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环状RNA-ZNF292对缺氧缺血性脑损伤细胞氧化及凋亡的影响
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作者 韩硕 徐涛 +3 位作者 赵亮 戴大伟 张建忠 侯立军 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1341-1348,共8页
目的建立原代神经元缺氧缺血性脑损伤细胞模型,探讨环状RNA-ZNF292(cZNF292)对脑缺血损伤后神经元氧化应激及凋亡的影响。方法选取胎龄为18 d的胎鼠培养原代神经元,采用4、10 mmol/L Na_(2)S_(2)O_(4)和无糖培养基处理细胞1、2、3、4 h... 目的建立原代神经元缺氧缺血性脑损伤细胞模型,探讨环状RNA-ZNF292(cZNF292)对脑缺血损伤后神经元氧化应激及凋亡的影响。方法选取胎龄为18 d的胎鼠培养原代神经元,采用4、10 mmol/L Na_(2)S_(2)O_(4)和无糖培养基处理细胞1、2、3、4 h后复氧培养0、5、15、30 h,建立氧糖剥夺/复氧细胞模型。通过细胞骨架蛋白和β3-微管蛋白免疫荧光染色观察原代神经元的形态变化,FITC标记鬼笔环肽染色观察不同浓度Na_(2)S_(2)O_(4)对原代神经元存活率的影响。采用ELISA检测培养上清液中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脱氢酶(LDH)的表达水平。采用蛋白质印迹法检测细胞中caspase 3及细胞周期蛋白G1(CCNG1)的表达水平。结果成功建立缺氧缺血性脑损伤细胞模型和cZNF292敲减细胞模型,并发现缺氧培养4 h时复氧、10 mmol/L的Na_(2)S_(2)O_(4)对原代神经元的生长抑制率最高,且在复氧培养15 h时细胞中cZNF292表达水平最高,因此选择缺氧培养4 h、复氧培养15 h、10 mmol/L Na_(2)S_(2)O_(4)为最佳实验条件。氧糖剥夺使细胞培养基中ROS和MDA水平上升,SOD和LDH水平下降(P均<0.05);而敲减cZNF292后,细胞培养基中ROS和MDA水平下降,SOD和LDH水平上升(P均<0.05)。敲减cZNF292可使caspase 3和CCNG1表达下降(P均<0.05)。结论脑缺血可以诱导原代神经元cZNF292表达增加,而敲减cZNF292可以缓解原代神经元在缺血缺氧环境下发生的氧化损伤、抑制细胞凋亡及增殖。 展开更多
关键词 环状RNA 锌指蛋白292 氧糖剥夺/复氧 细胞模型 脑缺血 氧化损伤 细胞凋亡
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