新锌指蛋白基因Zfp637真核表达质粒的构建及对乳腺癌EMT6细胞的作用

目的构建锌指蛋白Zfp637真核表达质粒及稳定转染过表达细胞,并观察Zfp637基因对肿瘤细胞生长增殖的影响。方法以正常小鼠脾脏组织cDNA作为模板扩增Zfp637DNA,定向插入到pEGFP-C3真核表达质粒中,酶切片段分析和测序鉴定以确定成功构建pEGFP-Zfp637重组质粒,通过脂质体介导pEGFP-Zfp637重组质粒转染小鼠乳腺癌株EMT6细胞,并且通过G418筛选出稳定转染细胞(Zfp637-EMT6)。荧光显微镜下对Zfp637进行亚细胞定位;RT-PCR检测Zfp637-EMT6细胞中Zfp637基因表达;同时观察细胞生长状况,MTT法测定Zfp637-EMT6细胞的增殖活性。结果重组质粒经鉴定证实具有Zfp637全长cDNA序列,所建立的Zfp637-EMT6细胞能稳定过表达Zfp637基因,并且其细胞生长增殖显著增加。结论成功构建pEGFP-Zfp637真核表达质粒,显示了Zfp637能促进肿瘤细胞增殖,为进一步研究Zfp637基因的功能奠定了基础,并将为恶性肿瘤的基因治疗提供新靶点。