锌指核糖核酸结合蛋白在恶性肿瘤相关研究中的进展

锌指核糖核酸结合蛋白(ZFR)是一种古老的蛋白质。ZFR结构特殊,在原核生物中分布广泛。近年来,ZFR相关研究证实了ZFR是在各种恶性肿瘤中发挥作用的关键基因,其参与了恶性肿瘤的发生、进展和免疫应答等。在结直肠癌、肝细胞肝癌以及胰腺导管腺癌中,ZFR已经被鉴定为癌症候选驱动基因。本研究对ZFR与恶性肿瘤关系的相关研究进展进行综述,分析ZFR过表达在各类癌症的恶性进展和转移扩散中的作用机制。

非肌层浸润膀胱癌组织中核糖核酸结合蛋白15及泛素特异性肽酶24表达的临床预后意义

目的研究非肌层浸润膀胱癌(NMIBC)组织中核糖核酸结合蛋白15(RBM15)、泛素特异性肽酶24(USP24)蛋白表达及与临床预后的关系。方法选取2018年1月—2020年1月西安市中心医院肿瘤科诊治NMIBC患者90例为研究对象。应用免疫组化法检测癌及癌旁组织中RBM15、USP24蛋白表达;比较不同临床病理特征NMIBC患者RBM15、USP24蛋白表达差异;Spearman秩相关分析膀胱癌组织中RBM15与USP24蛋白表达的相关性。随访3年,应用Kaplan-Meier曲线分析(Log-Rank检验)RBM15、USP24蛋白表达对无进展生存预后的影响;多因素COX模型分析NMIBC患者无进展生存预后的影响因素。结果膀胱癌组织中RBM15、USP24蛋白阳性率分别为66.67%(60/90)、74.44%(67/90),高于癌旁组织6.67%(6/90)、11.11%(10/90),差异有统计学意义(χ^(2)=69.761、73.739,P均<0.001)。NMIBC癌组织中RBM15与USP24表达呈正相关(r=0.716,P<0.001)。NMIBC癌组织中RBM15、USP24阳性率在肿瘤分期T1期、病理分级高级别中分别高于肿瘤分期Ta/Tis期、病理分级低级(χ^(2)/P=11.903/0.001,10.866/0.001;17.457/<0.001,11.433/0.001)。RBM15阳性组和阴性组3年无进展生存率分别为45.00%(27/60)和90.00%(27/30)。USP24阳性组和阴性组3年无进展生存率分别为50.75%(34/67)和86.96%(20/23)。RBM15阳性组、USP24阳性组累积无进展生存率明显低于RBM15阴性组、USP24阴性组(χ^(2)/P=8.057/0.005、15.379/<0.001)。COX模型分析结果表明,肿瘤分期T1期、病理分级高级别、RBM15阳性、USP24阳性是影响NMIBC患者无进展生存期的独立危险因素[OR(95%CI)=1.614(1.227~2.214),1.917(1.319~2.799),1.839(1.228~2.753),1.744(1.245~2.443)]。结论NMIBC癌组织中RBM15、USP24表达均升高,两者与肿瘤分期及病理分级有关,是影响NMIBC患者无进展生存期的独立危险因素。

微RNA-204-5p、蛋白锌指E盒结合同源盒蛋白1在新生儿肺炎血清中的表达

目的 探讨微RNA-204-5p(miR-204-5p)、蛋白锌指E盒结合同源盒蛋白1(ZEB1)在新生儿肺炎(NP)病儿血清中的表达变化及其在病情评估及预后预测中的临床价值。方法 选取2021年10月至2022年5月张家口市妇幼保健院收治的NP病儿80例为NP组,另选取同期该院出生的健康新生儿80例为对照组。检测血清miR-204-5p、ZEB1、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)及C反应蛋白(CRP)水平并比较;采用Pearson法分析NP病儿血清miR-204-5p、ZEB1水平及其与临床指标的相关性;应用受试者操作特征(ROC)曲线分析miR-204-5p、ZEB1及二者联合预测NP不良预后的价值。结果 NP组血清miR-204-5p水平(0.47±0.16比1.01±0.21)、血氧饱和度[(83.99±6.15)%比(95.32±6.74)%]显著低于对照组,血清ZEB1[(4.76±0.71)ng/L比(2.15±0.36)ng/L]、CK、CK-MB[(46.25±12.52)U/L比(23.22±9.64)U/L]及CRP水平[(18.09±4.29)mg/L比(3.31±0.71)mg/L]均显著高于对照组(P<0.05)。重症组血清miR-204-5p水平、血氧饱和度显著低于轻症组,血清ZEB1、CK、CK-MB及CRP水平均显著高于轻症组(P<0.05)。血清miR-204-5p与CPIS评分、CK-MB及CRP水平呈负相关(r=-0.33、-0.30、-0.40,P<0.05),与血氧饱和度呈正相关(r=0.41,P<0.05);血清ZEB1水平与CPIS评分、CK-MB及CRP水平呈正相关(r=0.28、0.37、0.44,P<0.05),与血氧饱和度呈负相关(r=-0.36,P<0.05);血清miR-204-5p与ZEB1水平呈负相关(r=-0.56,P<0.05)。预后不良组血清miR-204-5p水平、血氧饱和度低于预后良好组(P<0.05),血清ZEB1、CK、CK-MB及CRP水平均显著高于预后良好组(P<0.05)。ROC曲线显示,miR-204-5p对NP不良预后预测的AUC为0.89,截断值为0.47,其灵敏度、特异度分别为95.12%、72.41%;ZEB1对NP不良预后预测的AUC为0.92,截断值为5.16,其灵敏度、特异度分别为87.80%、86.21%;二者联合对预后预测的AUC为0.99,明显高于二者单独诊断,其灵敏度、特异度分别为97.56%、94.83%。结论 miR-204-5p在NP病儿血清中低表达,ZEB1在NP病儿血清中高表达,均与NP病情严重程度有关,二者联合对NP不良预后具有较高的预测价值。

E盒结合锌指蛋白2对AsPC-1细胞增殖和EMT的影响

目的探讨E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)对AsPC-1胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间充质转化(EMT)的影响。方法按照胰腺癌细胞中转染物不同,将细胞分为4组,分别是si-NC、si-ZEB2、pcDNA3.1、pcDNA3.1-ZEB2。TCGA数据库分析ZEB2在胰腺癌组织与癌旁胰腺组织中的表达差异及其与胰腺癌患者预后的关系,并利用Westernblot检测ZEB2在AsPC-1胰腺癌细胞和正常胰腺上皮细胞HPNE中的表达差异。采用qRT-PCR、Westernblot检测ZEB2小干扰RNA(si-ZEB2)及过表达质粒(pcDNA3.1-ZEB2)的转染效率。CCK-8、克隆形成、划痕和Transwell实验检测ZEB2对AsPC-1细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响。qRT-PCR和免疫荧光实验检测ZEB2对AsPC-1细胞中EMT标志物表达的影响。利用生物信息学网站预测与ZEB2有靶定作用的miRNAs并构建ZEB2的蛋白-蛋白互作网络(PPI)。结果ZEB2在胰腺癌组织和AsPC-1胰腺癌细胞中高表达(P<0.05),且其高表达与胰腺癌患者的较差预后相关。qRT-PCR、Westernblot结果表明si-ZEB2和pcDNA3.1-ZEB2能够有效的转染到AsPC-1胰腺癌细胞中(P<0.05)。与si-NC组相比,si-ZEB2组中AsPC-1细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力受到抑制,EMT上皮标志物E-cadherin表达增加、间质标志物Vimentin表达减少(P<0.05)。pcDNA3.1-ZEB2组中AsPC-1细胞的增殖、克隆形成、迁移、侵袭和EMT标志物得到了与上述相反的结果(P<0.05)。共预测到与ZEB2有靶定作用的miRNAs 77个,与ZEB2作用密切的蛋白有10个。结论ZEB2在胰腺癌组织和细胞中高表达且其高表达与胰腺癌患者的较差预后相关,ZEB2作为一种促癌因子,能够促进AsPC-1胰腺癌细胞的增殖、克隆形成、迁移、侵袭和EMT进程。

急性脑出血患者血清E盒锌指结合蛋白1及DNA甲基化转移酶1与神经功能缺损和预后的相关性分析

目的探讨急性脑出血(ACH)患者血清E盒锌指结合蛋白1(ZEB1)、DNA甲基化转移酶1(DNMTl)与神经功能缺损、预后的关系。方法选取2019年7月—2022年7月本院收治的105例ACH患者为ACH组,依据ACH患者入院时美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将其分为轻度组(n=34)、中度组(n=41)、重度组(n=30)。根据改良Rankin量表(mRS)评分将ACH患者分为预后良好组(n=65)和预后不良组(n=40)。另纳入同期105例体检健康者为对照组。选取2021年7月—2022年7月本院诊治的45例ACH患者对构建的ACH预后模型的受试者工作特征(ROC)曲线进行验证。采用酶联免疫吸附试验检测血清ZEB1、DNMT1水平;采用Spearman法分析ACH患者ZEB1、DNMT1水平与NIHSS评分的关系;采用多因素Logistic回归模型分析ACH患者预后的影响因素,采用ROC曲线评估血清ZEB1、DNMT1水平对ACH患者预后的预测价值。结果与对照组相比,ACH组血清ZEB1、DNMT1水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与轻度组相比,中度组和重度组ACH患者血清ZEB1、DNMT1、NIHSS评分均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与中度组相比,重度组ACH患者血清ZEB1、DNMT1、NIHSS评分均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman分析结果显示,ACH患者血清ZEB1、DNMT1水平与NIHSS评分均呈正相关(r=0.569、0.763,P均<0.001)。单因素分析结果显示,与预后良好组比较,预后不良组患者NIHSS评分、血肿体积、ZEB1及DNMT1水平均升高或增大,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,ZEB1、DNMT1、NIHSS评分、血肿体积增大是ACH患者预后不良的危险因素(P<0.05)。血清ZEB1、DNMT1预测ACH患者预后的曲线下面积(AUC)分别为0.834、0.854,ZEB1、DNMT1联合预测ACH患者预后的AUC为0.944,灵敏度为95.0%,特异度为86.2%。以验证组人群对预测预后的ROC曲线进行验证,结果显示AUC为0.903(95%CI:0.854~0.951),提示预后预测曲线具有较好的区分度。结论ACH患者血清ZEB1、DNMT1水平较高,二者均与ACH患者神经功能缺损、预后显著相关,且血清ZEB1、DNMT1联合可能更有利于临床评估ACH患者预后情况。

血清微小RNA-199a-3p、E盒结合锌指蛋白1水平对急性冠状动脉综合征患者经皮冠状动脉介入术后预后的预测价值

目的探讨微小RNA-199a-3p(miR-199a-3p)、E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)对急性冠状动脉综合征(ACS)患者经皮冠状动脉介入(PCI)术后预后的预测价值。方法选取2021年5月至2022年5月秦皇岛市第二医院接收的行PCI术治疗的113例ACS患者为观察组,根据观察组患者PCI术后1年内是否发生主要不良心血管事件(MACE),分为MACE组26例和非MACE组87例,同期健康体检者106例为对照组。检测血清miR-199a-3p、ZEB1水平,比较MACE组和非MACE组临床资料,Pearson分析患者血清miR-199a-3p和ZEB1水平相关性,多因素Logistic分析影响ACS患者PCI术后发生MACE的影响因素,ROC曲线分析血清miR-199a-3p、ZEB1对ACS患者PCI术后发生MACE的预测价值。结果与对照组相比,观察组血清miR-199a-3p水平较低,ZEB1水平较高(t=13.709、25.641,P<0.05);在ACS患者中miR-199a-3p与ZEB1呈负相关(r=-0.421,P<0.05);ACS患者PCI术后较PCI术前血清miR-199a-3p水平高,ZEB1水平低(t=4.820、6.040,P<0.05);MACE组与非MACE组高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、左心室射血分数、miR-199a-3p、ZEB1比较,差异有统计学意义(t=3.310、2.717、3.947、7.068、6.544,P<0.05);LDL-C、ZEB1水平是ACS患者PCI术后MACE的危险因素,左心室射血分数、HDL-C、miR-199a-3p水平是ACS患者PCI术后MACE的保护因素;miR-199a-3p、ZEB1联合预测ACS患者PCI术后MACE的曲线下面积为0.947,优于单独预测(Z=1.970、2.791,P<0.05)。结论ACS患者血清中miR-199a-3p、ZEB1水平呈负相关,两者均对ACS患者PCI术后MACE有预测价值,两者联合的预测价值更高。

冠心病患者血清微小核糖核酸-335、潜在转化生长因子结合蛋白2的表达及意义

目的观察冠心病(CHD)患者血清微小核糖核酸335(miR-335)、潜在转化生长因子结合蛋白2(LTBP-2)的表达,并探讨其意义。方法将102例CHD患者按疾病类型分为稳定型心绞痛(SAP)36例(SAP组)、不稳定型心绞痛(UAP)32例(UAP组)、急性心肌梗死(AMI)34例(AMI组),根据Gensini积分将102例CHD患者分为轻度病变组37例、中度病变组40例、重度病变组25例,另取冠状动脉(冠脉)造影诊断为非CHD患者40例为对照组。采用AU5800全自动生化分析仪检测空腹血糖、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-335,采用酶联免疫吸附法检测血清LTBP-2水平。CHD患者病情严重程度与血清miR-335、LTBP-2的关系采用Pearson积矩相关性分析。结果对照组、SAP组、UAP组、AMI组收缩压、舒张压、空腹血糖、TG、TC、LDL-C、HDL-C比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。对照组、SAP组、UAP组、AMI组血清miR-335水平呈逐渐下降趋势,而血清LTBP-2水平呈逐渐升高趋势,单因素方差分析结果显示,各组间血清miR-335、LTBP-2比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。轻度病变组、中度病变组、重度病变组血清miR-335水平呈逐渐下降趋势,而血清LTBP-2水平呈逐渐升高趋势,单因素方差分析结果显示,各组间血清miR-335、LTBP-2差异均有统计学意义(P均<0.05)。Pearson相关分析结果显示,CHD患者病变严重程度与血清miR-335水平呈负相关(r=-0.673,P<0.05),而与LTBP-2水平呈正相关(r=0.705,P<0.05)。结论CHD患者血清miR-335呈低表达,而LTBP-2呈高表达;二者联合检测有助于CHD患者病情程度的评估。

微小核糖核酸449a与多形性腺瘤基因锌指蛋白2在卵巢癌组织中的表达及意义

目的观察卵巢癌患者癌组织中微小核糖核酸-449(miR-449a)和多形性腺瘤基因锌指蛋白2(PLAGL2)的表达水平及二者关系,并分析其临床意义。方法收集福建医科大学附属医院2014年3月-2016年3月90例卵巢癌患者的术后癌组织和癌旁对照正常组织,分别采用反转录荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和免疫组织化学法检测癌组织和癌旁正常组织中miR-449a及PLAGL2的表达水平;分析二者与患者临床病理特征的关系及其在癌组织的表达水平的相关性。结果qRT-PCR结果显示miR-449a在癌组织的相对表达水平为(0.37±0.17),显著低于癌旁正常组织(P<0.05);免疫组化检测结果显示PLAGL2在癌组织的阳性表达率(68.89%)显著高于正常组织(31.11%)(P<0.05)。miR-449a、PLAGL2表达水平与临床分期有关(P<0.05),与其他病理特征无关(P>0.05)。癌组织中miR-449a表达水平与PLAGL2呈负相关(r=-0.358,P<0.05)。Kaplan-Meier分析结果显示,癌组织中miR-449a高表达组的生存率显著高于低表达组(P<0.05),PLAGL2阴性表达组的生存率显著高于阳性表达组(P<0.05)。结论卵巢癌癌组织中miR-449a相对表达量较低,PLAGL2蛋白阳性表达率较高,且二者均与临床病理特征及预后密切相关,推测miR-449a、PLAGL2均参与卵巢癌的发生发展,可作为评估患者预后的重要指标。

微小核糖核酸-1256抑制后的钙结合蛋白39上调激活腺苷酸活化蛋白激酶信号传导保护人成骨细胞免受地塞米松诱导的氧化损伤

目的:探索微小核糖核酸-1256(miR-1256)对腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号传导和地塞米松(Dex)诱导的成骨细胞损伤的潜在影响。方法:分别培养hFOB1.19成骨细胞和原代人成骨细胞,地塞米松(1μmol/L,48 h)干预两种细胞,使用miR-1256前体的慢病毒(lv-premiR-1256)、miR-1256反义慢病毒(lv-antagomiR-1256)转染两种细胞。实时荧光定量PCR(qPCR)法检测miR-1256和钙结合蛋白39(CAB39)的mRNA表达水平,Western blot法检测miR-1256和CAB39蛋白表达水平,CCK-8法检测细胞活力,台盼蓝染色法检测细胞死亡及细胞凋亡,RNA下拉检测miR-1256和CAB39的结合,Promega试剂盒检测CAB39的3’非翻译区(3’-UTR)荧光素酶报告基因活性,全自动荧光化学发光分析仪进行活性氧检测。统计学分析采用单因素方差分析。结果:miR-1256主要位于细胞质中,直接与CAB39的mRNA结合。在hFOB1.19细胞和原代人成骨细胞中,异位miR-1256过表达后,CAB39 3’-UTR荧光素酶报告基因活性及其表达下调;miR-1256抑制后,CAB39 3’-UTR荧光素酶报告基因活性及其表达升高。miR-1256的过表达降低了AMPKα1-乙酰辅酶A羧化酶(ACC)的磷酸化和AMPK的活性,但抑制miR-1256后上述活性增强。抑制miR-1256可增加NADPH活性和Nrf2级联基因的mRNA表达,从而抑制Dex诱导的hFOB1.19细胞和人成骨细胞的氧化损伤和细胞毒性。结论:miR-1256抑制后的CAB39上调激活了AMPK信号传导,从而保护人成骨细胞免受Dex诱导的氧化损伤。

视网膜母细胞瘤结合锌指蛋白1调控肥胖和肿瘤信号通路研究综述

视网膜母细胞瘤结合锌指蛋白1(retinoblastoma-interacting zinc finger protein 1,RIZ1)基因,又称PRDM2(positive regulatory domain 2)基因,是PRDM基因家族一员,其蛋白序列包含1个PR结构域、1个核激素受体结合基序、8个锌指结构域和1个视网膜母细胞瘤蛋白(retinoblastoma protein,Rb)相互作用基序。RIZ1主要定位于细胞核内,在核内发挥转录抑制因子、基因调控、蛋白质-蛋白质相互作用等功能。RIZ1是代谢通路的重要参与者,其通过调控代谢相关基因影响基础代谢,抑制肥胖的形成;RIZ1功能突变或含量不足与多种肿瘤发生发展相关,其通过激活下游致癌基因或调控代谢参与肿瘤进程。RIZ1通过v-akt鼠科胸腺瘤病毒癌基因同源物Ⅲ(v-akt murine thymoma viral oncogene homolog 3,AKT3)、胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor 1,IGF-1),以及作为协同激活剂等方式分别调控AKT/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、IGF-1、雌激素这3条肿瘤和肥胖相关分子信号通路。3条分子通路功能有差异且其下游分子存在交叉,提示RIZ1在不同年龄、性别和器官中的作用可能不同。详细研究RIZ1与RIZ2在代谢进程中的调控作用有助于全面了解RIZ1参与肥胖和肿瘤形成的机制。未来基于RIZ1靶点进行诊断研究或功能恢复可能对代谢性疾病和肿瘤的诊断和治疗有重要意义。

2型糖尿病患者血清E盒锌指蛋白1和泛素化特异性蛋白酶22表达水平与糖脂代谢及胰岛素抵抗的关系

目的检测2型糖尿病患者血清E盒锌指蛋白1(ZEB1)和泛素化特异性蛋白酶22(USP22)基因的表达水平,分析两者与糖脂代谢及胰岛素抵抗的关系。方法选择2020年6月至2023年6月苏州大学附属第一医院诊治的120例2型糖尿病患者为研究对象(糖尿病组),同时选择同期在该院进行体检的120例健康者作为对照组。采用qRT-PCR法检测血清ZEB1 mRNA和USP22 mRNA表达水平;Pearson法分析2型糖尿病患者血清ZEB1 mRNA和USP22 mRNA表达水平的相关性,及两者与体重指数(BMI)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FIns)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素敏感性指数(ISI)、胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)相关性;多元线性回归分析2型糖尿病患者血清ZEB1 mRNA和USP22 mRNA表达水平的影响因素。结果糖尿病组患者的BMI、TG、TC、FPG、FIns、HOMA-IR、ZEB1 mRNA、USP22 mRNA水平明显高于对照组,ISI、HOMA-β明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。经Pearson相关分析显示,2型糖尿病患者血清ZEB1 mRNA和USP22 mRNA表达水平正相关(r=0.425,P<0.001);血清ZEB1 mRNA和USP22 mRNA表达水平均与FPG、FIns、HOMA-IR呈正相关(P<0.05),均与ISI、HOMA-β呈负相关(P<0.05)。多元线性回归分析显示,FIns升高、ISI降低是血清ZEB1 mRNA表达水平的影响因素(P<0.05);FPG升高是USP22 mRNA表达水平的影响因素(P<0.05)。结论2型糖尿病患者血清中ZEB1 mRAN和USP22 mRAN表达具有正相关关系,且两者与部分糖脂代谢和胰岛素抵抗指标具有相关性。

转化生长因子-β受体Ⅱ环状RNA通过调节核糖核酸结合蛋白2/胚胎致死性异常视觉样蛋白1促进前列腺癌发生发展

目的探讨前列腺癌细胞中转化生长因子-β受体Ⅱ环状RNA(circTGFBR2)调节核糖核酸结合蛋白2(PTBP2)/胚胎致死性异常视觉样蛋白1(ELAVL1)激活SMAD2信号途径促进前列腺癌发生发展。方法利用生物信息学方法, 寻找与circTGFBR2结合microRNA以及其他相关蛋白结合位点, 以及与PTBP2存在相互作用的RNA结合蛋白。PC3转染pcDNA3.1-circTGFBR2后, 实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测circTGFBR2的表达。PC3细胞过表达circTGFBR2同时敲低微小RNA(microRNA, miR)-29b, 蛋白质印迹法(Western blot)检测ALK5、SMAD2及p-SMAD2表达。PC3分别转染pcDNA3.1-circTGFBR2及对照质粒后, 利用circTGFBR2特异性探针进行pulldown, 检测PTBP2与circTGFBR2的相互作用。过表达circTGFBR2与ELAVL1, 检测细胞上皮-间充质转化(EMT)的标志基因E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及ZMYM1表达, 以及Transwell检测细胞迁移。组间比较应用单因素方差分析。结果分析结果显示circTGFBR2存在多个miR-29b结合的位点, ALK5(又名TGFBR1)mRNA 3’端非编码区(3’UTR)同样存在miR-29b的结合位点, 并证实PTBP2与另一个RNA结合蛋白ELAVL1存在相互作用。用转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激PC3细胞发现, circTGFBR2的表达高于对照组(1.83±0.02比1.03±0.02, F=2 832.200, P<0.01)。PC3分别转染pcDNA3.1-circTGFBR2及对照质粒后, RT-qPCR检测circTGFBR2的表达, 可见circTGFBR2组高于对照组(176.41±1.21比1.04±0.02, F=63 426.15, P<0.01)。应用miR-29b抑制剂或circTGFBR2处理细胞后ALK5的蛋白水平明显高于对照组, 应用miR-29b抑制剂同时过表达circTGFBR2后进一步增加ALK5的表达(分别为0.15±0.01、0.48±0.02、0.55±0.01、0.74±0.01, F=1268.314, P<0.01), 并且SMAD2(分别为1.14±0.02、1.28±0.02、1.42±0.01、1.5±0.25, F=4.852, P<0.01)和p-SMAD2(分别为0.18±0.02、0.36±0.01、0.65±0.01、0.94±0.02, F=1663.667, P<0.01)的磷酸化水平也呈相同趋势。Pulldown-MS实验, 多个蛋白质能与circTGFBR2结合, 并证实PTBP2与circTGFBR2相互作用。与对照组比较, 敲低前列腺癌细胞PTBP2或过表达circTGFBR2时, 间质标志基因Vimentin表达高于对照组, 而上皮样标志基因E-cadherin表达低于对照组, 当同时过表达circTGFBR2并敲低PTBP2会逆转上述结果(Vimentin分别为0.22±0.02、0.87±0.02、0.85±0.02、0.6±0.01, F=1319.52, P<0.01;E-cadherin分别为0.80±0.01、0.45±0.03、0.36±0.02、0.9±0.02, F=614.919, P<0.01)。当过表达circTGFBR2或高表达ELAVL1时, PTBP2与ELAVL1的相互作用减弱, 细胞EMT的标志基因E-cadherin表达低于对照组, Vimentin及ZMYM1表达高于对照组, Transwell检测细胞迁移高于对照组, 而当同时高表达ELAVL1及circTGFBR2时, 上述趋势会进一步增强(Vimentin分别为0.22±0.02、0.87±0.02、0.85±0.02、0.6±0.01, F=1 319.52, P<0.01;E-cadherin分别为0.93±0.02、0.76±0.02、0.43±0.02、0.27±0.01, F=1 108.46, P<0.01;ZMYM1分别为0.24±0.01、0.53±0.02、0.32±0.01、1.04±0.02, F=2 023.794, P<0.01)。结论 circTGFBR2通过调节PTBP2/ELAVL1激活SMAD2信号途径促进前列腺癌发生发展。

人参皂苷Rd对锌指E盒结合蛋白1抑制脑胶质瘤细胞增殖和血管生成的影响

目的:探讨人参皂苷Rd(ginsenoside Rd,GS-Rd)对锌指E盒结合蛋白1(Zinc-finger E-box binding protein 1,ZEB1)在脑胶质瘤血管生成中的分子调控机制的影响。方法:采用q RT-PCR检测ZEB1在脑胶质瘤细胞系中的表达。采用分子对接模拟实验预测与ZEB1结合的小分子。构建ZEB1过表达/沉默表达细胞系研究ZEB1在脑胶质瘤中的调控作用,采用Western blot检测血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)的蛋白表达水平,通过CCK-8实验、血管形成实验检测GS-Rd处理对细胞增殖和血管生成能力的影响。结果:ZEB1在脑胶质瘤细胞中高表达,且促进脑胶质瘤细胞增殖和血管生成。GS-Rd被预测到能与ZEB1结合,并且能明显抑制脑胶质瘤细胞增殖和血管生成。回复实验结果显示,GS-Rd处理可显著抑制ZEB1过表达诱导的脑胶质瘤细胞增殖和血管生成。结论:该研究证实了GS-Rd通过结合ZEB1抑制脑胶质瘤血管生成的分子机制,应用GS-Rd或抑制ZEB1功能可能是抑制脑胶质瘤血管生成和肿瘤生长的可行途径。

核糖核酸-蛋白质复合物规模化富集与鉴定技术的研究进展

核糖核酸(RNA)在细胞中并非单独存在,从它们产生到被降解的过程中与大量蛋白质发生相互作用,RNA结合蛋白(RNA-binding proteins,RBPs)能与RNA结合形成RNA-蛋白质复合物(RP复合物),并以这种复合物的形式发挥生理功能。RNAs或RBPs任一组分的异常与缺失都会影响RP复合物的正常生理功能,从而导致疾病的发生,如代谢异常、肌肉萎缩症、自身免疫性疾病和癌症。因此,定性定量分析RBPs及其在正常细胞和肿瘤细胞中与RNAs靶标之间的复杂相互作用网络有助于挖掘RP复合物在肿瘤发生发展中的作用,开发肿瘤生物标志物和新的治疗方式。要深入研究和理解RNAs与RBPs的相互作用网络,须依赖组学技术对RP复合物进行大规模鉴定。而作为在组学层面系统性解析RP复合物组成、含量和功能的第一步,大规模富集RP复合物极具挑战性。为了解决这一难题,研究者们发展了各种富集鉴定策略。该文针对RP复合物富集策略的最新进展进行了综述,包括紫外光交联和免疫沉淀(crosslinking and immunoprecipitation,CLIP)及其衍生技术、基于“点击化学”的富集策略和基于相分离的富集策略,比较分析了它们的技术原理、优缺点,以方便研究者们选择合适的策略来解决感兴趣的生物学问题。该文最后总结了当前的RP复合物富集方法仍然存在富集效率低和操作繁琐等亟需解决的技术挑战,为富集策略的发展提供了研究方向。

膀胱尿路上皮癌组织中E盒结合锌指蛋白2、E-钙黏附蛋白的表达变化及其意义

目的观察膀胱尿路上皮癌组织中E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)和E-钙黏附蛋白(E-cadherin)的表达变化,并探讨其意义。方法选取57例份膀胱尿路上皮癌患者的肿瘤组织标本为观察组,15例份正常膀胱组织标本为对照组,采用免疫组化SP法检测两组ZEB2和E-cadherin蛋白。分析ZEB2、E-cadherin蛋白表达与膀胱尿路上皮癌临床病理参数的关系及二者表达的相关性。结果观察组、对照组ZEB2蛋白表达阳性率分别为50.9%(29/57)、13.3%(2/15),二者相比,P<0.05。观察组、对照组E-cadherin蛋白表达阳性率分别为33.3%(19/57)、80%(12/15),二者相比,P<0.05。ZEB2蛋白表达与膀胱尿路上皮癌患者TNM分期、是否存在淋巴结转移情况有关,P均<0.05。E-cadherin蛋白表达与膀胱尿路上皮癌患者病理分级、TNM分期有关,P均<0.05。Spearman等级相关性分析表明膀胱尿路上皮癌组织中ZEB2、E-cadherin蛋白的表达呈负相关(r=-0.611,P=0.000)。结论膀胱尿路上皮癌组织中ZEB2蛋白高表达、E-cadherin蛋白在膀胱尿路上皮癌组织中低表达。ZEB2、E-cadherin的异常表达可能与膀胱尿路上皮癌的发生、发展有关。

子宫内膜癌组织和血清中E盒结合锌指蛋白表达及临床意义

目的研究E盒结合锌指蛋白(ZEB)1在子宫内膜癌、子宫内膜不典型增生和正常子宫内膜组织中的阳性表达程度和血清蛋白浓度,探讨其与子宫内膜癌发生、发展的关系。方法随机选择116例子宫内膜组织,其中正常内膜组织20例,不典型增生内膜15例,内膜癌组织81例,应用免疫组织化学发进行标记染色,以检测在三种组织中ZEB1蛋白的表达情况。其次应用酶联免疫吸附试验法检测20例正常内膜、15例不典型增生、61例内膜腺癌、12例特殊类型癌(共108例)患者血清中ZEB1蛋白表达水平。结果 ZEB1蛋白在子宫内膜癌、不典型增生及正常内膜中阳性率逐渐下降(P=0.000)。ZEB1蛋白在子宫内膜癌、不典型增生、正常内膜血清中表达水平逐渐下降,其表达水平与组织表达水平呈正相关。结论ZEB1蛋白与子宫内膜癌的发生、发展有关,有可能成为子宫内膜癌早期诊断及判断预后的一个客观依据。

miR-9通过靶向E盒结合锌指蛋白2调控小细胞肺癌的恶性生物学行为及其可能的机制

目的:探讨miR-9通过靶向E盒结合锌指蛋白2(zinc finger E-box binding homeobox 2,ZEB2)对小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)细胞生物学行为的调控作用,分析miR-9在SCLC中的作用及其工作机制。方法:采用qPCR、WB和免疫组化方法检测于2018年2月至2019年11月于河北医科大学第四医院肿瘤内科接受手术治疗的67例SCLC患者癌组织及癌旁组织中ZEB2的表达。采用TargetScan预测miR-9的潜在靶基因并通过双荧光素酶报告基因试验、qPCR和WB法进行验证。CCK-8法、流式细胞术和Transwell实验检测miR-9和ZEB2过表达对NCI-H446的生物学行为影响,WB法检测对细胞中E-cadherin,N-cadherin和Vimentin蛋白表达的影响。利用miR-9过表达NCI-H446细胞构建SCLC裸鼠移植瘤模型,观察miR-9对裸鼠移植瘤生长的影响。结果:SCLC组织中ZEB2的mRNA和蛋白表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.01)。miR-9在ZEB2的3'UTR上具有潜在的结合位点,与对照组相比,miR-9过表达组NCI-H446细胞中ZEB2的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),细胞增殖、迁移和侵袭能力均显著下降(P<0.05或P<0.01),促EMT蛋白表达减少,而同时过表达ZEB2能够逆转上述影响。体内实验中,miR-9过表达组移植瘤体积、重量均明显低于对照组(P<0.05或P<0.01)。miR-9组裸鼠肿瘤组织中和ZEB2蛋白的表达均较对照组明显降低(P<0.01)。结论:miR-9通过靶向调控ZEB2从而抑制SCLC细胞的生物学行为以及NCI-H446裸鼠移植瘤的生长。

骨髓增生异常综合征患者外周血单个核细胞中视网膜母细胞瘤蛋白结合锌指结构基因1的表达

目的探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者外周血单个核细胞(PBMC)中视网膜母细胞瘤蛋白结合锌指结构基因1(RIZ1)的表达及其临床意义。方法选取2012年7月至2015年7月于新乡医学院第一附属医院收治的MDS患者86例为研究对象(MDS组),并选取同期体检健康者90例作为对照组,采用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot法检测PBMC中RIZ1蛋白及其mRNA表达水平,并分析RIZ1表达与MDS患者临床病理特征的关系。结果对照组和MDS组受试者PBMC中RIZ1 mRNA表达水平分别为1.73±0.41和0.47±0.18,MDS组患者PBMC中RIZ1 mRNA表达水平显著低于对照组(P<0.05)。对照组和MDS组受试者PBMC中RIZ1蛋白表达水平分别为1.32±0.36和0.35±0.22,MDS组患者PBMC中RIZ1蛋白表达水平显著低于对照组(P<0.05)。RIZ1蛋白表达与MDS患者的年龄、性别、白细胞计数、血红蛋白水平及血小板计数无关(P>0.05),而与骨髓原始细胞比例、世界卫生组织(WHO)分型及染色体核型有关(P<0.05)。结论 RIZ1在MDS患者PBMC中呈低水平表达,并与患者的骨髓原始细胞比例、WHO分型及染色体核型显著相关,这为MDS的早期诊断和靶向治疗提供了新的思路。

β-连环素和锌指E盒结合的同源盒蛋白1在膀胱癌组织的异常表达及意义

目的检测β连环素(β-catenin)和锌指E盒结合的同源盒蛋白1(ZEB1)分子在膀胱癌组织中的表达,分析二者的关联及其在膀胱癌发生、发展中的作用。方法收集79例手术切除的膀胱癌组织标本,应用EnVision免疫组化检测β-catenin、ZEB1蛋白的表达及分布。分析二者的相关性,并探讨其与患者临床病理特征之间的关系。结果β-catenin在膀胱癌组织中的表达具有明显的异质性,可分布在胞膜、胞质或胞核内,在较低临床分期和较低病理分级膀胱癌中主要以胞膜和胞质表达为主,而在较高临床分期和较高病理分级膀胱癌中主要以胞质和胞核表达为主;ZEB1在膀胱癌组织中表达主要位于胞核中,并且表达强度随着肿瘤病理分级和临床分期的增加而升高,二者表达具有明显的相关性。结论膀胱癌组织中β-catenin和ZEB1的异常表达与肿瘤临床分期、病理分级及有无淋巴结转移相关,且β-catenin和ZEB1的表达具有明显的相关性,二者联合应用,对膀胱癌的准确诊断和预后分析有一定价值。

肺腺癌中锌指E-盒结合同源异型盒蛋白-1、-2和增殖细胞核抗原表达及意义

目的检测肺腺癌中锌指E-盒结合同源异形盒蛋白(ZEB)-1、ZEB-2和增殖细胞核抗原(PCNA)标记的增殖指数的关系。方法 59例肺腺癌患者临床资料及术后蜡块组织作为观察组,同期肺肿物切除后距肿物边缘>3 cm肿瘤周围正常肺组织59例作为对照组,应用免疫组化方法检测两组中ZEB-1、-2和PCNA的表达。结果两组中ZEB-1、-2和PCNA的阳性率差别显著,观察组中ZEB-1、-2和PCNA表达的阳性率与肿瘤的最大径、肿瘤的胸膜累犯密切相关,PCNA表达的阳性率与淋巴结转移及是否伴有坏死密切相关。观察组中ZEB-1和PCNA的表达呈正相关。结论肺腺癌术后组织中ZEB-1、-2和PCNA高表达,不仅对肿瘤的形成有重要意义,还可以促进肿瘤的进展,尤其是PCNA高表达可能对肿瘤进展有多种生物学意义。