烟草C2H2锌指蛋白转录因子家族成员的鉴定与表达分析

C2H2锌指蛋白转录因子家族在真核生物中具有重要的生物学功能,广泛参与植物叶的发生、花器官的调控、侧枝的形成及逆境胁迫等生命过程。植物C2H2锌指蛋白不仅结合DNA和RNA,而且与蛋白质之间相互作用。本研究利用普通烟草(Nicotiana tabacum)基因组数据库,运用Blastp比对,结合Pfam和SMART分析,鉴定了118条普通烟草C2H2锌指蛋白家族成员;对烟草C2H2锌指蛋白家族进行了进化树分析、结构域分析、物理化学性质分析、染色体定位、基因结构分析、三维结构分析及组织表达分析等。结果表明:不同成员的氨基酸长度差异较大;系统进化及结构域分析显示,所有C2H2家族成员可以被分为5个亚家族,同一亚家族成员之间在结构域和理化性质上呈现较高一致性;每个成员都含有C2H2结构域,在数量上存在较大差异;将所有基因家族成员定位在22条染色体上;组织表达分析表明,每个C2H2亚家族都有成员在不同组织中表达,在叶及根中有些基因的表达量较高。

锌指蛋白转录因子KLFs家族与心血管疾病

心血管疾病（cardiovasculardisease）是一系列与心脏血管相关的循环系统疾病。循环系统是指人体内运送血液的器官和组织，主要包括心脏和血管（动脉、静脉、微血管）。心血管疾病以血管病变为主要病理特征，其主要诱因包括炎症反应、内皮细胞损伤、脂代谢异常、血栓和动脉粥样硬化等。在诸多心血管疾病中，危害性最大患病人数最多的有心肌肥大、动脉粥样硬化、糖尿病、冠心病及肥胖等。

锌指蛋白转录因子5在人结直肠癌中的表达和意义

目的探讨锌指蛋白转录因子5(KLF5)在人结直肠癌中表达的规律及临床意义。方法运用免疫组织化学(EnVision法)检测100例人结直肠癌标本及40例癌旁正常黏膜标本KLF5蛋白的表达,并分析其与对应的临床病理数据的关系。另外运用反转录PCR法对手术后50例结直肠癌新鲜标本及对应离肿瘤5 cm以上的正常结直肠黏膜标本的KLF5基因mRNA的表达进行检测及分析。结果 (1)在100例结直肠癌标本中KLF5的阳性表达率为84.5%,在高、中、低分化腺癌中的表达率分别为64.0%、93.7%、100.0%,40例癌旁正常黏膜标本中KLF5表达极低,几乎无强阳性表达,不同肿瘤分化程度KLF5阳性表达率差异有统计学意义(P<0.01)。KLF5表达与患者年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤大小及大体分型无关(P>0.05),与肿瘤浸润深度、分化程度、淋巴转移情况及Duke's分期显著相关(P<0.05)。(2)正常结直肠黏膜标本中KLF5 mRNA阳性表达率为26.0%(13/50),结直肠癌标本中KLF5 mRNA阳性表达率为90.0%(45/50),两者差异有统计学意义(P<0.01)。结论 KLF5基因在人结直肠癌组织中表达上调,不同病理分期、不同分化程度阳性表达有差异,KLF5或许参与了人结直肠恶性肿瘤的发生、发展过程,KLF5的检测对人结直肠癌的诊断、治疗及预后有一定参考价值。

Y-Box结合蛋白1/锌指蛋白转录因子5轴对前列腺癌细胞成瘤性的影响及其机制

目的探讨Y-Box结合蛋白1(YB-1)通过调控锌指蛋白转录因子5(KLF5)对前列腺癌细胞成瘤能力的影响。方法采用对照和YB-1短发卡RNA(shRNA)慢病毒感染感染人前列腺癌细胞株LNCaP,构建对照组和YB-1 KD组细胞,采用细胞计数试剂盒(CCK-8),EdU染色、克隆形成实验和体内移植瘤实验分析两组细胞的增殖和生长能力。采用荧光定量和蛋白质印迹法(Western blot)分析YB-1的靶基因KLF5 mRNA和蛋白表达水平。组间计量数据比较采用t检验。结果对照组细胞吸光度(A)值(2.04±0.11)明显高于YB-1 KD组(1.36±0.11),差异有统计学意义(t=10.930,P<0.05)。对照组细胞EdU阳性率[(85.41±4.13)%]明显高于YB-1 KD组[(63.34±5.70)%],差异有统计学意义(t=7.680,P<0.05)。对照组细胞克隆形成率[(76.72±5.51)%]明显高于YB-1 KD组[(53.30±4.93)%],差异有统计学意义(t=7.759,P<0.05)。对照组体内成瘤体积[(806.90±60.26)mm3]明显高于YB-1 KD组[(507.39±64.94)mm3],差异有统计学意义(t=10.690,P<0.05)。对照组成瘤重量[(7.01±0.92)g]明显高于YB-1 KD组[(4.80±0.73)g],差异有统计学意义(t=5.942,P<0.05)。对照组细胞KLF5 mRNA和蛋白表达水平(1.27±0.05、1.08±0.14)明显高于YB-1 KD组(0.56±0.11、0.53±0.09),差异有统计学意义(t=14.100、8.191,P<0.05)。结论YB-1蛋白参与前列腺癌细胞的增殖和成瘤效应,主要通过调节KLF5的表达水平来实现。

纺锤体蛋白、锌指转录因子和紧密连接蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系

目的 分析胃癌病人癌组织中纺锤体蛋白(SPIN1)、锌指转录因子(Slug)和紧密连接蛋白(Claudin-1)三种蛋白的表达情况与其临床病理特征的相关性。方法 选取贵州医科大学附属医院2019年6月至2021年7月确诊并收治的84例胃癌病人,按照分期分为对照组(早期胃癌)和实验组(晚期胃癌)两组,使用ELISA检测胃癌组织中的SPIN1、Slug和Claudin-1三种蛋白表达情况并分析其间的关系。结果 两组病人在一般资料上差异无统计学意义(P>0.05),在年龄、饮酒史和胃部疾病上差异有统计学意义(P<0.05),实验组胃癌病人SPIN1和Slug显著高于对照组胃癌病人(P<0.05),且实验组Claudin-1显著低于对照组胃癌病人(P<0.05),对照组和实验组的肿瘤长径[≥5 mm:4(9.52%)比32(76.19%)]、是否存在淋巴结转移[阳性:5(11.90%)比37(88.10%)]之间均差异有统计学意义(P<0.05)。结论 胃癌病人SPIN1、Slug和Claudin-1的表达情况与胃癌分期和肿瘤长径与临床病理特征之间存在一定相关性。

微小RNA-145通过靶向锌指蛋白转录因子5抑制甲状腺乳头状癌K1细胞的增殖及侵袭

目的观察微小RNA(miRNA,miR)-145通过调节锌指蛋白转录因子5(KLF5)对甲状腺乳头状癌K1细胞增殖及侵袭能力的影响。方法利用TargetScan和PicTar对人甲状腺乳头状癌K1细胞株的miR-145靶基因进行预测,采用双荧光素酶报告基因验证miR-145对靶基因的直接调控。应用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测转染miR-145模拟物及miR-145模拟物同时过表达KLF5的甲状腺乳头状癌K1细胞在4 d的吸光度(A450)值以判断其增殖能力。应用平板克隆形成实验检测转染miR-145模拟物及miR-145模拟物同时过表达KLF5的甲状腺乳头状癌K1细胞孵育2周后克隆细胞的数量以判断其克隆能力。应用Transwell侵袭实验检测转染miR-145模拟物及miR-145模拟物同时过表达KLF5的甲状腺乳头状癌K1细胞孵育48 h后穿膜细胞数以判断其侵袭能力。结果TargetScan和PicTar软件预测显示KLF5基因是miR-145的潜在靶基因。双荧光报告基因的相对荧光值显示,与共转染miR-145模拟物和KLF5-mt组比较,共转染miR-145模拟物和KLF5-wt组荧光素酶活性显著下降(t=14.907,P<0.01)。CCK-8实验结果显示,miR-145模拟物转染组K1细胞在4 d检测到的A450 nm值(0.433±0.003)明显低于阴性对照组及共转染miR-145模拟物和过表达KLF5组(0.534±0.004、0.522±0.005),差异有统计学意义(t=29.954、22.816,P<0.01)。而阴性对照组与共转染miR-145模拟物和过表达KLF5组比较,差异无统计学意义(t=3.035,P>0.05)。平板克隆实验结果显示,miR-145模拟物转染组K1细胞克隆的形成数[(67.00±3.52)个]明显低于阴性对照组及共转染miR-145模拟物和过表达KLF5组[(113.00±4.16)、(109.00±2.52)个],差异有统计学意义(t=10.281、12.124,P<0.01)。而阴性对照组与共转染miR-145模拟物和过表达KLF5组比较,差异无统计学意义(t=2.774,P>0.05)。Transwell侵袭实验结果显示,miR-145模拟物转染组K1细胞穿过基底膜细胞数[(54.00±1.15)个]明显低于阴性对照组及共转染miR-145模拟物和过表达KLF5组[(127.00±4.58)、(119.00±4.51)个],差异有统计学意义(t=35.839、23.579,P<0.01)。而阴性对照组与共转染miR-145模拟物和过表达KLF5组比较,差异无统计学意义(t=1.906,P>0.05)。结论miR-145通过靶向调节KLF5抑制甲状腺乳头状癌K1细胞的增殖及侵袭。

锌指蛋白转录因子5与转录共激活因子在甲状腺乳头状癌组织的表达及其临床意义

目的探讨锌指蛋白转录因子5(KLF5)与转录共激活因子(TAZ)在甲状腺乳头状癌组织的表达及两者之间的关系。方法采用免疫组织化学法分别检测108例甲状腺乳头状癌及相应癌旁正常甲状腺组织中KLF5与TAZ的表达。应用SPSS25.0统计软件分析,采用χ^2检验。结果KLF5在甲状腺乳头状癌组织及相应癌旁正常甲状腺组织中的阳性表达率分别为75.0%,18.5%,差异有统计学意义(χ^2=69.198,P<0.05)。KLF5的表达与临床分期、肿瘤大小、腋下淋巴结转移及甲状腺外侵犯显著相关(χ^2=6.925、8.361、6.008、9.692,P<0.05),而与年龄、性别及多灶性无相关(χ^2=0.847、0.014、0.015,P>0.05)。TAZ蛋白在甲状腺乳头状癌组织及相应癌旁无瘤组织中的阳性表达率分别为69.4%和22.2%,差异有统计学意义(χ^2=48.503,P<0.05)。TAZ的表达与临床分期、肿瘤大小、腋下淋巴结转移及甲状腺外侵犯显著相关(χ^2=5.875、6.999、12.026、10.878,P<0.05),而与年龄、性别及多灶性无明显相关(χ^2=0.591、0.096、0.498,P>0.05)。甲状腺乳头状癌组织中KLF5与TAZ均高表达,两者呈正相关(r=0.592,P<0.05)。结论KLF5与TAZ的异常高表达与甲状腺乳头状癌的发生发展密切相关。

锌指蛋白转录因子5在肾癌组织中的表达及其临床意义

目的检测锌指蛋白转录因子5(KLF5)在肾癌组织中的表达,探讨其临床意义。方法选择2009年5月—2012年10月南昌大学附属赣州医院收治的肾癌患者50例,收集所有患者手术切除的肾癌组织及其中15例患者的癌旁组织,采用免疫组织化学S-P法检测KLF5的表达,并分析其与肾癌患者临床病理特征的关系。结果肾癌组织和癌旁组织均有一定水平的KLF5表达,肾癌组织KLF5阳性表达率〔84.0%(42/50)〕高于癌旁组织〔26.7%(4/15),P=0.000〕。不同性别、年龄、肿瘤直径肾癌患者KLF5阳性表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。不同组织学分型、组织学分级肾癌患者KLF5表达强度比较,差异均无统计学意义(P>0.05);不同临床分期及有无淋巴转移肾癌患者KLF5表达强度比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 KLF5阳性表达率在肾癌组织中明显升高,其表达强度与肾癌临床分期及淋巴结转移密切相关,或许可以成为判断肾癌发生、发展、预后的一个理想指标。

低氧诱导大鼠肺动脉重塑对肺动脉平滑肌锌指蛋白转录因子5表达的影响

目的 探讨慢性低氧性肺动脉高压（CHPH）大鼠模型肺动脉重塑与肺动脉平滑肌锌指蛋白转录因子5（KLF5）蛋白表达的关系.方法 雄性SD大鼠20只按随机数字表法分为常氧组和低氧组,每组10只,低氧组放入全自动低氧箱饲养,21 d后用右心室测压法测量右心室收缩压（RVSP）及平均右心室压（mRVP）;计算右心肥厚指数RV/（LV＋S）;取右肺组织包埋切片行HE染色测量肺小动脉血管管腔面积,计算血管中膜厚度百分比（WT％）;并取切片行免疫荧光检测KLF5的表达;荧光PCR和Western blot法分别检测远端肺动脉平滑肌组织中KLF5 mRNA、蛋白的表达.显微镜下分离大鼠（6只）远端肺动脉平滑肌组织,胶原酶消化法培养大鼠原代肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）,随后置于低氧环境（4％ O2,60 h）培养并获取细胞蛋白检测KLF5的表达.结果 低氧组大鼠RVSP和mRVP与常氧组（28.3±0.4）、（11.3±1.0） mmHg（1 mmHg =0.133 kPa）比较,分别升高至（43.9±1.3）、（26.5±2.3）mmHg（P ＜0.05）;低氧组RV/（LV ＋S）为（0.48±0.03）,明显高于常氧组（0.27±0.01,P＜0.05）;低氧组血管腔占血管区域的比值（WT％）为（46.1±6.6）％,与常氧组（68.7±3.1）％相比显著降低（P＜0.05）;而低氧组WT％（5.6±0.3）％与常氧组（3.7±0.4）％相比显著增加（P＜0.05）;低氧组大鼠肺动脉平滑肌组织KLF5蛋白表达量为常氧组的（22±7）倍,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 CHPH大鼠模型RVSP、mRVP、右心室肥厚指数均升高,同时伴有肺小动脉重塑,这可能与低氧诱导PASMCs中KLF5的表达升高有关.

木薯C2H2型锌指蛋白转录因子家族全基因组鉴定及表达分析

锌指蛋白转录因子(zinc-finger protein transcription factor, ZFP)是一种具有特定结构的蛋白,是真核生物重要转录因子之一,其通过与核内其他因子相互作用,调控各种生理反应,参与植物的生长发育和生物与非生物胁迫。目前对木薯锌指蛋白家族的研究依然较少。本研究利用木薯基因组数据库筛选鉴定了85个木薯C2H2型锌指蛋白转录因子家族成员,利用生物信息学手段分析该家族基因的结构特征和理化性质,结果表明同一C2H2型锌指蛋白家族的基因结构及氨基酸序列长度存在显著差异,大致可分为6个亚家族,各成员具有特征性的锌指结构域,但数量上存在差异;染色体定位显示该家族成员并非定位于木薯所有的18条染色体,在13号和16号染色体上没有C2H2型锌指蛋白家族成员定位。结合已有的转录组数据分析其在不同组织及非生物胁迫下的表达模式,发现各成员在不同组织中的表达模式不同,各组织均有高表达的基因,部分成员无组织表达差异,部分家族成员响应非生物胁迫。因此,木薯C2H2型锌指蛋白转录因子在植物生长发育和响应非生物胁迫功能方面具有重要的作用。

微小RNA-7-5p靶向调节锌指蛋白核转录因子4基因抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖和诱导凋亡的体外研究

目的探讨微小RNA(miR)-7-5p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡及锌指蛋白核转录因子4(KLF4)基因表达调控的影响。方法研究起止时间为2018年3-10月。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-7-5p在人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF及口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量。将miR-7-5p模拟物(miR-7-5p mimics)及阴性对照序列(mimics Control)分别转染至SCC25细胞,分为三组:Control组(未转染的SCC25细胞)、NC组(转染mimics Con-trol的SCC25细胞)、miR-7-5p组(转染miR-7-5p mimics的SCC25细胞)。以qRT-PCR检测miR-7-5p在SCC25细胞中的转染效果;MTT法检测miR-7-5p对SCC25细胞增殖的影响;流式细胞术检测miR-7-5p对SCC25细胞凋亡的影响;通过双荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blotting)检测miR-7-5p对KLF4的靶向关系。结果miR-7-5p在3种口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量[(0.21±0.02)、(0.43±0.04)、(0.48±0.05)]明显低于人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF(1.00±0.09)(P<0.05);转染miR-7-5p mimics能够上调SCC25细胞中miR-7-5p的表达(P<0.05);miR-7-5p过表达能够明显抑制SCC25细胞增殖能力[Control组、NC组72 h吸光度(1.43±0.13)、(1.46±0.15)比miR-7-5p组(0.81±0.09)](P<0.05),并诱导细胞凋亡[Control组、NC组凋亡率(9.48±2.65)%、(10.21±3.02)%比miR-7-5p组(24.41±8.15)%](P<0.05);双荧光素酶报告基因实验结果表明miR-7-5p过表达可抑制KLF4-Wt报告基因载体细胞相对荧光活性;qRT-PCR和Western blotting进一步证实了miR-7-5p能够靶向调节KLF4 mRNA和蛋白表达。结论miR-7-5p直接靶向调控KLF4基因的表达来抑制口腔鳞状细胞癌SCC25细胞增殖,诱导细胞凋亡。

KLF5转录因子在三阴性乳腺癌中的表达及临床意义分析

目的 探讨锌指蛋白转录因子5(KLF5)在三阴性乳腺癌中的表达及临床意义。方法 收集在我院2021年1月至2021年12月行乳腺癌改良根治术的患者乳腺组织样本30例,同时取癌旁正常组织样本30例。采用免疫组化SP法对乳腺癌组织和癌旁正常乳腺组织的KLF5表达进行检测,分析KLF5表达和三阴性乳腺癌临床特征的关系。对30例患者进行为期1年的随访,并根据患者预后情况,将其分为转移组12例和未转移组18例,通过多因素logistic回归分析方法分析影响三阴性乳腺癌转移的因素,建立风险评估模型,经受ROC曲线评估模型诊断效能。结果KLF5在乳腺癌组织表达阳性率为76.66%,明显高于KLF5在和癌旁正常乳腺组织阳性率的33.33%,差异有统计学意义(P<0.05)。KLF5表达和三阴性乳腺癌患者年龄、病理分级、肿瘤大小、月经情况、淋巴结转移无关(P>0.05)。单因素和多因素logistic回归分析,病理分级(P=0.006,OR=2.123)、肿瘤大小(P=0.000,OR=4.349)、KLF5表达(P=0.008,OR=2.280)是三阴性乳腺癌转移的独立影响因素(P<0.05);ROC曲线分析结果表明,上述三种指标联合检测的AUC值最高,为0.931,灵敏度、特异度分别为91.66%、83.33%。结论 KLF5在三阴性乳腺癌组织中表达水平升高,KLF5的表达是三阴性乳腺癌术后转移的独立影响因素,可作为预测三阴性乳腺癌预后风险的分子标志物。

白桦锌指蛋白基因的分离及表达分析

植物锌指蛋白是成员众多的转录因子家族,在植物的生长发育和对非生物胁迫响应等过程中具有重要作用。根据Cys和His残基的数目和位置将锌指转录因子分为C_2H_2、C_8、C6、C_3HC_4、C_2HC、C_2HC5、C_4、CCCH和C_4HC_3九种类型。本实验利用其他物种中已报导的植物逆境胁迫相关的锌指蛋白转录因子基因序列作为信息探针,在白桦基因组数据库中筛选出10个基因,分别是4个C_2H_2型、5个C_3HC_4-RING型和一个CCCH型。通过q RT-PCR技术对筛选的基因在根中的表达模式进行了分析,结果显示Bp ZFP_2、Bp ZFP_3、Bp ZFP_4、Bp ZFP5和Bp ZFP_8的表达受盐和干旱胁迫的显著诱导,表明这些基因参与了逆境胁迫的应答。

老年子宫内膜样腺癌癌组织神经纤毛蛋白2、E盒结合锌指蛋白1对血管生成的作用

目的检测老年子宫内膜样腺癌患者术后组织中神经纤毛蛋白(NRP)2、转录因子E盒结合锌指蛋白(ZEB)1的表达及其对白细胞分化抗原(CD)34阳性的血管生成的作用。方法 133例老年子宫内膜样腺癌患者手术后存留的蜡块及临床资料为研究组,70例老年子宫脱垂或子宫肌瘤患者行子宫全切术后的宫颈组织作为对照组,应用免疫组化方法检测两组中NRP2、ZEB-1的表达和CD34标记的微血管密度(MVD),关注其相关性及临床意义。结果研究组NRP2、ZEB-1蛋白表达阳性率和MVD明显高于对照组,研究组NRP2、ZEB-1表达和MVD均与肿瘤的TNM分期、浸润、脉管累犯和Ki67指数密切相关(P均<0.05)。NRP2、ZEB-1和MVD均具有正相关性。结论子宫内膜样腺癌组织中NRP2、ZEB-1高表达和MVD可以有效促进肿瘤的发生和进展,NRP2和ZEB-1对CD34阳性的血管生成可能有一定促进作用。

脓毒症并发急性肾损伤患者血清HDAC4和KLF5的表达及其临床价值

目的探究脓毒症并发急性肾损伤(AKI)患者血清组蛋白去乙酰基转移酶4(HDAC4)和锌指蛋白转录因子5(KLF5)表达及临床价值。方法选取2020年9月—2022年9月本院收治的60例脓毒症并发AKI患者作为AKI组,选取同期北京市大兴区人民医院收治的75例脓毒症未发生AKI患者作为非AKI组。比较两组的临床资料、血清HDAC4和KLF5水平。ROC分析血清HDAC4和KLF5对脓毒症患者并发AKI的诊断价值。Logistic回归分析影响脓毒症患者并发AKI的因素。结果与非AKI组相比,AKI组患者血清HDAC4、KLF5、降钙素原(PCT)、肌酐(Cr)、序贯性器官衰竭(SOFA)、急性生理学及慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分较高,AKI组血小板计数(PLT)较低,差异有统计学意义(P<0.05)。随着AKI组患者分期升高,血清HDAC4和KLF5水平依次升高,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清HDAC4、KLF5可辅助诊断脓毒症患者是否并发AKI的曲线下面积(AUC)是0.800(95%CI:0.723~0.876)、0.810(95%CI:0.735~0.886);二者联合诊断的AUC为0.908(95%CI:0.856~0.961),均优于各自单独检测(Z=2.277、2.102,P<0.05)。Logistic回归分析显示,APACHEⅡ评分、SOFA评分、HDAC4、KLF5是影响脓毒症患者是否并发AKI的危险因素(P<0.05)。结论脓毒症并发AKI患者血清HDAC4、KLF5水平升高,且二者联合检测对脓毒症并发AKI的诊断效能较高,对评估脓毒症并发AKI有较好的临床诊断价值。

KLF10在多发性骨髓瘤患者中的表达及与预后的关系

目的探究多发性骨髓瘤患者中锌指蛋白转录因子10(KLF10)的表达及其与预后的关系。方法选取2015年1月—2017年1月我院收治的多发性骨髓瘤患者126例作为观察组,选取同期在我院健康体检的健康者120例作为对照组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测受试者血清KLF10水平;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测受试者血清miR-21表达水平;采用Pearson相关性分析法进行多发性骨髓瘤患者血清KLF10、miR-21水平的相关性分析;采用Kaplan-Meier法分析患者血清KLF10、miR-21水平与多发性骨髓瘤患者预后的关系;采用多因素COX回归分析影响多发性骨髓瘤患者预后的危险因素。结果观察组血清KLF10水平低于对照组,血清miR-21水平高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析显示,观察组血清KLF10、miR-21水平呈负相关(r=-0.447,P<0.05);多发性骨髓瘤患者血清KLF10、miR-21水平与患者性别、年龄、免疫球蛋白分型无关(P>0.05),与患者DS分期、是否重度贫血、ECOG评分以及骨髓浆细胞比例有关(P<0.05);Kaplan-Meier生存曲线分析表明,多发性骨髓瘤患者血清KLF10低表达组生存率低于高表达组(χ^(2)=9.651,P=0.032);血清miR-21高表达组生存率低于低表达组(χ^(2)=12.056,P=0.0024);多因素COX回归分析显示,血清KLF10低表达、血清miR-21高表达、DS分期Ⅲ期、重度贫血、ECOG评分>3分和骨髓浆细胞比例>30%是影响多发性骨髓瘤患者发生不良预后的危险因素(P<0.05)。结论多发性骨髓瘤患者血清KLF10表达下调,其表达水平与患者临床病理特征相关,是多发性骨髓瘤患者发生不良预后的危险因素。

薄荷McZFP1基因克隆及表达分析

根据前期茉莉酸甲酯处理的薄荷(Mentha canadensis Linn.)转录组数据分析结果,从薄荷中克隆到McZFP1,并进行了基因和蛋白质特性、组织表达、非生物胁迫处理下的表达、亚细胞定位以及转录自激活活性分析。结果显示:薄荷McZFP1的开放阅读框长度为558 bp,编码185个氨基酸。McZFP1具亲水性,无跨膜结构域,属于不稳定蛋白,包含C2H2保守结构域,含有13个丝氨酸、3个酪氨酸和3个苏氨酸的磷酸化位点。进化树分析结果表明McZFP1与一串红(Salvia splendens Ker-Gawler)SsZFP7的亲缘关系最近。实时荧光定量PCR结果表明:McZFP1在薄荷不定根、茎、根状茎、幼叶、成熟叶和花中均有表达,在根状茎中的相对表达量最高,且受150 mmol·L^(-1)NaCl、300 mmol·L^(-1)甘露醇、200μmol·L^(-1)脱落酸和200μmol·L^(-1)茉莉酸甲酯处理诱导表达。McZFP1定位于细胞核,无转录自激活活性。综上所述,薄荷McZFP1在不同组织中存在表达差异,参与调节激素和非生物胁迫响应过程。

锌指蛋白转录抑制因子145′非翻译区内部核糖体进入位点的活性

目的 检测锌指蛋白转录抑制因子14（positive regulatory domain zinc finger protein 14,PRDM14）5忆非翻译区（5忆untranslated region,5忆UTR）内部核糖体进入位点（internal ribosome entry site,IRES）的活性。方法 PCR扩增PRDM14 5忆UTR各截短序列的基因及全长基因,分别插入至双荧光素酶和红绿荧光报告基因中,构建重组质粒p RL-PRDM14 S1-FL、p RL-PRDM14 S2-FL、p RL-PRDM14 S3-FL及p G-PRDM 14-R。将各重组质粒分别转染HEK293细胞,检测PRDM14 5忆UTR IRES元件的活性、内部剪切位点和自身启动子的活性及影响IRES活性的序列。将重组质粒p RL-FL/5忆UTR分别转染HCT-8/WT、Hep-2、Bel7402/WT和NIH3T3细胞,检测各细胞中PRDM14 5忆UTR IRES元件的活性。结果 PRDM14 5忆UTR具有内部核糖体进入位点元件活性;不具有内部剪切位点和自身启动子活性;PRDM14 5忆UTR的活性激活中心位于25~60 nt,活性抑制中心位于60~95 nt;除NIH3T3细胞外,其他细胞均具有IRES活性。结论 PRDM14 5忆UTR具有典型的IRES活性,为今后深入研究PRDM14表达的调控机制奠定了基础。

珙桐DiZF-CCCH1基因的克隆及表达分析

【目的】珙桐Davidia involucrata有性生殖能力弱是限制其自然更新的主要原因。为研究珙桐种子发育的分子机制,本课题组前期完成了珙桐种子转录组分析,筛选到1个编号为c37849.graph_c0的转录本,其在正常种子中高量表达,而在发育异常的种子中表达量很低,差异表达显著,因此将其作为研究目标。【方法】使用PCR克隆该转录本的全长序列,并利用在线分析工具对其编码氨基酸的序列特征、蛋白结构和系统进化等进行生物信息学分析预测,采用qRT-PCR检测目标基因在珙桐不同组织部位以及种子不同发育阶段中的表达情况。【结果】序列分析确定目标基因为一个编码CCCH型锌指蛋白转录因子的基因,将其命名为DiZF-CCCH1,该基因开放阅读框全长为711 bp,编码236个氨基酸,无内含子,相对分子量26.74 kDa,为不稳定蛋白,其氨基酸序列含有植物特有的RR-TZF结构域,与来源于甜橙Citrus sinensis的CCCH蛋白同源性最高。基因表达模式分析显示,DiZF-CCCH1在种子发育前期的表达量最高,后期表达量降低,在其他组织中仅有微量表达,推测其可能在种子发育过程中发挥重要作用。【结论】对珙桐DiZF-CCCH1基因进行了克隆与初步生物信息学分析,发现其编码的蛋白属于RR-TZF型锌指蛋白,且DiZF-CCCH1可能是珙桐种子发育过程中的重要调控基因,为进一步探索该基因在珙桐生殖发育过程中的功能奠定基础。

KLF8及Snail1在结肠癌中的表达及意义

目的:探讨结肠癌组织中Krüppel样转录因子8(KLF8)、锌指蛋白转录因子1(Snail1)的表达及临床意义。方法:收集2015年11月—2017年11月70例结肠癌组织与30例癌旁正常组织,采用免疫组织化学法检测上述组织中KLF8、Snail1的表达情况,分析两者的相关性及临床病理特征的关系。结果:KLF8在结肠癌组织中的阳性表达率为71. 4%,高于癌旁正常组织20%,差异有统计学意义(P <0. 05); Snail1在结肠癌组织中的阳性表达率为54. 2%,高于癌旁正常组织的30%,差异有统计学意义(P <0. 05)。KLF8和Snail1在结肠癌组织中的表达与TNM分期、浸润深度及淋巴结转移有关(P <0. 05),与年龄、性别、肿瘤大小、分化程度无关(P> 0. 05)。在结肠癌组织中两者表达不存在相关性。结论:KLF8和Snail1在结肠癌组织中高表达,且两者之间不存在相关性,提示KLF8和Snail1两者通过不同的途径参与结肠癌的发生、发展过程。