRF2抑制剂+H_(2)O_(2)(BMAL1-OE+ML385+H_(2)O_(2))组。采用CCK-8法检测细胞活力,荧光探针2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯检测ROS生成,Western blot检测BMAL1、NRF2和NLRP3蛋白表达,酶联免疫吸附试验法检测白细胞介素(IL)-1β释放。结果与Control组相比,H_(2)O_(2)组H9c2心肌细胞活力减弱,ROS生成增多,BMAL1和NRF2蛋白表达水平降低,NLRP3蛋白表达水平升高,IL-1β释放增多(P<0.05);与H_(2)O_(2)组相比,BMAL1-OE+H_(2)O_(2)组H9c2心肌细胞活力升高,ROS生成减少,BMAL1和NRF2蛋白表达水平升高,NLRP3蛋白表达水平降低,IL-1β释放减少(P<0.05)。与BMAL1-OE+H_(2)O_(2)组相比,BMAL1-OE+ML385+H_(2)O_(2)组H9c2心肌细胞活力减弱,ROS生成增多,NLRP3蛋白表达水平升高,IL-1β释放增多(P<0.05)。结论BMAL1可减轻H_(2)O_(2)诱导的H9c2心肌细胞损伤,其机制可能与NRF2调节ROS/NLRP3炎症小体通路有关。

转录因子Klf2和Nrf2/Bach1调控γ-谷氨酰半胱氨酸合酶在气道上皮细胞中的作用

目的通过研究锌指Krüppel样转录因子2(Klf2)及红系衍生核因子相关因子2(Nrf2)/BTB-CNC异体同源体1(Bach1)在经香烟烟雾提取物(CSE)刺激的大鼠气道上皮细胞中的表达,了解其感受氧化应激对靶基因γ-谷氨酰半胱氨酸合酶(γ-GCS)的调控作用。方法采用酶消化法提取大鼠原代气管-支气管上皮细胞,并用10%CSE干预细胞6 h,收集细胞,双酶法检测γ-GCS活性;通过免疫细胞化学法观察Nrf2/Bach1的核转位;采用Western blot和RT-PCR技术研究细胞中Klf2、Nrf2、Bach1、γ-GCS的蛋白及mRNA表达。结果大鼠气管-支气管上皮细胞经CSE诱导后其γ-GCS活性明显增高。免疫细胞化学结果显示Nrf2经CSE刺激后出现由核外向核内的转位,Bach1经CSE刺激后出现由核内向核外的转位。Western blot结果显示CSE处理组中Klf2、Nrf2、Bach1、γ-GCS蛋白水平较对照组显著升高(P<0.05);RT-PCR结果显示CSE处理组中Klf2、Nrf2、Bach1、γ-GCS mRNA水平较对照组显著升高(P<0.05)。直线相关分析表明γ-GCS蛋白表达与Klf2、Nrf2、Bach1呈正相关(P<0.05)。结论 CSE可能通过转录因子Klf2、Nrf2、Bach1调节γ-GCS的表达。

血清LncRNA-ZFAS1、miR-15a-5p相对表达量对癫痫持续状态患者预后不良的预测效能

目的观察癫痫持续状态(SE)患者血清LncRNA-ZFAS1、miR-15a-5p表达变化,分析血清LncRNA-ZFAS1、miR-15a-5p相对表达量对SE患者预后不良的预测效能。方法SE患者100例(SE组)、同期体检健康者68例(对照组),采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测受检者血清LncRNA-ZFAS1、miR-15a-5p,通过starBase数据库预测LncRNA-ZFAS1与miR-15a-5p的结合位点。收集SE患者性别、年龄、病程、发作类型、基础疾病、院内并发症、脑组织异常、脑脊液异常、脑电图异常、伴发热、既往癫痫发作史≥2次、癫痫持续时间、机械通气、癫痫持续状态严重程度评分(STESS)、重症监护室时间、住院时间和治疗药物种类等一般资料,并根据格拉斯哥预后量表将SE患者分为不良预后组31例和良好预后组69例,比较不良预后组、良好预后组患者的一般资料及血清LncRNA-ZFAS1、miR-15a-5p相对表达量。以SE患者预后不良为因变量,以单因素分析中有统计学差异的变量为自变量,采用多因素Logistic回归分析法分析SE患者预后不良的危险因素。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清LncRNA-ZFAS1、miR-15a-5p相对表达量及二者联合对SE患者预后不良的预测效能。结果SE组受检者血清LncRNA-ZFAS1相对表达量高于对照组,miR-15a-5p相对表达量低于对照组(P均<0.05)。SE患者血清LncRNA-ZFAS1、miR-15a-5p相对表达量呈负相关关系(r=-0.742,P<0.001)。LncRNA-ZFAS1与miR-15a-5p的3'非翻译端存在互补序列。不良预后组惊厥性、癫痫持续时间≥1 h、机械通气比例、STESS评分、血清LncRNA-ZFAS1相对表达量高于良好预后组,血清miR-15a-5p相对表达量低于良好预后组(P均<0.05)。惊厥性SE、癫痫持续时间≥1 h、机械通气、STESS评分增加和血清LncRNA-ZFAS1相对表达量升高为SE患者不良预后的独立危险因素,血清miR-15a-5p相对表达量升高为独立保护因素(P均<0.05)。血清LncRNA-ZFAS1预测SE患者不良预后的AUC为0.786,敏感度为67.74%、特异度为75.36%;血清miR-15a-5p预测SE患者不良预后的AUC为0.781,敏感度为90.32%、特异度为53.62%;血清LncRNA-ZFAS1联合miR-15a-5p预测SE患者不良预后的AUC为0.879,敏感度为87.10%、特异度为73.91%。结论SE患者血清LncRNA-ZFAS1高表达、miR-15a-5p低表达,呈负相关关系。血清LncRNA-ZFAS1相对表达量升高为SE患者不良预后的独立危险因素,血清miR-15a-5p相对表达量升高为独立保护因素。检测血清LncRNA-ZFAS1、miR-15a-5p可用于SE患者预后不良的预测,且二者联合预测效能更高。

食管鳞状细胞癌组织中SNAI2和FSCN1蛋白表达情况对其预后生存的影响

目的观察食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中SNAIL超家族锌指转录因子2(SNAI2)、肌动蛋白结合蛋白1(FSCN1)表达情况,探讨其对ESCC患者预后生存的影响。方法选取ESCC患者120例,收集患者ESCC组织及癌旁组织,采用免疫组织化学法检测组织中SNAI2、FSCN1表达。随访5年,记录患者生存时间,采用Kaplan-Meier生存曲线分析SNAI2、FSCN1表达与ESCC患者预后的关系,COX回归分析ESCC患者预后的影响因素。结果ESCC组织SNAI2、FSCN1表达阳性率均高于癌旁组织(P均<0.01)。Kaplan-Meier生存曲线显示,SNAI2、FSCN1表达阳性ESCC患者5年生存率低于SNAI2、FSCN1表达阴性患者(P均<0.05)。单因素COX回归分析显示,分化程度、TNM分期、SNAI2、FSCN1是ESCC患者预后的影响因素;多因素COX回归分析显示,TNM分期、SNAI2、FSCN1是ESCC患者预后的独立影响因素(P均<0.05)。结论ESCC组织中SNAI2、FSCN1高表达,SNAI2、FSCN1高表达与ESCC患者不良预后有关,是影响ESCC患者预后的独立危险因素。

核转运蛋白α2(KPNA2)通过激活Snail 1信号通路促进胃癌细胞增殖和侵袭及迁移

目的研究核转运蛋白α2(KPNA2)在胃癌细胞中的表达、生物学作用及机制。方法采用基因表达谱相互作用分析(GEPIA)数据库分析胃癌患者肿瘤组织中KPNA2蛋白相对表达量。将KPNA2短发夹RNA转入至高表达KPNA2的MKN45胃癌细胞,将KPNA2质粒转入至MKN45胃癌细胞,在敲低和过表达KPNA2细胞中,采用CCK-8法检测细胞增殖,TranswellTM小室实验、创伤愈合实验检测细胞侵袭和迁移;实时定量PCR检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、CD133、CD44、性别决定区Y框蛋白2(SOX2)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9的mRNA水平,Western blot法检测KPNA2、cyclinD1、PCNA、CD133、CD44、SOX2及Snail 1蛋白水平。结果KPNA2在胃癌组织高表达,过表达KPNA2能够促进MKN45胃癌细胞增殖、侵袭和迁移。同时促进胃癌细胞的cyclin D1、PCNA、CD133、CD44、SOX2、E-cadherin、N-cadherin、vimentin、MMP2、MMP9以及Snail 1的表达。结论KPNA2通过刺激上皮间质转化促进胃癌细胞的侵袭和迁移。

SNAI1在85例结直肠癌患者组织中表达的研究

背景与目的:SNAI1作为一种锌指转录因子(zinc-finger transcription factor),通过抑制E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达调控上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)。本研究旨在比较SNAI1在结直肠癌的癌旁正常黏膜组织、原发性结直肠癌组织和淋巴结转移灶癌组织的表达情况,探讨SNAI1对结直肠癌患者的意义。方法:免疫组织化学检测85例结直肠癌患者的癌旁正常黏膜组织(距癌15cm以上)、原发性结直肠癌组织和淋巴结转移灶癌组织中SNAI1的表达情况,采取多种分组及多种统计方法对数据进行详细分析比较。结果:SNAI1在原发性结直肠癌组织中的表达显著高于正常结直肠黏膜组织中的表达(P=0.000);低分化癌组织的表达显著高于高中分化癌组织(P=0.014);淋巴结转移灶癌组织的表达显著高于原发性结直肠癌组织(P=0.001);SNAI1在Dukes A+B与Dukes C+D分期中的表达差异无统计学意义(P=0.330);双变量相关分析显示组织类别与SNAI1的表达呈显著正相关且相关关系密切(Kendall's tau-b相关系数r=0.532>0.5,P=0.000;Spearman's相关系数r=0.595>0.5,P=0.000);剔除无淋巴结转移的原发性结直肠癌,发现原发性结直肠癌组织与其淋巴结转移癌组织的表达差异并无统计学意义(P>0.05);双变量相关分析显示淋巴结转移与SNAI1的表达呈正相关(Kendall's tau-b相关系数r=0.209<0.5,P=0.01;Spearman's相关系数r=0.221<0.5,P=0.009)。结论:结直肠癌中,SNAI1可作为恶性程度评价指标;淋巴结转移灶的癌细胞恶性程度并不比原发灶的癌细胞强;SNAI1高表达往往伴随淋巴结转移的出现,SNAI1有作为淋巴结转移风险的评估指标的潜能。

基于TLR4/NF-κB/Snail1信号通路的槲皮素对糖尿病大鼠肾脏疾病的实验

本文基于TLR4/NF-κB/Snail1信号通路,通过采用一次性腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,随机分为正常对照组、糖尿病模型组、阳性对照组和槲皮素组并进行对比分析。实验结果表明:槲皮素对糖尿病大鼠的肾脏保护作用可通过调控肾脏TLR4/NF-κB/Snail1信号通路,减轻炎症反应抑制肾脏纤维化。

pitx3和nurr1基因在不同年龄大鼠不同脑区的表达变化

目的:探讨正常不同年龄SD大鼠不同脑区pitx3、nurr1基因的表达变化。方法:使用RT-PCR、免疫印迹法和免疫荧光方法检测pitx3、nurr1基因在正常不同年龄SD大鼠不同脑区转录与翻译水平的表达。结果:RT-PCR、免疫印迹法检测显示,pitx3、nurr1基因在各年龄组大鼠中脑、大脑皮质、海马、纹状体、嗅球和下丘脑均有表达,其中在海马和中脑表达较高;在各年龄组中新生组表达最高,并随着年龄的增长表达呈下调趋势;免疫荧光检测E16.5 d组和新生组的中脑和海马区观察到有大量Pitx3或Nurr1单标细胞和Pitx3/TH或Nurr1/TH双标细胞。结论:pitx3、nurr1基因的表达不仅与中脑多巴胺能神经元,而且可能与儿茶酚胺类神经元的发育和生存维持有关;老年期pitx3、nurr1基因表达下降可能与脑老化和神经退行性变疾病,如帕金森病和老年性痴呆等有关。

血清B7-H3、PCT、sICAM-1水平和NF-κB表达在重症急性胰腺炎合并感染诊断中的价值

目的探讨血清协同刺激分子B7家族3(B7-H3)、降钙素原(PCT)、可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)水平和核转录因子(NF)-κB表达在重症急性胰腺炎合并感染诊断中的价值。方法选择2012年6月至2014年6月该院确诊为胰腺炎的90例患者为研究对象,分为轻症急性胰腺炎组(MAP组)和重症急性胰腺炎合并感染组(SAP组),同时选取50例同期来该院体检的健康者为健康对照组,分别检测并比较3组研究对象血清B7-H3、PCT、sICAM-1水平和NF-κB表达。通过APACHEⅡ、RANSON评分对患者病情严重程度进行评分,探讨血清B7-H3、PCT、sICAM-1水平和NF-κB表达与急性胰腺炎病情严重程度的相关性。结果 3组研究对象血清B7-H3、PCT、sICAM-1水平和NF-κB阳性表达差异均有统计学意义(P<0.05)。组间两两比较显示,SAP组患者血清B7-H3、PCT、sICAM-1水平明显高于MAP组和健康对照组(P<0.05),MAP组血清B7-H3、PCT、sICAM-1水平明显高于健康对照组(P<0.05);SAP组和MAP组患者NF-κB阳性表达率显著高于健康对照组(P<0.05),SAP组患者NF-κB阳性表达率显著高于MAP组(P<0.05)。SAP组患者APACHEⅡ、RANSON评分明显高于MAP组(P<0.05)。血清B7-H3、PCT、sICAM-1水平和NF-κB表达与APACHEⅡ、RANSON评分呈正相关。结论血清B7-H3、PCT、sICAM-1水平和NF-κB表达与胰腺炎病情严重程度密切相关,可作为重症急性胰腺炎合并感染的临床诊断指标。

电针对帕金森病小鼠Nrf2/NLRP3/Caspase-1通路介导的细胞焦亡的影响

目的:观察电针对帕金森病(PD)小鼠黑质中核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)通路的影响,探讨其神经保护机制。方法:将40只C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组、模型组、假电针组、电针组,每组10只。采用鱼藤酮灌胃4周建立PD小鼠模型。电针组于“风府”和双侧“太冲”“足三里”给予电针刺激,每日1次,连续2周;假电针组于同样穴位浅刺至皮下,连接电针仪后不通电,其余操作均同电针组。采用敞箱实验观察各组小鼠的行为学变化,酶联免疫吸附法检测小鼠血清中白细胞介素(IL)-1β和IL-18含量,免疫组织化学法检测小鼠黑质中酪氨酸羟化酶(TH)阳性表达,实时荧光定量PCR法检测小鼠黑质中Nrf2、NLRP3、Caspase-1、消皮素D(GSDMD)、IL-1β和IL-18mRNA表达水平,Western blot法检测小鼠黑质中Nrf2、NLRP3、Caspase-1和GSDMD蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠行为学评分升高(P<0.01),自主运动的总时间缩短、总路程减少、平均速度降低(P<0.01),血清IL-1β和IL-18含量增加(P<0.01),黑质中TH阳性表达减少(P<0.01),Nrf2mRNA和蛋白表达降低(P<0.01),NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA和蛋白表达水平及IL-1β、IL-18mRNA表达水平均升高(P<0.01)。与模型组、假电针组比较,电针组小鼠行为学评分降低(P<0.01),自主运动的总时间延长、总路程增加、平均速度升高(P<0.01),血清IL-1β和IL-18含量减少(P<0.01,P<0.05),黑质中TH阳性表达增加(P<0.01),Nrf2 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01,P<0.05),NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA和蛋白表达水平及IL-1β、IL-18 mRNA表达水平均降低(P<0.01)。与模型组比较,假电针组小鼠上述各项指标差异均无统计学意义。结论:电针“风府”“太冲”和“足三里”可改善PD小鼠运动障碍,减少黑质多巴胺神经元的丢失,抑制神经炎性反应,其作用机制可能与调控Nrf2/NLRP3/Caspase-1通路介导的细胞焦亡相关。

胃肠安颗粒剂与汤剂抑制人胃癌裸鼠皮下移植瘤生长、淋巴结转移作用比较及对RUFY3,SNAI1,VEGF和EMT蛋白的影响

目的:观察胃肠安颗粒与汤剂对MKN45人胃癌裸鼠皮下移植瘤皮下移植瘤生长、淋巴结转移作用及对RUN和FYVE结构域蛋白3(RUFY3),锌指转录因子1(SNAI1),血管内皮生长因子(VEGF)和上皮细胞间质转化(EMT)蛋白的影响。方法:建立人胃癌MKN45细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为空白(生理盐水0. 5 m L/只)组,胃肠安颗粒(胃肠安颗粒3. 54 g·kg-1)组,胃肠安煎剂(生药35. 49 g·kg-1)组。观察各组裸鼠皮下移植瘤瘤重、腋窝淋巴结的体积,苏木素-伊红(HE)染色检测各组淋巴结的形态,免疫组化检测包括RUFY3,SNAI1,VEGF,E-钙黏蛋白(E-cadherin),N-钙黏蛋白(N-cadherin),波形蛋白(Vimentin)相关蛋白表达。结果:与空白组比较,胃肠安颗粒组和胃肠安煎剂组皮下移植瘤瘤重显著降低(P <0. 01),腋窝淋巴结体积显著减小(P <0. 01); HE染色显示淋巴结中均可见转移的肿瘤细胞;裸鼠胃癌组织RUFY3,SNAI1,VEGF,N-cadherin,Vimentin蛋白表达显著降低(P <0. 01),E-cadherin蛋白表达显著增加(P <0. 01)。结论:胃肠安颗粒与胃肠安煎剂在抑制人胃癌皮下移植瘤生长和淋巴结转移方面具有相同疗效,可在一定程度上代替汤剂使用;胃肠安颗粒和胃肠安煎剂均能降低裸鼠皮下移植瘤中RUFY3,SNAI1,VEGF,N-cadherin,Vimentin蛋白表达,增加E-cadherin蛋白表达,提示胃肠安可能通过调节RUFY3,SNAI1,VEGF,EMT相关蛋白的表达而起到抑制肿瘤转移的作用。

Ac-SDKP对矽肺大鼠磷酸化热休克蛋白27/SNAI1途径的调节作用

目的研究抗纤维化四肽N-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)对矽肺大鼠纤维化肺组织中磷酸化热休克蛋白27(P-HSP27)及锌指家族核转录因子1(SNAI1)表达的调控,以探讨Ac-SDKP抗矽肺纤维化作用。方法于2014年12月,采用一次性支气管灌注二氧化硅(SiO_(2))粉尘的方法制备大鼠矽肺动物模型,选取80只SPF级健康成年Wistar大鼠,根据随机数字表法将大鼠分为8组,每组10只。模型对照4周组(饲养4周)、模型对照8周组(饲养8周):支气管灌注生理盐水1.0 ml/只;矽肺模型4周组(饲养4周)、矽肺模型8周组(饲养8周):支气管灌注50 mg/ml的SiO_(2)混悬液1.0 ml/只;单独Ac-SDKP给药4周组(饲养4周)、单独Ac-SDKP给药8周组(饲养8周):Ac-SDKP 800μg·kg^(-1)·d^(-1)腹腔泵给药;Ac-SDKP预防治疗组:Ac-SDKP 800μg·kg^(-1)·d^(-1)给药48 h后,支气管灌注SiO_(2)混悬液1.0 ml/只,饲养8周;Ac-SDKP抗纤维化治疗组:支气管灌注SiO_(2)混悬液1.0 ml/只4周后,给予Ac-SDKP 800μg·kg^(-1)·d^(-1)治疗4周。蛋白免疫印迹(Western blotting)检测各组P-HSP27、SNAI1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的表达,免疫组织化学技术检测P-HSP27和SNAI1的表达,激光共聚焦显微镜检测P-HSP27和α-SMA共定位表达。结果与模型对照组比较,矽肺模型组大鼠矽肺纤维化区域P-HSP27、SNAI1、α-SMA、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达增强,差异均有统计学意义(P<0.05)。给予Ac-SDKP干预后,与矽肺模型8周组比较,Ac-SDKP预防和抗纤维化治疗组大鼠P-HSP27、SNAI1、α-SMAⅠ型和Ⅲ型胶原蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。而单独Ac-SDKP给药组与模型对照组P-HSP27、SNAI1、α-SMA、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达无明显变化,差异均无统计学意义(P>0.05)。激光共聚焦结果显示,矽肺模型组大鼠肺组织表达P-HSP27和α-SMA的阳性细胞多于模型对照组;与矽肺模型组比较,Ac-SDKP预防和抗纤维化治疗组表达P-HSP27和α-SMA的阳性细胞减少;与模型对照8周组比较,矽肺模型8周组结节中有部分P-HSP27和α-SMA表达的双阳性细胞。结论Ac-SDKP可能通过调节P-HSP27/SNAI1通路发挥抗矽肺纤维化的作用。

结缔组织生长因子和缺氧诱导因子1α在胰腺癌组织中的表达及意义

结缔组织生长因子（CTGF）属于一种即刻早基因CCN家族成员之一，位于人染色体6q23．1，广泛存在于人类多种组织器官中，在介导细胞的增殖、迁移、分化、生存及血管生成中起重要作用。缺氧诱导因子1α（HIF-1α）是一个在缺氧状态下发挥活性的核转录因子，在多种肿瘤组织中高表达，在肿瘤的生长及浸润转移中具有重要意义。本实验检测胰腺癌的CTGF、HIF-1α蛋白表达，探讨二者在胰腺癌中的作用和相互关系。

Rev-erbα/Bmal1信号通路在糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用及其与自噬的关系

目的评价Nr1D1核受体亚家族1,组D,成员1(Rev-erbα)/芳香烃受体核转位蛋白样1受体(Bmal1)信号通路在糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用及其与自噬的关系。方法SPF级成年雄性SD大鼠,6~8周龄,体重200~220 g,腹腔注射链脲佐菌霉素60 mg/kg建立1型糖尿病模型,糖尿病造模成功后继续饲养8周。取糖尿病大鼠30只,采用随机数字表法分为3组:糖尿病假手术组(DS组,n=6)、糖尿病心肌缺血再灌注组(DI/R组,n=12)和糖尿病心肌缺血再灌注+Rev-erbα拮抗剂SR-8278组(DI/R+SR组,n=12)。另取非糖尿病大鼠18只,采用随机数字表法分为2组:非糖尿病假手术组(NS组,n=6)和非糖尿病心肌缺血再灌注组(NI/R组,n=12)。采用结扎左冠状动脉前降支30 min再灌注120 min的方法建立心肌缺血再灌注损伤模型。DI/R+SR组于缺血前1 h时经股静脉注射SR-82782 mg/kg。再灌注结束即刻采集颈动脉血标本,采用ELISA法检测血清cTnI、CK-MB和LDH水平;然后处死大鼠,取心肌组织,采用TTC法测定心肌梗死面积百分比,透射电镜下计数自噬小体,采用RT-PCR检测Rev-erbα和Bmal1的mRNA表达水平,Western blot法检测Rev-erbα、Bmal1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ和LC3Ⅰ的表达水平,并计算LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。结果与NS组比较,NI/R组心肌梗死体积百分比、血清cTnI、CK-MB和LDH水平和自噬小体计数升高,心肌组织Rev-erbα及其mRNA表达上调,Bmal1及其mRNA表达下调,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高,DS组血清cTnI、CK-MB和LDH水平升高,自噬小体计数降低,心肌组织Rev-erbα及其mRNA表达上调,Bmal1及其mRNA表达下调,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P<0.05);与NI/R组比较,DI/R组心肌梗死体积百分比、血清cTnI、CK-MB和LDH水平升高,自噬小体计数降低,心肌组织Rev-erbα及其mRNA表达上调,Bmal1及其mRNA表达下调,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P<0.05);与DS组比较,DI/R组心肌梗死体积百分、血清cTnI、CK-MB和LDH水平和自噬小体计数升高,心肌组织Rev-erbα及其mRNA表达上调,Bmal1及其mRNA表达下调,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.05);与DI/R组比较,DI/R+SR组心肌梗死体积百分比、血清cTnI、CK-MB和LDH水平降低,自噬小体计数降低,心肌组织Rev-erbα及其mRNA表达下调,Bmal1及其mRNA表达上调,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.05)。结论Rev-erbα/BMAL1信号通路可通过调节细胞自噬水平,参与糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的过程。

白细胞介素-33在肝脏疾病中的作用

IL-33（Interleukin-33）是近10年发现IL-1家族的第11个新成员，又称IL-1F11[1]。IL-33是一种核内蛋白质，同时又能被释放到细胞外，像IL-1α一样，扮演着双重角色：不但作为核内转录因子参与基因表达的调控，还作为细胞因子影响信号通路的转导[2]。细胞受损或坏死而非凋亡后，IL-33被动分泌到胞外，启动宿主免疫系统，诱导免疫应答，激活特定免疫细胞，促进炎症介质、促炎症因子的释放，发挥类似高迁移率组蛋白（HMGB1）的警报素（alarmin）作用[3]。研究证实，IL-33在哮喘及其他气道炎症、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、皮肤纤维化及肺纤维化等疾病的致病过程中承担着重要角色[4-8]。然而，在某些疾病中 IL-33又呈现出保护性作用。比如，在载脂蛋白E（ApoE）缺陷的小鼠模型中注射重组 IL-33可减少泡沫样细胞和动脉粥样硬化斑块的形成，减少心血管意外的发生[9]。同样，这种保护作用也在肠道寄生虫感染中被证实[10]。大量新近研究表明，IL-33参与了多种肝脏疾病的致病过程，尽管具体的机制尚不十分清楚，但其所扮演的角色却是不容忽视的。现就IL-33的重要生物学特征及在各类肝脏疾病中作用的相关研究作一综述。

Cbf与骨代谢

核结合因子(Cbf)是一个与runt基因高度同源的转录因子家族,Cbfα1促进成骨细胞分化并影响分化后成熟成骨细胞的功能,促进软骨细胞成熟和破骨细胞的生成。Cbfβ对维持正常骨骼发育也有作用。Cbfα1调节多种成骨基因的表达,同时本身也受多种因素的调控。对Cbfα1调节的基因及调节Cbfα1的基因的进一步研究,将会为探讨骨代谢疾病的发生机制及相关治疗带来新的方向。

参黛清肠汤对溃疡性结肠炎小鼠肠道黏膜保护作用及机制探讨

目的观察参黛清肠汤对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠肠道黏膜的保护作用,并探讨其机制。方法55只C57BL/6小鼠以2.5%葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)灌胃3个周期诱导建立UC模型,建模成功后随机分为5组,另10只C57BL/6小鼠记为正常组。美沙拉嗪组予以200 mg/kg小鼠体质量的美沙拉嗪溶于1 mL/100 g小鼠体质量生理盐水中灌胃,参黛清肠汤低、中、高剂量组分别予以15、30、60 mg/kg参黛清肠汤同法灌胃,模型组和正常组均予以等量生理盐水灌胃,1次/d,给药2周。干预后评价各组疾病活动指数(disease activity index,DAI)和肠道黏膜损伤指数(colonic mucosal damage index,CMDI);苏木素-伊红(HE)染色观察肠道黏膜病理改变;酶联免疫法检测肠道黏膜组织白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;实时反转录荧光聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blotting,WB)分别检测肠道黏膜组织Ras同源基因家族A(RhoA)、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(ROCK-1)、Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac-1)、p21激活激酶1(PAK-1)、核转录因子-κB(NF-κB)mRNA和蛋白表达。结果HE染色证实UC小鼠建模成功;模型组DAI和CMDI评分,肠道黏膜组织IL-1β、TNF-α含量,肠道黏膜组织RhoA、ROCK-1、NF-κB mRNA及蛋白表达均高于正常组(P<0.05),美沙拉嗪组和参黛清肠汤3剂量组均低于模型组(P<0.05),参黛清肠汤低剂量组均高于美沙拉嗪组(P<0.05),参黛清肠汤高剂量组均低于美沙拉嗪组(P<0.05),模型组肠道黏膜组织Rac-1、PAK-1 mRNA及蛋白表达均低于正常组(P<0.05),美沙拉嗪组和参黛清肠汤3剂量组均高于模型组(P<0.05),参黛清肠汤低剂量组均低于美沙拉嗪组(P<0.05),参黛清肠汤高剂量组均高于美沙拉嗪组(P<0.05),且参黛清肠汤中剂量组与美沙拉嗪组差异均无统计学意义(P>0.05)。模型组肠道黏膜组织病理改变严重,美沙拉嗪组和参黛清肠汤3剂量组病理改变均减轻,且参黛清肠汤高剂量组效果最佳。结论参黛清肠汤能减轻UC小鼠病变,保护肠道黏膜组织,减轻炎症损伤,推测与抑制RhoA/ROCK通路,下调RhoA、ROCK-1与NF-κB表达,上调Rac-1、PAK-1表达有关。