锌指转录因子snai1高表达质粒构建和稳定株的筛选

背景:研究表明Snai1和E-钙黏素在肿瘤组织中有负向表达关系,且与Snai1与CDH1启动子区box盒结合,抑制CDH1基因转录。目的:构建针对snai1的高表达载体,建立稳定转染的细胞株。方法:根据GenBank中snai1的基因序列人工合成snai1全序列,将合成好的序列装入Pmd-18T载体并转化感受态细胞DH5α,进行阳性克隆筛选。测序验证重组克隆中基因序列正确后,用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切Pmd-18T/snai1质粒,将所得的snai1全基因片段转入pcDNA3.1(+)空质粒,构建pcDNA(+)/snai1真核表达质粒,同时构建阴性对照质粒,并分别对结肠腺癌细胞HT-29进行转染,最后利用G418进行稳定表达株的筛选,并采用RT-PCR和Western blot鉴定宿主细胞内snai1基因的表达情况。结果与结论:成功构建了真核表达质粒pcDNA(+)/snai1,顺利转染结肠癌细胞HT-29后于600mg/LG418浓度时筛选21d得到snai1基因稳定表达株,构建的snai1基因正义表达质粒pCDNA3.1(+)/snai1转染宿主细胞后可促进snai1基因的表达。

自噬对锌指转录因子1及高糖诱导的肾小管EMT的影响

目的探讨自噬是否可以通过调控锌指转录因子1(Snail1)的降解而影响肾小管上皮细胞-间充质转化(EMT)过程。方法12只清洁级雄性SD大鼠,随机分为正常(NC)组、糖尿病(DM)组,予链脲佐菌素(STZ)53 mg/kg尾静脉注射复制大鼠Ⅰ型糖尿病模型;造模成功后第24周末处死NC和DM组大鼠,检测大鼠血糖、血尿素氮(BUN)和24 h尿白蛋白(24 hUAlb),Western blot检测肾组织自噬相关分子[自噬基因BECN 1(Beclin1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3-Ⅱ/Ⅰ)、自噬降解底物蛋白1(p62)]、Snail1蛋白的表达水平;将大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)分为正常糖组(NG组)、高糖组(HG组)及高渗组(HM组),HG组培养的NRK-52E细胞在分为全蛋白组(Input组)和IP组[IP组又为阴性对照(IgG组)和实验组(Snail1/P62)];在高糖培养的NRK-52E细胞中分别使用自噬激动剂[雷帕霉素(RAP)和自噬抑制剂氯喹(CQ)]处理48 h,分为NG组、HG组、HG+RAP组及HG+CQ组,采用双标荧光腺病毒观察各组细胞的自噬流的情况,免疫荧光化学染色和免疫共沉淀观察Snail1与p62的蛋白相互作用,Western blot检测各组NRK-52E细胞中自噬相关分子、EMT、细胞外基质(ECM)指标表达变化;用二甲基亚砜(DMSO)、RAP、CQ处理NRK-52E细胞48 h,再联合放线菌酮(CHX)和蛋白酶抑制剂(MG-132)处理0、6及10 h,分为HG+DMSO/RAP组、HG+DMSO/CQ组,采用Western blot检测自噬对Snail1蛋白衰减的调控作用。结果与NC组相比,DM组大鼠血糖、BUN及24 hUAlb均增高(P<0.05);Western blot结果显示,与NC组比较,DM组大鼠肾组织及高糖培养的NRK-52E细胞中Beclin1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达下调(P<0.05),p62、Snail1蛋白表达上调(P<0.05);双标腺病毒实验显示,在高糖刺激的NRK-52E中自噬流受阻,与HG组相比,HG+RAP组NRK-52E细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)的蛋白表达增多,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Ⅲ(Col-Ⅲ)的蛋白表达减少(P<0.05),而HG+CQ组结果相反;免疫共沉淀实验发现Snail1与p62存在蛋白互作;联合CHX和MG-132后,HG+DMSO/RAP组中Snail1蛋白衰减速度加快。结论在DM大鼠肾组织和高糖培养的肾小管上皮细胞中,自噬受抑后使Snail1通过自噬降解减少,诱导EMT及ECM沉积增多,促进了肾脏纤维化的发生。

偏肿革裥菌C2H2型转录因子SFP1基因克隆、生物信息学及表达分析

以L.gibbosa菌丝体总RNA反转录的cDNA为模板,通过RT-PCR克隆得到一个C2H2型锌指转录因子的cDNA序列。对该基因进行基因克隆、生物信息学分析,并利用实时荧光定量法对木屑处理下该基因的表达进行分析。通过保守结构域预测与结构分析发现该基因为裂指蛋白1类(SFP1)C2H2型锌指转录因子,具有2个C2H2家族的保守结构域,将该基因命名为Lg-sfp1。该基因CDS全长1947 bp,编码一个由648个氨基酸组成的亲水性膜内蛋白,蛋白大小为68.27 ku。通过SWISS-MODEL预测的三级空间结构发现两个完整的C2H2结构。木屑处理下Lg-sfp1基因表达比无木屑处理下表达量低,推断木屑促进了L.gibbosa氧化应激反应,当氧化应激反应大量发生时,参与氧化应激反应负调控的sfp1基因表达受到抑制,为后续研究偏肿革裥菌sfp1基因在木材降解,特别是氧化应激反应中的功能提供了理论基础。

锌指转录因子1与风湿性心脏病心房颤动患者心房纤维化的关系

目的 探讨锌指转录因子1 （Snail1）及上皮间质转化（EMT）机制在风湿性心脏病心房颤动患者心房纤维化中可能发挥的作用.方法 选择2015年9月至2016年3月入住我院心外科并确诊为风湿性心脏病准备行换瓣手术的19例患者,在换瓣术中取约200 mg的右心房肌肉组织,按术前心律分为窦律（SR）组9例和房颤（AF）组10例.观察心肌细胞的形态变化采用HE染色,心房纤维化的程度比较使用Masson染色观察,western blot和RT-PCR测定心房肌组织中Snail1的表达水平.结果 房颤组和窦律组之间性别、年龄、左室射血分数、心功能分级、吸烟情况比较无统计学差异（P＜0.05）;左心房内径（LAD）窦律组为（44.441±7.13）mm,房颤组为（54.50±5.02）mm,两者比较差异有统计学意义（P＜0.05）;心房胶原容积分数（CVF）窦律组为0.123,房颤组为0.407,两组比较差异具有统计学意义（P＜0.01）.Snail1的mRNA表达水平及蛋白表达水平窦律组分别为1.001和0.341,房颤组分别为1.566和0.579,两者分别比较差异均具有统计学意义（P＜0.01）.结论 风湿性心脏病心房颤动患者心房肌组织中Snail1表达增加,EMT可能被激活,从而促进房颤患者的心房纤维化,在房颤的发生和维持中发挥重要作用.

人胰腺癌细胞株锌指转录因子GLI1及PTCH1基因表达的检测

目的:检测5株人胰腺癌细胞株Hedgehog信号转导通路成员锌指转录因子GLI1、PTCH1基因的表达情况,测定并分析其基因序列。方法:用RT-PCR方法检测5株胰腺癌细胞株及25例正常胰腺组织GLI1、PTCH1 mRNA的表达;纯化、回收目的基因GLI1、PTCH1,将其分别插入克隆载体pTA2,限制性内切酶酶切鉴定,测定序列。结果:5株胰腺癌细胞株均表达GLI1、PTCH1,25例正常胰腺组织均不表达GLI1、PTCH1;成功构建重组质粒pTA2/GLI1、pTA2/PTCH1,测序结果与GeneBank公布的基因序列一致。结论:Hedgehog信号转导通路的过度激活参与了胰腺癌的发生,可能是胰腺癌治疗的潜在新靶标。

上皮性卵巢癌组织中WWOX蛋白、转录因子Elf5和Snail1、上皮间质转化标志分子的表达观察

目的观察上皮性卵巢癌组织中WWOX蛋白、转录因子Elf5和Snail1、上皮间质转化(EMT)标志分子的表达变化,并探讨其意义。方法收集300例上皮性卵巢癌患者的卵巢癌组织及其癌组织相对应的癌旁组织,免疫组化法分别检测上述组织中的WWOX蛋白、Elf5、Snail1及EMT标志分子E-cadherin、N-Cadherin、Vimentin。对卵巢癌组织及癌旁组织中上述指标的表达作比较,分析卵巢癌组织中上述指标的表达与卵巢癌FIGO分期、组织学类型、病理学分级和淋巴结转移等临床病理参数的关系,分析卵巢癌组织中上述各指标的表达关系,分析卵巢癌组织中WWOX蛋白、Elf5表达与卵巢癌患者预后的关系。结果 WWOX蛋白、Elf5和E-cadherin在卵巢癌组织中阳性表达率低、癌旁组织阳性表达率高,Snail1、N-cadherin、Vimentin在卵巢癌组织中阳性表达率高、癌旁组织中阳性表达率低;卵巢癌组织及癌旁组织中WWOX蛋白、Elf5、Snail1、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的表达相比,P均<0.05。卵巢癌组织中上述指标的表达水平与上皮性卵巢癌病理分期、病理学分级及淋巴结转移有关(P均<0.05)。卵巢癌组织WWOX蛋白与Elf5的表达呈正相关(r=0.291,P<0.05),WWOX蛋白与Snail1、N-cadherin、Vimentin的表达呈负相关(r分别为-0.785、-0.482、-0.706,P均<0.05),WWOX蛋白与E-cadherin表达呈正相关(r=0.759,P<0.05),Elf5与Snail1、N-cadherin、Vimentin的表达呈负相关(r分别为-0.816、-0.465、-0.738,P均<0.05),Elf5与E-cadherin表达呈正相关(r=0.726,P<0.05)。卵巢癌组织中WWOX蛋白与Elf5阳性表达的患者生存率高于阴性者(P<0.05);卵巢癌组织中WWOX蛋白和Elf5的表达均为影响卵巢癌患者预后的独立因素(P均<0.05)。结论上皮性卵巢癌患者卵巢癌组织中WWOX蛋白、转录因子Elf5和Snail1、EMT标志分子的表达发生变化,而且其表达存在相关性,WWOX蛋白及Elf5的表达与上皮性卵巢癌患者的生存及预后相关。

急性髓细胞白血病模型小鼠B细胞易位基因1和Ikaros家族锌指转录因子1表达水平及相关性分析

目的:探讨急性髓细胞白血病(AML)模型小鼠B细胞易位基因1(BTG1)和Ikaros家族锌指转录因子1(IKZF1)表达水平,并进行相关性分析。方法:36只小鼠随机等分为模型A组、模型B组和对照组。模型A组和模型B组分别经尾静脉注射HL60细胞1×10^(7)/只、5×10^(6)/只,对照组注射等量0.9%氯化钠溶液。采用Western blot检测骨髓组织BTG1和IKZF1蛋白相对表达水平,并与体重、红细胞、血小板及白细胞CD33阳性率进行相关性分析。结果:模型A组和模型B组小鼠在接种第7、14、28天的体重、血小板低于对照组,红细胞高于对照组(均P<0.05),但模型A组与模型B组上述指标比较无统计学差异(均P>0.05)。模型A组和模型B组接种第28天白细胞CD33阳性率高于对照组,BTG1和IKZF1蛋白相对表达水平低于对照组(均P<0.05),但模型A组与模型B组上述指标比较无统计学差异(均P>0.05)。Pearson相关性分析显示,AML小鼠BTG1、IKZF1蛋白相对表达水平与白血病CD33阳性率、体重、红细胞、血小板均存在相关性(均P<0.05)。结论:BTG1、IKZF1蛋白在AML模型小鼠呈高表达,且表达水平与小鼠体重、外周血及肿瘤浸润程度存在相关性。

苦瓜皂苷G通过调控Notch/Snail1信号通路改善糖尿病肾病大鼠肾功能减退及肾纤维化

【目的】观察苦瓜皂苷G对糖尿病肾病(DN)大鼠的治疗作用及机制。【方法】从55只大鼠中随机抽取45只采用一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法诱导DN模型。将造模成功的38只大鼠随机分为模型组9只、苦瓜皂苷G低剂量组9只、苦瓜皂苷G中剂量组10只、苦瓜皂苷G高剂量组10只。剩余10只大鼠设为正常组。对应灌胃给药4周后,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测大鼠24 h尿蛋白水平,血糖仪检测空腹血糖(FBG),全自动生化分析仪检测血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)水平,苏木素-伊红染色(HE)法观察大鼠肾组织病理学变化,采用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western Blot法分别检测E-钙黏蛋白(E-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Notch1、锌指蛋白转录因子1(Snail1)、Jagged1 m RNA及蛋白表达情况。【结果】与正常组比较,模型组24 h尿蛋白、FBG、血清SCr和BUN水平及肾组织α-SMA、Notch1、Snail1、Jagged1 mRNA及蛋白水平显著升高,肾组织E-cad m RNA及蛋白水平降低,肾组织可见肾小球萎缩、肾小管扩张及间质纤维化;与模型组比较,苦瓜皂苷G低、中、高剂量组24 h尿蛋白、FBG、血清SCr和BUN水平及肾组织α-SMA、Notch1、Snail1、Jagged1 mRNA及蛋白水平显著降低,肾组织E-cad m RNA及蛋白水平升高,肾组织病理损伤得到改善。【结论】苦瓜皂苷G可有效改善DN大鼠肾功能障碍、减轻肾脏纤维化,其机制可能与通过调控Notch/Snail1信号通路,抑制α-SMA和Jagged1 mRNA及蛋白表达,增强E-cad mRNA及蛋白表达有关。

转录因子Klf2和Nrf2/Bach1调控γ-谷氨酰半胱氨酸合酶在气道上皮细胞中的作用

目的通过研究锌指Krüppel样转录因子2(Klf2)及红系衍生核因子相关因子2(Nrf2)/BTB-CNC异体同源体1(Bach1)在经香烟烟雾提取物(CSE)刺激的大鼠气道上皮细胞中的表达,了解其感受氧化应激对靶基因γ-谷氨酰半胱氨酸合酶(γ-GCS)的调控作用。方法采用酶消化法提取大鼠原代气管-支气管上皮细胞,并用10%CSE干预细胞6 h,收集细胞,双酶法检测γ-GCS活性;通过免疫细胞化学法观察Nrf2/Bach1的核转位;采用Western blot和RT-PCR技术研究细胞中Klf2、Nrf2、Bach1、γ-GCS的蛋白及mRNA表达。结果大鼠气管-支气管上皮细胞经CSE诱导后其γ-GCS活性明显增高。免疫细胞化学结果显示Nrf2经CSE刺激后出现由核外向核内的转位,Bach1经CSE刺激后出现由核内向核外的转位。Western blot结果显示CSE处理组中Klf2、Nrf2、Bach1、γ-GCS蛋白水平较对照组显著升高(P<0.05);RT-PCR结果显示CSE处理组中Klf2、Nrf2、Bach1、γ-GCS mRNA水平较对照组显著升高(P<0.05)。直线相关分析表明γ-GCS蛋白表达与Klf2、Nrf2、Bach1呈正相关(P<0.05)。结论 CSE可能通过转录因子Klf2、Nrf2、Bach1调节γ-GCS的表达。

miR-200c/ZEB1/E-cadherin轴在胆管癌转移侵袭中的作用及对胆管癌预后评估的价值

目的:探讨微小RNA-200c(miR-200c)/锌指转录因子(ZEB1)/E-钙黏蛋白(E-cadherin)在胆管癌(HCCA)转移、侵袭中的作用及对HCCA预后评估的临床价值。方法:选取2020年08月至2022年12月间我院收治的胆管癌患者36例为研究对象,同时选取胆管良性疾病患者(胆总管结石或胆管良性狭窄)20例作为对照。采用原位杂交、实时荧光定量PCR检测miR-200c在HCCA患者组织及血清中的表达;生存曲线分析miR-200c表达与总生存期的相关性;Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭能力;免疫印迹检测ZEB1及E-cadherin蛋白的表达。体内研究构建裸鼠成瘤实验,采用免疫组化检测ZEB1及E-cadherin蛋白的表达;Tunel技术检测组织中的凋亡情况。受试者工作特征(ROC)曲线评估生物标志物对胆管癌预后的诊断效能。结果:miR-200c低表达于HCCA组织及血清中;生存曲线分析显示,miR-200c表达与患者的总生存期呈正相关性,TNM分期与患者的总生存期呈负相关性;miR-200c mimics抑制了胆管癌细胞的迁移和侵袭能力,并降低ZEB1表达而诱导E-cadherin表达;转染ZEB1逆转miR-200c的作用效应,促进胆管癌细胞的迁移和侵袭特性,抑制胆管癌细胞的凋亡。CA199、CEA和miR-200c联合检测诊断胆管癌预后的ROC曲线下面积为0.892,灵敏度0.8611,特异度0.8000。结论:miR-200c/ZEB1/Ecadherin轴参与胆管癌的转移侵袭;CA199、CEA和miR-200c联合检测对胆管癌预后的诊断效能良好,对临床胆管癌的治疗策略具有重要指导价值。

转录因子MAZ对c1orf109基因转录表达调控的体外研究

目的:本文旨在研究转录因子Myc相关锌指蛋白(MAZ)在体外对人类1号染色体开放阅读框109(c1orf109)基因的转录表达调控。方法:体外条件下,采用凝胶电泳迁移实验筛选c1orf109基因启动子区MAZ的结合位点,并利用本室构建的由c1orf109启动子驱动的增强型绿色荧光蛋白报告载体与MAZ和转录因子特化蛋白1(Sp1)的表达质粒共转染He La细胞,24 h后,用激光共聚焦显微镜和流式细胞术检测c1orf109基因的转录表达情况。结果:c1orf109启动子区可与MAZ结合,且有与Sp1共享的结合位点;MAZ与Sp1皆可抑制c1orf109的转录表达,且Sp1的抑制作用大于MAZ(P<0.05)。结论:MAZ与Sp1两个转录因子共同调控c1orf109基因在生理及病理条件的表达,且调控方向一致。

一种可特异识别Hmox1增强子的人工转录因子的构建

目的：设计一种可特异识别人血红素加氧酶-1基因（Hmox1）增强子的人T转录因子。方法：以锌指蛋白（ZFP）作为人工转录因子的DNA结合结构域，在人Hmox1增强子上选择一段序列作为锌指蛋白靶序列，提交Zinc finger tools3.0设计得到该锌指蛋白的氨基酸序列，通过Swiss Model同源建模，对设计结果进行分析；将锌指蛋白与效应结构域相连组成完整的人工转录因子，用双荧光素酶报告基因检测系统检测其活性。结果：得到了能特异识别人Hmox1增强子的锌指蛋白氨基酸序列，同源建模结果显示其空间结构稳定，所构建的完整人工转录因子经双荧光素酶报告基因检测系统检测能特异上调报告基因的表达。结论：设计得到的人工转录因子经实验验证能特异识别人Hmox1增强子并有效上调报告基因的表达，为进一步构建可上调细胞核内Hmox1表达的人工转录因子奠定了基础。

食管鳞状细胞癌组织中SNAI2和FSCN1蛋白表达情况对其预后生存的影响

目的观察食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中SNAIL超家族锌指转录因子2(SNAI2)、肌动蛋白结合蛋白1(FSCN1)表达情况,探讨其对ESCC患者预后生存的影响。方法选取ESCC患者120例,收集患者ESCC组织及癌旁组织,采用免疫组织化学法检测组织中SNAI2、FSCN1表达。随访5年,记录患者生存时间,采用Kaplan-Meier生存曲线分析SNAI2、FSCN1表达与ESCC患者预后的关系,COX回归分析ESCC患者预后的影响因素。结果ESCC组织SNAI2、FSCN1表达阳性率均高于癌旁组织(P均<0.01)。Kaplan-Meier生存曲线显示,SNAI2、FSCN1表达阳性ESCC患者5年生存率低于SNAI2、FSCN1表达阴性患者(P均<0.05)。单因素COX回归分析显示,分化程度、TNM分期、SNAI2、FSCN1是ESCC患者预后的影响因素;多因素COX回归分析显示,TNM分期、SNAI2、FSCN1是ESCC患者预后的独立影响因素(P均<0.05)。结论ESCC组织中SNAI2、FSCN1高表达,SNAI2、FSCN1高表达与ESCC患者不良预后有关,是影响ESCC患者预后的独立危险因素。

穿心莲内酯对糖尿病大鼠胰岛素抵抗、菌群失调及Notch/锌指蛋白转录因子1信号通路影响的研究

目的 探讨穿心莲内酯对DM大鼠IR、菌群失调及Notch/锌指蛋白转录因子1(Snail1)信号通路的影响。方法 选取70只SPF级Wistar雄性大鼠,其中30只进行穿心莲内酯LD50试验,确定致死量后选取50 mg/kg进行给药及观察,其余40只中10只作为空白对照组(NC),30只建立DM模型,共28只建模成功,分为T2DM组(n=9)、二甲双胍灌胃组(Met,n=9)及穿心莲内酯灌胃组(And,n=10)。NC、T2DM组不做处理,干预14 d后观察各组变化。结果 与NC组比较,T2DM、Met、And组胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、拟杆菌门、厚壁菌门丰度水平、Notch、Snail1 mRNA及蛋白表达、阳性表达率升高(P<0.05),乳酸杆菌、双歧杆菌丰度水平降低(P<0.05)。与T2DM组比较,Met、And组乳酸杆菌、双歧杆菌丰度水平升高(P<0.05),HOMA-IR、拟杆菌门、厚壁菌门丰度水平、Notch、Snail1 mRNA及蛋白表达、阳性表达率降低(P<0.05)。结论 DM大鼠经穿心莲内酯干预后IR缓解,菌群失调改善,Notch/Snail1信号通路受抑制。

信号通路分子、乳头状甲状腺癌基因、锌指转录因子在不同宫颈疾病中的表达

目的:研究信号通路分子(SHH)、乳头状甲状腺癌基因(PTC1)、锌指转录因子(GLI1)在宫颈上皮内瘤变CIN1、CIN2、CIN3中的表达,探讨SHH、PTC1、GLI1在宫颈癌发生发展中的作用。方法:应用免疫组织化学方法将150例患有宫颈疾病的患者分为正常宫颈上皮组、CIN1组、CIN2组、CIN3组及宫颈癌组,每组各30例。对以上5组进行PTC1、GLI1、SHH检测。结果:SHH主要表达于腺体细胞的胞浆内,在各组的阳性表达率分别为:正常宫颈上皮组13.3%、CIN1组40.0%、CIN2组63.3%、CIN3组83.3%及宫颈癌组93.3%,且强阳性率随阳性率增高而明显增高。PTC1、GLI1在胞质及胞膜上阳性染色多呈弥漫状分布。PTC1在各组的阳性表达率分别为:正常宫颈上皮组23.3%、CIN1组40.0%、CIN2组43.3%、CIN3组63.3%及宫颈癌组73.3%。GLI1在各组的阳性表达率分别为:正常宫颈上皮组10.0%、CIN1组16.7%、CIN2组26.7%、CIN3组50.0%及宫颈癌组56.7%。结论:SHH、PTC1、GLI1介导着多种死亡受体诱导的细胞凋亡信号传导通路,与宫颈癌的癌前病变过程密切相关。

长链非编码RNA结肠癌相关转录因子1对肺腺癌细胞增殖和凋亡的调控作用及其机制

目的分析长链非编码RNA(LncRNA)结肠癌相关转录因子1(CCAT1)对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响,并基于锌指E盒同源结合蛋白1(ZEB1)探讨其潜在作用机制。方法取对数生长期的肺腺癌A549细胞,分为对照组、si-NC组、si-CCAT1组、CCAT1-NC组和CCAT1组。除对照组外,其余组分别转染si-NC、si-CCAT1、CCAT1 mimic NC以及CCAT1 mimic,转染48 h后,检测细胞中LncRNA CCAT1表达量、细胞存活率、细胞凋亡率,以及ZEB1、上皮钙黏蛋白(E-cad)和神经钙黏蛋白(N-cad)表达量。通过Starbase软件预测LncRNA CCAT1与ZEB1之间的靶向关系,并应用双荧光素酶报告基因法验证LncRNA CCAT1与ZEB1的靶向关系。结果(1)与对照组和si-NC组比较,si-CCAT1组LncRNA CCAT1表达量、细胞存活率、ZEB1和N-cad蛋白表达量降低,细胞凋亡率、E-cad蛋白表达量升高(均P<0.05)。与对照组、CCAT1-NC组、si-CCAT1组比较,CCAT1组LncRNA CCAT1表达量、ZEB1和N-cad蛋白表达量升高,细胞凋亡率、E-cad蛋白表达量降低(均P<0.05);此外,CCAT1组细胞存活率高于si-CCAT1组(P<0.05)。(2)ZEB1与CCAT1存在高度互补序列;转染CCAT1 mimic可明显降低ZEB1野生型质粒的相对荧光素酶活性,对ZEB1突变型质粒的相对荧光素酶活性无影响。结论LncRNA CCAT1可以促进肺腺癌细胞增殖、抑制细胞凋亡,其可能是通过上调ZEB1蛋白表达发挥作用。

Sp1/Krüppel样因子的研究进展

Sp1/Krüppel样因子(Sp1-like and Krüppel-like factors,Sp1/KLFs)是一组与真核细胞转录调控密切相关的锌指蛋白。Sp1/KLFs的羧基末端高度保守,含有3个串联的Cys2His2锌指结构,用于结合DNA;其氨基末端在不同的家族成员间存在较大差异,主要是通过结合辅助因子发挥转录调控作用。Sp1/KLFs的表达具有组织、细胞分布以及发育时期的特异性,它们通过调控多种富含GC或CACCC的启动子的基因的表达,参与细胞增殖、分化、凋亡和肿瘤发生、发展等多种生理、病理过程。文章综述了Sp1/KLFs的结构特征、作用机制及生物学功能。

HIF-1α与Snail、E-cadherin对结直肠癌SW480细胞侵袭增殖的影响

目的研究基因沉默缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和不同缺氧条件下HIF-1α、锌指转录因子(Snail)及上皮钙黏蛋白(E-cadherin)在SW480细胞中的表达,及其对生长增殖和侵袭迁移力的影响。方法构建SW480细胞缺氧模型,设计合成HIF-1α的小干扰RNA并将其转染入细胞内于无氧环境培养。采用MTT法检测生长增殖活性,Transwell法检测体外侵袭迁移能力,RT-PCR检测HIF-1α、Snail及E-cadherin mRNA的表达。结果 MTT显示无氧组和阴性对照组生长增殖活性增加,基因干扰组降低(P<0.05);体外侵袭实验显示无氧组、阴性对照组侵袭迁移率增加,基因干扰组降低(P<0.05);RT-PCR检测显示无氧组、阴性对照组HIF-1α和Snail mRNA表达升高,E-cadherin降低,基因干扰组HIF-1α和Snail表达降低,E-cadherin升高(P<0.05),且相关分析显示HIF-1α与Snail呈正相关,HIF-1α与E-cadherin呈负相关。结论缺氧及HIF-1α可促进SW480细胞株的体外生长增殖活性,增强其体外侵袭迁移能力,基因沉默HIF-1α可抑制其体外生长增殖与侵袭迁移。

SNAI1在85例结直肠癌患者组织中表达的研究

背景与目的:SNAI1作为一种锌指转录因子(zinc-finger transcription factor),通过抑制E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达调控上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)。本研究旨在比较SNAI1在结直肠癌的癌旁正常黏膜组织、原发性结直肠癌组织和淋巴结转移灶癌组织的表达情况,探讨SNAI1对结直肠癌患者的意义。方法:免疫组织化学检测85例结直肠癌患者的癌旁正常黏膜组织(距癌15cm以上)、原发性结直肠癌组织和淋巴结转移灶癌组织中SNAI1的表达情况,采取多种分组及多种统计方法对数据进行详细分析比较。结果:SNAI1在原发性结直肠癌组织中的表达显著高于正常结直肠黏膜组织中的表达(P=0.000);低分化癌组织的表达显著高于高中分化癌组织(P=0.014);淋巴结转移灶癌组织的表达显著高于原发性结直肠癌组织(P=0.001);SNAI1在Dukes A+B与Dukes C+D分期中的表达差异无统计学意义(P=0.330);双变量相关分析显示组织类别与SNAI1的表达呈显著正相关且相关关系密切(Kendall's tau-b相关系数r=0.532>0.5,P=0.000;Spearman's相关系数r=0.595>0.5,P=0.000);剔除无淋巴结转移的原发性结直肠癌,发现原发性结直肠癌组织与其淋巴结转移癌组织的表达差异并无统计学意义(P>0.05);双变量相关分析显示淋巴结转移与SNAI1的表达呈正相关(Kendall's tau-b相关系数r=0.209<0.5,P=0.01;Spearman's相关系数r=0.221<0.5,P=0.009)。结论:结直肠癌中,SNAI1可作为恶性程度评价指标;淋巴结转移灶的癌细胞恶性程度并不比原发灶的癌细胞强;SNAI1高表达往往伴随淋巴结转移的出现,SNAI1有作为淋巴结转移风险的评估指标的潜能。

基于TLR4/NF-κB/Snail1信号通路的槲皮素对糖尿病大鼠肾脏疾病的实验

本文基于TLR4/NF-κB/Snail1信号通路,通过采用一次性腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,随机分为正常对照组、糖尿病模型组、阳性对照组和槲皮素组并进行对比分析。实验结果表明:槲皮素对糖尿病大鼠的肾脏保护作用可通过调控肾脏TLR4/NF-κB/Snail1信号通路,减轻炎症反应抑制肾脏纤维化。