锌指转录因子GKLF在子宫内膜癌中的表达及其与手术病理分期的相关性

目的:探讨锌指转录因子GKLF/KLF4 mRNA在子宫内膜癌组织及良性子宫内膜组织中的表达,分析其表达的变化与手术病理分期的相关性。方法:采用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测37例子宫内膜癌组织(研究组)和26例良性子宫内膜组织(对照组)中GKLF mRNA表达强度的变化。结果:(1)每份实验标本中均检测到GKLF mRNA表达,子宫内膜癌中的相对表达强度为0．38±0．19,良性内膜组织中的表达强度则为0．72±0．16,与良性内膜组织相比较,内膜癌组织中GKLF mRNA的表达强度降低。经统计学分析差异有统计学意义(P＜0．01);(2)子宫内膜癌组织GKLF mRNA的表达强度依次为Ⅰ期内膜癌0．56±0．12,Ⅱ期内膜癌0．35±0．09,Ⅲ期内膜癌0．17±0．08,子宫内膜癌的手术病理分期愈晚,GKLF mRNA的表达强度愈低,差异有统计学意义(P＜0．01);(3)随着病理分级的增高,GKLF mRNA的表达强度逐渐降低,差异有统计学意义(P＜0．01)。结论:在子宫内膜癌组织中,GKLF表达下调,而且GKLF mRNA的表达水平与子宫内膜癌的临床分期和病理分级呈负相关,提示GKLF可能参与了子宫内膜癌的发生和进展过程。

锌指样转录因子4在肺动脉高压中的研究进展

锌指样转录因子4(KLF4)是一种结构上保守的含锌指转录因子,可调控细胞生长、增殖及分化。KLF4是一种炎症反应调节因子,在血管重塑中发挥重要作用。KLF4通过调控平滑肌细胞表型转换、内皮功能障碍、炎症浸润等参与肺血管重塑。KLF4在血管重塑中的具体机制目前尚不明确,该文就KLF4在血管重塑中的作用展开综述。

脓毒症并发急性肾损伤患者血清HDAC4和KLF5的表达及其临床价值

目的探究脓毒症并发急性肾损伤(AKI)患者血清组蛋白去乙酰基转移酶4(HDAC4)和锌指蛋白转录因子5(KLF5)表达及临床价值。方法选取2020年9月—2022年9月本院收治的60例脓毒症并发AKI患者作为AKI组,选取同期北京市大兴区人民医院收治的75例脓毒症未发生AKI患者作为非AKI组。比较两组的临床资料、血清HDAC4和KLF5水平。ROC分析血清HDAC4和KLF5对脓毒症患者并发AKI的诊断价值。Logistic回归分析影响脓毒症患者并发AKI的因素。结果与非AKI组相比,AKI组患者血清HDAC4、KLF5、降钙素原(PCT)、肌酐(Cr)、序贯性器官衰竭(SOFA)、急性生理学及慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分较高,AKI组血小板计数(PLT)较低,差异有统计学意义(P<0.05)。随着AKI组患者分期升高,血清HDAC4和KLF5水平依次升高,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清HDAC4、KLF5可辅助诊断脓毒症患者是否并发AKI的曲线下面积(AUC)是0.800(95%CI:0.723~0.876)、0.810(95%CI:0.735~0.886);二者联合诊断的AUC为0.908(95%CI:0.856~0.961),均优于各自单独检测(Z=2.277、2.102,P<0.05)。Logistic回归分析显示,APACHEⅡ评分、SOFA评分、HDAC4、KLF5是影响脓毒症患者是否并发AKI的危险因素(P<0.05)。结论脓毒症并发AKI患者血清HDAC4、KLF5水平升高,且二者联合检测对脓毒症并发AKI的诊断效能较高,对评估脓毒症并发AKI有较好的临床诊断价值。

锌指样转录因子4与动脉粥样硬化研究进展

动脉粥样硬化（AS）是引起心血管事件的病理基础,其发病机制尚不明确。目前更倾向于认为AS是一种慢性血管炎症性疾病,血管壁在各种内源性及外界刺激下损伤,多种炎症因子、免疫细胞及相关细胞因子相互作用发挥炎性效应,形成慢性炎症。近来发现,锌指样转录因子（KLF）4是参与调控心血管系统的重要转录因子,能通过不同途径抑制或激活炎性因子,调控血管内皮细胞活化、巨噬细胞极化.

核转录因子KLF4与VEGF启动子上游DNA序列相互作用研究

目的研究体内核转录因子KLF4是否与血管内皮生长因子(VEGF)启动子上游DNA序列相互作用。方法采用染色质免疫沉淀法鉴定人胃癌AGS细胞内KLF4与VEGF启动子上游DNA序列的相互作用,通过检索VEGF基因序列,发现在VEGF基因转录起始位点上游存在3个KLF4结合位点,针对这3个KLF4结合位点核心DNA序列(CACCC)设计3对PCR引物,利用KLF4抗体进行染色质免疫沉淀,PCR扩增。结果针对VEGF上游启动序列3个潜在的KLF4结合位点设计的引物,以KLF4特异性结合的DNA片段为模板,能够扩增出目的条带,与阴性对照组比较差异有显著性意义(P<0.05)。结论体内KLF4可能与VEGF启动子上游DNA序列相互作用。

转录因子KLF4在内皮祖细胞分化过程中的表达及意义

目的探讨转录因子KLF4在内皮祖细胞分化过程中的表达及意义。方法以Ficoll密度梯度离心法从SD大鼠骨髓分离单个核细胞,用含20%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养,以DiI-ac-LDL、FITC-UEA-I双荧光染色和FITC标记的CD133、CD34进行鉴定。细胞免疫化学法检测原代培养7d内皮祖细胞KLF4的表达,RT-PCR法检测原代培养5、10、15d后细胞内KLF4及一氧化氮合酶(eNOS)mRNA的表达。结果经DiI-ac-LDL、FITC-UEA-I双荧光染色鉴定证实获得的细胞为内皮祖细胞。细胞免疫化学检测发现KLF4表达于细胞核内;RT-PCR检测结果显示,5、10、15d大鼠内皮祖细胞的KLF4mRNA表达(分别为0.830±0.017,0.980±0.014,1.090±0.014)逐渐增强(P<0.01),eNOSmRNA表达(分别为0.310±0.008,0.500±0.011,0.650±0.010)也逐渐增强(P<0.01)。结论在内皮祖细胞分化为内皮细胞的过程中,KLF4的表达逐渐增强,并与成熟内皮功能相关。

锌指蛋白转录因子KLFs家族与心血管疾病

心血管疾病（cardiovasculardisease）是一系列与心脏血管相关的循环系统疾病。循环系统是指人体内运送血液的器官和组织，主要包括心脏和血管（动脉、静脉、微血管）。心血管疾病以血管病变为主要病理特征，其主要诱因包括炎症反应、内皮细胞损伤、脂代谢异常、血栓和动脉粥样硬化等。在诸多心血管疾病中，危害性最大患病人数最多的有心肌肥大、动脉粥样硬化、糖尿病、冠心病及肥胖等。

转录因子KLF4与miR-106a的调控关系及其对人胃癌细胞迁移的影响

目的:探讨转录因子Krüppel样因子4(KLF4)与miR-106a表达的调控关系及其对人胃癌细胞迁移的影响。方法:使用基因组数据库UCSC预测miR-106a启动子,插入pGL3-Basic报告载体,构建野生型报告质粒pmiR-106a-WT-luc和点突变报告质粒pmiR-106a-MUT-luc。使用转录因子数据库JASPAR预测并筛选调控miR-106a的转录因子KLF4,克隆至pcDNA3.0载体,构建KLF4过表达质粒KLF4-pcDNA3.0。将KLF4^(+/-)-pcDNA3.0与pmiR-106a-WT/MUT-luc共同转染HEK293T细胞,双荧光素酶系统检测荧光值。收集30对胃癌和癌旁组织标本,采用实时定量PCR(qPCR)检测miR-106a、KLF4 mRNA表达水平。Transwell法检测人胃癌SGC-7901细胞的迁移能力。结果:miR-106a报告质粒及KLF4过表达质粒经双酶切、PCR扩增、测序及Blast比对提示构建正确。KLF4-pcDNA3.0显著抑制pmiR-106a-WT-luc荧光素酶活性(P=0.000),但对pmiR-106a-MUT-luc影响较小(P=0.553)。胃癌组织中KLF4 mRNA平均相对表达量为0.716±0.624,miR-106a为3.367±2.165。KLF4-pcDNA3.0部分阻遏miR-106a对胃癌SGC-7901细胞迁移的促进作用(P=0.038)。结论:转录因子KLF4与miR-106a启动子区存在直接结合位点,KLF4可能在上游转录水平负调控miR-106a成熟体表达,以此发挥部分阻遏miR-106a促胃癌细胞迁移的作用。

核转录因子ARNT对KLF4调控作用的初步研究

目的 探讨核转录因子ARNT和KLF4间可能存在的信号调控机制。方法构建ARNT真核表达质粒，并与其二聚体配体基因AHR表达质粒分别联合含KLF4启动子的荧光素酶报告载体体外共转染细胞，通过对荧光素酶活性检测分析ARNT对KLF4基因的调控作用。结果同空白对照比较，细胞中转染含ARNT质粒后，引起KLF4启动子荧光素酶活性增高2倍多。另一方面，共转染ARNT及其二聚体配体基因AHR，KLF4启动子荧光素酶活性较空白对照降低近1／8。结论ARNT可活化KLF4启动子，激活KLF4表达，而AHR共转染明显抑制KLF4启动子活性。

转录因子KLF4与肿瘤EMT的分子机制研究进展

上皮间质转化(EMT)是一种在胚胎发育和损伤修复过程中的生理性改变,其是肿瘤发生和发展过程中的一种常见现象,但作用及机制尚不完全清楚。目前已经发现多个转录因子通过调控下游靶基因参与了EMT的发生过程,其中Krüppel样因子4(KLF4)能够活化上皮基因的表达,同时抑制间质基因的表达,在EMT发生过程中发挥着关键作用,可能是肿瘤治疗的新靶点。该文系统地总结了转录因子KLF4在肿瘤EMT发展过程中的作用及分子机制。

微小RNA-7-5p靶向调节锌指蛋白核转录因子4基因抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖和诱导凋亡的体外研究

目的探讨微小RNA(miR)-7-5p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡及锌指蛋白核转录因子4(KLF4)基因表达调控的影响。方法研究起止时间为2018年3-10月。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-7-5p在人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF及口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量。将miR-7-5p模拟物(miR-7-5p mimics)及阴性对照序列(mimics Control)分别转染至SCC25细胞,分为三组:Control组(未转染的SCC25细胞)、NC组(转染mimics Con-trol的SCC25细胞)、miR-7-5p组(转染miR-7-5p mimics的SCC25细胞)。以qRT-PCR检测miR-7-5p在SCC25细胞中的转染效果;MTT法检测miR-7-5p对SCC25细胞增殖的影响;流式细胞术检测miR-7-5p对SCC25细胞凋亡的影响;通过双荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blotting)检测miR-7-5p对KLF4的靶向关系。结果miR-7-5p在3种口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量[(0.21±0.02)、(0.43±0.04)、(0.48±0.05)]明显低于人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF(1.00±0.09)(P<0.05);转染miR-7-5p mimics能够上调SCC25细胞中miR-7-5p的表达(P<0.05);miR-7-5p过表达能够明显抑制SCC25细胞增殖能力[Control组、NC组72 h吸光度(1.43±0.13)、(1.46±0.15)比miR-7-5p组(0.81±0.09)](P<0.05),并诱导细胞凋亡[Control组、NC组凋亡率(9.48±2.65)%、(10.21±3.02)%比miR-7-5p组(24.41±8.15)%](P<0.05);双荧光素酶报告基因实验结果表明miR-7-5p过表达可抑制KLF4-Wt报告基因载体细胞相对荧光活性;qRT-PCR和Western blotting进一步证实了miR-7-5p能够靶向调节KLF4 mRNA和蛋白表达。结论miR-7-5p直接靶向调控KLF4基因的表达来抑制口腔鳞状细胞癌SCC25细胞增殖,诱导细胞凋亡。

KLF转录因子家族与脂肪细胞分化

Kruppel样转录因子(Kruppel-like factors,KLF)是一类具有锌指结构的转录因子,其典型结构特征是在其羧基端具有3个C2H2锌指结构.KLF广泛参与细胞增殖、凋亡、分化以及胚胎发育等多个生命活动的调控.近年来脂肪细胞分化研究的结果显示,KLF家族的多个成员参与脂肪细胞分化过程的调控,既有促进脂肪细胞分化的,也有抑制脂肪细胞分化的.其中KLF4通过与Krox20协同作用,激活C/EBPβ(CCAAT-enhancer-binding proteinβ)基因表达,促进脂肪细胞分化;KLF5和KLF15都通过直接结合到氧化物酶增殖体激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)基因的启动子,激活PPARγ基因表达,促进脂肪细胞分化;而KLF6则通过抑制前脂肪细胞因子(pre-adipocyte factor1,PREF1)基因表达,促进脂肪细胞分化.抑制脂肪细胞分化的KLF2通过结合于PPARγ的启动子,抑制PPARγ基因表达,从而抑制脂肪细胞的分化;KLF3通过募集辅助抑制因子C-末端结合蛋白(c-terminal binding protein,CtBP)形成KLF3-CtBP抑制复合体,结合于C/EBPα(CCAAT-enhancer-binding proteinα)基因的启动子,抑制C/EBPα表达,进而抑制脂肪细胞的分化;KLF7通过抑制葡萄糖转运蛋白2(glucosetransporter2,GLUT2)基因的表达抑制脂肪细胞的成熟.本文综述这些KLF转录因子在脂肪细胞分化过程的作用及其作用的机制.

KLF4转录水平负调控miR-106a表达对人胃癌细胞BGC-823侵袭能力的影响

目的探讨转录因子kruppel样因子4(Krüppel-like factor 4, KLF4)对微小RNA-106a(miR-106a)表达的调控及其相互作用对人胃癌细胞侵袭能力的影响。方法通过转录因子结合位点数据库JASPAR检索与miR-106a启动子区结合的转录因子KLF4。构建KLF4过表达载体(KLF4-pcDNA)和miR-106a报告基因(pmiR-106a-WT/MUT-luc),双荧光素酶报告基因检测KLF4对miR-106a启动子活性的影响。收集人胃癌和癌旁石蜡包埋-甲醛固定(formalin-fixed paraffin-embedded, FFPE)标本各40例,实时定量PCR和免疫组织化学法检测KLF4表达。人胃癌细胞株BGC-823培养并按miR-106a mimic组、mimic NC组、KLF4+pcDNA组、pcDNA basic组分别进行处理,Transwell法检测各组胃癌细胞侵袭能力变化。结果双荧光素酶报告基因检测显示KLF4-pcDNA具有拮抗miR-106a启动子活性的作用,表现为pmiR-106a-WT-luc荧光素酶活性被抑制(pmiR-106a-WT+pcDNA-basic与pmiR-106a-WT+pcDNA-KLF4比较,P<0.001),但对pmiR-106a-MUT-luc荧光素酶活性影响不明显(pmiR-106a-MUT+pcDNA-basic与pmiR-106a-MUT+pcDNA-KLF4比较,P>0.05)。FFPE样本显示KLF4在胃癌组织中的相对表达量为0.69±0.59,与癌旁组织相比,差异有统计学意义(P<0.001),且与胃癌的细胞分化程度、淋巴转移和浸润深度相关(P<0.05);KLF4阳性表达主要位于胃黏膜上皮细胞核及胞质。Transwell实验表明各处理组胃癌细胞的穿膜数量不全相同(P<0.001),miR-106a mimic组为89.00±14.85,mimic NC组为50.90±17.94,KLF4+pcDNA组为37.70±12.60,pcDNA basic组为66.20±3.19。结论转录因子KLF4与miR-106a启动子区至少存在体外的直接结合,可能通过在上游转录水平负调控miR-106a表达而参与影响胃癌细胞的侵袭转移进程。

KLF4在肾透明细胞癌侵袭和迁移中的作用及其与SKA1的靶向调控关系探讨

目的探讨肾透明细胞癌(ccRCC)组织中锌指转录调节因子4(KLF4)的表达变化,及其调控纺锤体和动粒相关复合体亚基1(SKA1)促进ccRCC细胞侵袭、迁移的作用。方法从癌症和肿瘤基因图谱(TCGA)数据库下载440例ccRCC原位癌组织和80例伴有远处转移的ccRCC组织的转录组测序数据,分析KLF4在原位癌组织和伴有远处转移癌组织中的表达差异。取人肾癌细胞786-O、ACHN,分为KLF4过表达组、空载体组、共表达KLF4/SKA1组,采用慢病毒载体技术,分别转染pCMV-KLF4、pCMV、pCMV-KLF4和pCMV-SKA1质粒;采用Transwell小室实验观察各组细胞侵袭和迁移能力,Western blotting法检测细胞上皮间质转化相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表达。取786-0、ACHN细胞,分为KLF4干扰组及干扰对照组、KLF4过表达组及空载体组,KLF4干扰组和干扰对照组分别转染siKLF4和siNC,KLF4过表达组和空载体组分别转染pCMV-KLF4、pCMV质粒;采用实时荧光定量PCR法检测细胞SKA1 mRNA表达,Western blotting法检测细胞SKA1蛋白表达;利用Jaspar和ConTra V3在线工具分析预测KLF4在SKA1启动子区的结合位点,并采用双荧光素酶报告实验进行验证。结果KLF4在伴有远处转移的ccRCC组织中的表达低于ccRCC原位癌组织(P<0.01)。在786-O和ACHN细胞中,与空载体组相比,过表达KLF4组细胞侵袭和迁移能力降低(P均<0.01);与过表达KLF4组比较,共表达KLF4/SKA1组细胞侵袭和迁移能力增加(P均<0.01)。与空载体组相比,过表达KLF4组E-cadherin蛋白表达水平升高、N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平降低;与过表达KLF4组比较,共表达KLF4/SKA1组E-cadherin蛋白表达水平降低、N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平升高(P均<0.05)。与siNC组相比,siKLF4组SKA1 mRNA及蛋白表达水平均升高;与pCMV空载体组相比,pKLF4过表达组SKA1 mRNA及蛋白表达水平均下降(P均<0.01)。SKA1转录起始位点上游850~900 bp启动子序列中存在KLF4的结合位点。双荧光素酶报告实验结果显示,与pSKA1-MUT+pKLF4/pCMV、pSKA1-WT+pCMV组比较,pSKA1-WT+pKLF4组荧光素酶活性降低(P均<0.01)。结论KLF4表达下调与ccRCC恶性进展相关,KLF4可通过结合SKA1启动子区特定序列负向调控SKA1表达,从而抑制ccRCC细胞的侵袭和迁移。

KLF4与肺部相关疾病研究进展

Krüppel样因子4(Kruppel-like factor 4,KLF4),也称为肠道富集的Krüppel样因子(Gut-enriched kruppel-like factor,GKLF),是最早发现的KLF家族成员之一。它是一种高度保守的含锌指转录因子,可在人体多种组织中表达,调节细胞生长、增殖、分化、凋亡等多种过程[1],同时它是一种双功能转录因子,对于不同的靶基因能够通过不同的机制激活或抑制转录[2]。KLF4含有483个氨基酸,分子量为53 kDa,其特征在于羧基末端序列中含有三个锌指基序。

重症肌无力患者外周血单个核细胞中KLF4、RORγt与miR-206水平变化的临床意义

目的检测重症肌无力患者外周血单个核细胞(PBMC)中锌指样转录因子4(KLF4)、孤儿核受体γt(RORγt)、microRNA-206的表达水平,探讨它们在重症肌无力患者发病中的作用。方法采集重症肌无力患者及健康对照者清晨空腹外周血标本,梯度离心得到人PBMC。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测PBMC中KLF4、RORγt mRNA、microRNA-206的相对表达量。结果重症肌无力患者PBMC中KLF4mRNA为0.594±0.181,健康对照者为0.089±0.025;重症肌无力患者PBMC中RORγt mRNA表达水平为0.570±0.266,健康对照者为0.067±0.016,重症肌无力患者均显著高于健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。重症肌无力患者PBMC中microRNA-206表达水平为0.053±0.018,健康对照者为0.134±0.056,重症肌无力患者显著低于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。重症肌无力患者PBMC中KLF4、RORγt相对表达量与microRNA-206表达水平均呈负相关(r=-0.675,P<0.05,r=-0.806,P<0.05)。结论重症肌无力患者PBMC中KLF4mRNA、RORγtmRNA的表达水平增高及microRNA-206表达水平下降,和疾病的发生和发展有密切的关系。

KLF4与Notch1在脱氧胆酸诱导Barrett食管形成过程的作用

目的探讨Krüppel样锌指转录因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)和Notch1在Barrett食管组织中的表达以及脱氧胆酸(deoxycholic acid,DCA)对正常食管鳞状上皮Het-1A细胞KLF4与Notch1表达水平的影响。方法免疫组化S-P法检测49例人正常食管组织、26例食管炎和22例Barrett食管组织中KLF4、Notch1的表达水平;采用不同浓度(0、100、200μmol/L)的DCA对永生化的正常食管鳞状上皮Het-1A细胞分别处理4、8、12 h,RT-PCR和Western blot检测KLF4、Notch1 mRNA及蛋白表达。结果免疫组化检测发现,与正常人食管鳞状上皮组织相比,食管炎与Barrett食管组织中KLF4呈现高表达,且Barrett食管组织表达最高(P<0.05),而Notch1的表达则无明显差异。RT-PCR及Western blot结果显示,随DCA浓度的增高以及处理时间的增加,Het-1A细胞表达KLF4、Notch1的mRNA和蛋白的水平逐渐升高(P<0.05)。结论 DCA可能通过促进KLF4、Notch1表达而参与正常食管上皮转化为Barrett食管的过程。