小鼠编码锌指蛋白基因zfp637的初步研究

目的观察zfp637基因对肿瘤细胞生长增殖的影响。方法半定量RT-PCR检测zfp637基因在小鼠正常组织与肿瘤细胞株中的表达。设计并合成4对小分子双链RNA，半定量RT-PCR筛选最佳干扰效应位点。将siRNA转染EMT6细胞，转染后144d进行细胞增殖实验。结果zfp637在多数正常组织呈低到中度表达，外周血单个核细胞未见表达。在小鼠肝癌H22，小鼠肝癌细胞Hepal-6，Lewis肺癌LL／2，黑色素瘤细胞B16，淋巴瘤细胞Yac-1和乳腺癌细胞EMT6中均呈现高表达。筛选后表明siRNA-881为最佳干扰效应位点。细胞增殖实验（MTT）显示：转染siRNA后第4d，实验组EMT6细胞增殖明显低于阴性对照组，143d实验组细胞增殖与阴性组相差不明显。结论zfp637基因在不同正常组织和肿瘤细胞株中表达水平不同。zfP637很可能是促进细胞增殖的正调控因素。下调该基因表达能抑制EMT6肿瘤细胞增殖。

新锌指蛋白基因Zfp637真核表达质粒的构建及对乳腺癌EMT6细胞的作用

目的构建锌指蛋白Zfp637真核表达质粒及稳定转染过表达细胞,并观察Zfp637基因对肿瘤细胞生长增殖的影响。方法以正常小鼠脾脏组织cDNA作为模板扩增Zfp637DNA,定向插入到pEGFP-C3真核表达质粒中,酶切片段分析和测序鉴定以确定成功构建pEGFP-Zfp637重组质粒,通过脂质体介导pEGFP-Zfp637重组质粒转染小鼠乳腺癌株EMT6细胞,并且通过G418筛选出稳定转染细胞(Zfp637-EMT6)。荧光显微镜下对Zfp637进行亚细胞定位;RT-PCR检测Zfp637-EMT6细胞中Zfp637基因表达;同时观察细胞生长状况,MTT法测定Zfp637-EMT6细胞的增殖活性。结果重组质粒经鉴定证实具有Zfp637全长cDNA序列,所建立的Zfp637-EMT6细胞能稳定过表达Zfp637基因,并且其细胞生长增殖显著增加。结论成功构建pEGFP-Zfp637真核表达质粒,显示了Zfp637能促进肿瘤细胞增殖,为进一步研究Zfp637基因的功能奠定了基础,并将为恶性肿瘤的基因治疗提供新靶点。