老年子宫内膜样癌患者术后组织神经纤毛蛋白1、2和锌指E-盒结合同源异形盒-1的表达及意义

目的检测对老年子宫内膜样癌患者癌组织中神经纤毛蛋白(NRP)1、2和转录因子锌指E-盒结合同源异形盒(ZEB)-1的表达,探讨三者关系及在不同临床特征中的表达差别。方法收集145例老年子宫内膜样癌患者手术后存留的蜡块及临床资料作为研究组,收集90例子宫平滑肌瘤行子宫全切术后的正常子宫内膜组织作为对照组,应用免疫组化方法检测NRP1、2和ZEB-1表达。结果研究组NRP1、2和ZEB-1蛋白表达阳性率明显高于对照组(P<0.000 1),研究组NRP1、2和ZEB-1表达均与肿瘤TNM分期、浸润深度、脉管累犯和Ki67指数密切相关。NRP1、2和ZEB-1的表达呈正相关。结论老年子宫内膜样癌患者癌组织NRP1、2和ZEB-1高表达,三者可以有效促进肿瘤发生和进展且可能具有一定的协同作用。

锌指E-盒结合同源异形盒蛋白-1、-2和上皮型黏附素在结肠腺癌中的表达

目的观察锌指E-盒结合同源异形盒蛋白(ZEB)-1、-2和上皮型黏附素(E-cadherin)在结肠腺癌术后组织中的表达。方法观察组为63例结肠腺癌术后患者,收集临床资料及术后蜡块组织。选择距肿物边缘>3 cm的非肿瘤性结肠黏膜组织36例作为对照组,应用免疫组化SP法检测二组中ZEB-1、-2和E-cadherin表达。结果观察组中ZEB-1和-2的阳性率明显高于对照组,观察组中E-cadherin的阳性率明显低于对照组。观察组中ZEB-1、-2和E-cadherin的表达与脉管浸润、淋巴结转移密切相关,ZEB-1、-2的表达与肿瘤最大径、浸润深度密切相关。E-cadherin的表达与肿瘤的最大径、浸润深度无明显相关性。相关性分析显示观察组中ZEB-1和E-cadherin、ZEB-2和E-cadherin的表达呈负相关。结论 ZEB-1、-2高表达、E-cadherin低表达在结肠腺癌发生和进展中有重要作用。ZEB-1、-2可能通过对E-cadherin的调节发挥生物学作用。

微RNA-204-5p、蛋白锌指E盒结合同源盒蛋白1在新生儿肺炎血清中的表达

目的 探讨微RNA-204-5p(miR-204-5p)、蛋白锌指E盒结合同源盒蛋白1(ZEB1)在新生儿肺炎(NP)病儿血清中的表达变化及其在病情评估及预后预测中的临床价值。方法 选取2021年10月至2022年5月张家口市妇幼保健院收治的NP病儿80例为NP组,另选取同期该院出生的健康新生儿80例为对照组。检测血清miR-204-5p、ZEB1、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)及C反应蛋白(CRP)水平并比较;采用Pearson法分析NP病儿血清miR-204-5p、ZEB1水平及其与临床指标的相关性;应用受试者操作特征(ROC)曲线分析miR-204-5p、ZEB1及二者联合预测NP不良预后的价值。结果 NP组血清miR-204-5p水平(0.47±0.16比1.01±0.21)、血氧饱和度[(83.99±6.15)%比(95.32±6.74)%]显著低于对照组,血清ZEB1[(4.76±0.71)ng/L比(2.15±0.36)ng/L]、CK、CK-MB[(46.25±12.52)U/L比(23.22±9.64)U/L]及CRP水平[(18.09±4.29)mg/L比(3.31±0.71)mg/L]均显著高于对照组(P<0.05)。重症组血清miR-204-5p水平、血氧饱和度显著低于轻症组,血清ZEB1、CK、CK-MB及CRP水平均显著高于轻症组(P<0.05)。血清miR-204-5p与CPIS评分、CK-MB及CRP水平呈负相关(r=-0.33、-0.30、-0.40,P<0.05),与血氧饱和度呈正相关(r=0.41,P<0.05);血清ZEB1水平与CPIS评分、CK-MB及CRP水平呈正相关(r=0.28、0.37、0.44,P<0.05),与血氧饱和度呈负相关(r=-0.36,P<0.05);血清miR-204-5p与ZEB1水平呈负相关(r=-0.56,P<0.05)。预后不良组血清miR-204-5p水平、血氧饱和度低于预后良好组(P<0.05),血清ZEB1、CK、CK-MB及CRP水平均显著高于预后良好组(P<0.05)。ROC曲线显示,miR-204-5p对NP不良预后预测的AUC为0.89,截断值为0.47,其灵敏度、特异度分别为95.12%、72.41%;ZEB1对NP不良预后预测的AUC为0.92,截断值为5.16,其灵敏度、特异度分别为87.80%、86.21%;二者联合对预后预测的AUC为0.99,明显高于二者单独诊断,其灵敏度、特异度分别为97.56%、94.83%。结论 miR-204-5p在NP病儿血清中低表达,ZEB1在NP病儿血清中高表达,均与NP病情严重程度有关,二者联合对NP不良预后具有较高的预测价值。

肺腺癌中锌指E-盒结合同源异型盒蛋白-1、-2和增殖细胞核抗原表达及意义

目的检测肺腺癌中锌指E-盒结合同源异形盒蛋白(ZEB)-1、ZEB-2和增殖细胞核抗原(PCNA)标记的增殖指数的关系。方法 59例肺腺癌患者临床资料及术后蜡块组织作为观察组,同期肺肿物切除后距肿物边缘>3 cm肿瘤周围正常肺组织59例作为对照组,应用免疫组化方法检测两组中ZEB-1、-2和PCNA的表达。结果两组中ZEB-1、-2和PCNA的阳性率差别显著,观察组中ZEB-1、-2和PCNA表达的阳性率与肿瘤的最大径、肿瘤的胸膜累犯密切相关,PCNA表达的阳性率与淋巴结转移及是否伴有坏死密切相关。观察组中ZEB-1和PCNA的表达呈正相关。结论肺腺癌术后组织中ZEB-1、-2和PCNA高表达,不仅对肿瘤的形成有重要意义,还可以促进肿瘤的进展,尤其是PCNA高表达可能对肿瘤进展有多种生物学意义。

微小RNA-128-3p通过调控锌指盒同源结合蛋白1抑制卵巢癌细胞上皮-间充质转化

目的 探讨微小RNA(miR)-128-3p对卵巢癌细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响及其对锌指E盒同源结合蛋白1(ZEB1)的调控机制。方法 通过Real-time PCR技术检测上皮性卵巢癌组织(EOC)及癌旁正常组织(各30例)中miR-128-3p的表达量并观察其是否存在差异;选取2种人卵巢癌细胞系SKOV3和A2780,分别转染miR-128-3p模拟物(miR-128-3p mimic)组和阴性对照模拟物(NC mimic)组,利用Real-time PCR技术检测4组miR-128-3p的表达量并验证干扰效果,用Transwell实验观察4组细胞的迁移及侵袭能力。通过双荧光素酶实验验证miR-128-3p与ZEB1的调控关系,用Western blotting检测过表达miR-128-3p后ZEB1蛋白的表达水平;在SKOV3和A2780细胞系中转染pcDNA-ZEB1使其过表达ZEB1,分为NC mimic组,miR-128-3p mimic组,miR-128-3p mimic+pcDNA-ZEB1组,用Western blotting检测6组细胞中EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)及波形蛋白(vimentin)的表达水平。结果 Real-time PCR结果显示,与癌旁组织相比,miR-128-3p在EOC组织中表达下降(P<0.01);miR-128-3p mimic组miR-128-3p相对表达量高于NC mimic组,而迁移细胞数量、侵袭细胞数量低于NC mimic组(P<0.01)。双荧光素酶实验结果显示,miR-128-3p对ZEB1存在负向调控作用。SKOV3、A2780细胞中miR-128-3p mimic组的ZEB1蛋白相对表达量均低于NC mimic组,而E-cadhein的蛋白相对表达量均高于NC mimic组(P<0.01)。MiR-128-3p mimic+pcDNA-ZEB1组E-cadhein的蛋白相对表达量低于miR-128-3p mimic组(P<0.01)。SKOV3、A2780细胞中miR-128-3p mimic组vimentin的蛋白相对表达量低于NC mimic组,miR-128-3p mimic+pcDNA-ZEB1组vimentin的蛋白相对表达量高于miR-128-3p mimic组(P<0.01)。结论 MiR-128-3p在上皮性卵巢癌组织中表达下降,其原因可能是通过调控ZEB1影响EMT相关蛋白表达而参与卵巢癌细胞EMT过程。

卵巢癌组织锌指E盒同源结合蛋白1、微小RNA-574-3p的表达及其临床意义研究

目的探究卵巢癌组织锌指E盒同源结合蛋白1(ZEB1)、微小RNA-574-3p(miR-574-3p)表达水平与患者临床病理特征及预后的关系。方法选取2015年1月至2018年1月于浙江医院行手术治疗的90例卵巢癌患者的癌组织作为卵巢癌组,选取其相应癌旁正常组织作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测两组组织中miR-574-3p、ZEB1mRNA的表达水平;采用Kaplan-Meier法分析卵巢癌组织中miR-574-3p、ZEB1的表达与患者生存时间的关系;采用多因素Cox回归分析影响卵巢癌患者预后的相关因素。结果与对照组比较,卵巢癌组组织中miR-574-3p表达水平较低(P<0.05),ZEB1表达水平较高(P<0.05);卵巢癌组组织中miR-574-3p与ZEB1mRNA的表达呈负相关(P<0.05);miR-574-3p、ZEB1均与患者淋巴结或腹膜转移、国际妇产科联盟(FIGO)分期相关(P<0.05),ZEB1低表达的卵巢癌患者平均生存时间显著长于ZEB1高表达的卵巢癌患者(P<0.001),miR-574-3p低表达的卵巢癌患者平均生存时间显著短于miR-574-3p高表达的卵巢癌患者(P<0.001);miR-574-3p低表达、ZEB1高表达是影响卵巢癌患者不良预后的独立危险因素(P<0.05)。结论卵巢癌组织中ZEB1表达上调,miR-574-3p表达下调,且其与患者淋巴结或腹膜转移、FIGO分期相关,可能成为卵巢癌治疗的新靶点。

结直肠癌组织中锌指E盒同源结合蛋白-1、赖氨酸酰氧化酶-2的表达变化及意义

目的探讨结直肠癌组织中锌指E盒同源结合蛋白-1(ZEB1)与赖氨酸酰氧化酶-2(LOXL2)的表达变化及其意义。方法利用免疫组织化学法检测83例结直肠癌患者手术切取的癌组织与癌旁组织中ZEB1与LOXL2的表达水平,并进行比较。分析癌组织ZEB1与LOXL2的表达与患者临床病理参数的关系。采用Kaplan-Meier生存曲线评估预后。结果 ZEB1、LOXL2在结直肠癌组织中的阳性表达率高于癌旁组织(P均<0.05)。结直肠癌组织中,ZEB1及LOXL2的阳性表达率与TNM分期、浸润程度、淋巴结转移相关(P均<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤组织分化程度无关(P均>0.05),且ZEB1与LOXL2的表达呈正相关(r=0.348,P=0.001)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果表明,ZEB1及LOXL2表达阴性的患者术后生存率和平均生存时间均高于ZEB1及LOXL2表达阳性的患者(P均<0.05)。结论 ZEB1与LOXL2在结直肠癌组织中异常高表达,且参与病情进展及促进不良预后。

高糖通过调控miR-429/ZEB1轴对胰腺癌细胞免疫逃逸的影响

目的探究高糖干预对胰腺癌细胞免疫逃逸的影响及作用分子机制。方法采用不同浓度葡萄糖(0、7.5、15、30 mmol/L)处理PANC-1细胞24 h构建高糖干预的PANC-1细胞。将miR-429 mimics及其阴性对照(mimics NC)转染至PANC-1细胞,分为对照组、HG组、HG+mimics NC组、HG+mimics组、HG+mimics+oe-NC组和HG+mimics+oe-ZEB1组。流式细胞术检测细胞表面分子细胞程序性死亡-配体1(PD-L1)表达水平;qRT-PCR检测细胞miR-429和锌指E-盒结合同源盒蛋白1(ZEB1)mRNA表达水平;Western blot检测细胞ZEB1蛋白表达水平。将以上各组PANC-1细胞与CD8^(+)T细胞建立共培养体系,CCK-8检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡水平;乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测CD8^(+)T细胞对PANC-1细胞的杀伤作用;采用双荧光素酶报告系统验证miR-429和ZEB1的靶向调控关系。结果HG可促进PANC-1细胞表面分子PD-L1及ZEB1表达(P<0.05),抑制miR-429表达,且呈浓度依赖性。miR-429过表达可显著抑制HG诱导的PANC-1细胞表面分子PD-L1表达,而过表达ZEB1可逆转miR-429过表达对HG诱导PANC-1细胞表面分子PD-L1表达的抑制作用。建立与CD8^(+)T细胞共培养体系后,与对照组比较,HG组PANC-1细胞增殖活性明显增加,细胞凋亡率和杀伤活性明显降低(P<0.05);与HG+mimics NC组比较,HG+mimics组PANC-1细胞增殖活性明显降低,细胞凋亡水平和杀伤活性明显升高(P<0.05)。与HG+mimics+oe-NC组比较,HG+mimics+oe-ZEB1组PANC-1细胞增殖活性明显增加,细胞凋亡率和杀伤活性明显降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-429靶向负调控ZEB1。结论高糖通过下调miR-429表达水平,靶向负调控ZEB1 mRNA的表达,提高PANC-1细胞表面分子PD-L1表达水平,进而促进PANC-1细胞免疫逃逸。

LncRNA HCG11通过调控miR-144-3p/ZEB1分子轴影响直肠癌的发生及转移

目的:探究lncRNA HCG11通过调控miR-144-3p上调锌指蛋白E-盒结合同源异形盒-(1zine finger E box binding homeobox 1, ZEB1)基因的表达促进结直肠癌(colorectal cancer,CRC)发生及转移的分子机制。方法:收集2013年1月至2018年1月云南省肿瘤医院结直肠外科手术切除的78例CRC组织标本及其癌旁组织标本,采用qPCR检测HCG11在CRC癌组织及细胞系中表达情况,以构建的HCG11敲降载体、miR-144-3p模拟物及抑制剂转染CRC细胞株SW480及SW620,CCK-8法及克隆形成实验检测细胞的增殖情况,Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭情况。通过Wb及免疫荧光实验检测ZEB1及上皮间质特异蛋白(E-cadherin、Vimentin、ɑ-catenin、Sox2、Nestin、Oct4及Nanog)的表达,通过双荧光素酶报告基因检测HCG11、miR-144-3p及ZEB1的靶向调控关系。建立小鼠移植瘤模型验证敲降HCG11后对小鼠移植瘤生长的抑制作用。结果:HCG11在CRC癌组织的表达显著高于癌旁组织(P<0.01),其在多种CRC细胞系中表达水平明显高于正常肠上皮细胞(均P<0.05);HCG11的表达与CRC患者肿瘤转移、临床分期及预后密切相关(P<0.05或P<0.01)。敲降HCG11后显著抑制CRC细胞的增殖、迁移、侵袭、上皮间质转化及干细胞转化(均P<0.05)。敲降HCG11显著上调miR-144-3p的表达水平(P<0.05),过表达miR-144-3p可显著抑制ZEB1基因的表达(P<0.05)及明显降低双荧光素酶活性(P<0.05)。结论:HCG11通过调控miR-144-3p上调ZEB1的表达,从而促进CRC的发生及转移,HCG11可作为CRC诊断及治疗的靶点。

LncRNA ZEB2-AS1调控miR-574-3p/ZEB1轴对卵巢癌细胞迁移及侵袭的影响

目的探讨长链非编码核糖核酸(LncRNA)锌指E盒结合同源盒蛋白2反义RNA(LncRNA ZEB2-AS)1对卵巢癌细胞迁移、侵袭的影响及可能的作用机制。方法体外培养人卵巢癌细胞(SKOV3、SW626、A2780)和正常人卵巢上皮细胞(HOSEpiC),实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中ZEB2-AS1、miR-574-3p和锌指E盒结合蛋白(ZEB)1的水平。取对数生长期的SW626细胞,分为对照组、pcDNA3.1-NC组、pcDNA3.1-ZEB2-AS1组、si-NC组、si-ZEB2-AS1组、si-ZEB2-AS1+inhibitor-NC组、si-ZEB2-AS1+miR-574-3p inhibitor组。qRT-PCR检测细胞中ZEB2-AS1、miR-574-3p表达,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western印迹检测细胞ZEB1和迁移、侵袭相关蛋白的表达;双荧光素酶报告基因检测验证ZEB1与miR-574-3p的靶向关系。结果与正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC相比,人卵巢癌SKOV3、SW626、A2780细胞中ZEB2-AS1、ZEB1水平明显升高,miR-574-3p水平明显降低(P<0.05),且SW626细胞中ZEB2-AS1表达水平最高。转染后,与对照组相比,pcDNA3.1-ZEB2-AS1组细胞增殖、迁移和侵袭能力及ZEB1、N-钙黏蛋白(cadherin)、波形蛋白(VIM)、基质金属蛋白酶(MMP)-9表达明显升高,E-cadherin表达明显降低(P<0.05);si-ZEB2-AS1组细胞增殖、迁移和侵袭能力及ZEB1、N-cadherin、VIM、MMP-9表达明显降低,E-cadherin表达明显增加(P<0.05)。与si-ZEB2-AS1组相比,si-ZEB2-AS1+miR-574-3p inhibitor组细胞增殖、迁移和侵袭能力及ZEB1、N-cadherin、VIM、MMP-9表达明显升高,E-cadherin表达明显降低(P<0.05)。双荧光素酶结果显示,高表达miR-574-3p可明显抑制ZEB1 WT的荧光素酶活性(P<0.05)。结论在卵巢癌中,LncRNA ZEB2-AS1过表达可能通过下调miR-574-3p,上调ZEB1的表达,进而诱导上皮-间质转化(EMT),促进卵巢癌细胞的迁移与侵袭。

超声微泡介导的膀胱癌抑制因子miR-490-5p调控转录因子ZEB1对膀胱癌细胞的影响研究

目的:探究微泡介导的膀胱癌抑制因子微小核糖核酸(miR)-490-5p调控锌指E-盒结合同源盒蛋白1(ZEB1)对膀胱癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:检测人膀胱上皮细胞.人膀胱癌细胞VM-CUB-3、639V和5637、HT-1197细胞中mi R-490-5p和ZEB1 mRNA与蛋白的表达情况。选择人膀胱癌639V细胞株进行实验,对639V细胞给予1%、5%、10%、20%浓度水平的微泡以及超声强度为0.5 W/cm2、0.75 W/cm2的超声照射30 s处理,筛选超声强度为0.5 W/cm2、微泡浓度为10%;将常规培养639V细胞纳入对照组,将培养及微泡制备后的639V细胞分别纳入超声微泡组、超声微泡转染miR-490-5p组、脂质体转染miR-490-5p组及超声微泡转染miR-490-5p+ZEB1组,分别检测5组639V细胞增殖抑制率、侵袭细胞数及划痕愈合率,并用Westernblot法检测5组639V细胞ZEB1、增殖细胞核抗原(PCNA)、钙黏蛋白E(E-cad)和钙黏蛋白N(N-cad)水平。结果:膀胱癌VM-CUB-3、639V、5637和HT-1197细胞与人膀胱上皮细胞相比,miR-490-5p水平降低,ZEB1mRNA和ZEB1蛋白水平均升高,其中639V细胞差异最明显。在超声0.5 W/cm2、微泡浓度10%的处理条件下,超声微泡组细胞增殖抑制率和E-cad蛋白均高于对照组,差异有统计学意义(t=22.282,t=4.517;P<0.05),PCNA蛋白水平、侵袭细胞数和N-cad蛋白和划痕愈合率降低,差异有统计学意义(t=2.441,t=2.325,t=4.572,t=4.417;P<0.05);超声微泡转染miR-490-5p组、脂质体转染miR-490-5p组细胞增殖抑制率、E-cad蛋白高于超声微泡组,差异有统计学意义(t细胞增殖抑制率=16.902,t=12.426;tE-cad=5.586,t=2.765;P<0.05);PCNA蛋白水平、侵袭细胞数、N-cad蛋白和划痕愈合率低于超声微泡组,差异有统计学意义(tPCNA蛋白水平=7.530,t=4.164;t侵袭细胞数=9.007,t=5.682;tN-cad蛋白=8.089,t=4.297;t划痕愈合率=11.366,t=6.665,P<0.05)。超声微泡转染miR-490-5p+ZEB1组细胞增殖抑制率、E-cad蛋白低于超声微泡转染miR-490-5p组,差异有统计学意义(t=2.903,t=6.114,P<0.05),PCNA蛋白水平、侵袭细胞数、N-cad蛋白和划痕愈合率高于超声微泡转染miR-490-5p组,差异有统计学意义(t=6.586,t=4.487,t=5.695,t=4.603,P<0.05);双荧光素酶报告基因显示miR-490-5p与ZEB1存在靶向关系。结论:超声微泡介导的miR-490-5p可能通过负向调控ZEB1,抑制人膀胱癌细胞639V增殖、侵袭及迁移,超声微泡介导是一种行之有效的转染方式。

miR-192-5p通过靶向ZEB2调控胰腺癌PANC-1细胞的恶性生物学行为

目的:探讨miR-192-5p靶向E盒锌指结合同源框2(ZEB2)对胰腺癌PANC-1细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法:利用TCGA数据库数据分析miR-192-5p和ZEB2在胰腺癌组织中的表达及两者的相关性。采用qPCR法和WB法分别检测人正常胰腺上皮细胞HPNE和胰腺癌PANC-1细胞中miR-192-5p和ZEB2的表达水平。利用脂质体转染技术转染PANC-1细胞,实验分为miR-192-5p mimic组、Mimic NC组、miR-192-5p inhibitor组、Inhibitor NC组、Mimic NC+pcDNA3.1组、miR-192-5p mimic+pcDNA3.1组、miR-192-5p mimic+pcDNA3.1-ZEB2组。CCK-8法、克隆形成、划痕愈合、Transwell实验分别检测转染PANC-1细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力。qPCR法、WB法、双重免疫荧光实验检测PANC-1细胞中ZEB2、E-cadherin、vimentin的表达水平。通过生物信息学网站预测miR-192-5p的靶基因,并利用双荧光素酶报告基因实验验证miR-192-5p对靶基因的调控作用。结果:胰腺癌组织中ZEB2的表达显著高于正常胰腺组织(P<0.01),且胰腺癌组织中miR-192-5p和ZEB2表达呈负相关(r=-0.419,P<0.01)。与HPNE细胞比较,PANC-1细胞中miR-192-5p低表达、ZEB2蛋白高表达(均P<0.01)。miR-192-5p过表达后,PANC-1细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力均显著降低,E-cadherin的mRNA和蛋白表达均上调、vimentin和ZEB2 mRNA和蛋白表达均下调;而抑制miR-192-5p后得到了相反的结果(P<0.05或P<0.01)。miR-192-5p靶向调控ZEB2的表达,过表达ZEB2可部分逆转上调miR-192-5p对PANC-1细胞增殖、迁移、侵袭和EMT进程的抑制作用。结论:miR-192-5p通过靶向ZEB2调控胰腺癌PANC-1细胞的恶性生物学行为。

ZEB1-AS1及其相关基因ZEB1在肿瘤免疫微环境中的作用研究进展

锌指E-盒结合同源异形盒1-反义链1 (ZEB1-AS1)属于长链非编码RNA (Lnc RNA)家族,是E盒锌指蛋白1基因(ZEB1)的反义蛋白产物,可通过上调ZEB1的活性促进肿瘤浸润、转移,其表达的失调与多种肿瘤的发生、发展密切相关,有望成为肿瘤治疗的重要分子靶点。近年来,大量研究表明ZEB1-AS1及其相关基因ZEB1可通过调节肿瘤免疫微环境影响肿瘤恶性进展及治疗效果。本文主要阐述ZEB1-AS1及ZEB1与肿瘤相关免疫细胞、炎症相关细胞因子、炎性信号通路之间的相互作用,为肿瘤的靶向及免疫治疗提供新思路。

下调lncRNA ZEB1-AS1靶向促进miR-133a-3p表达抑制口腔鳞癌细胞SCC15侵袭和迁移的分子机制

目的 研究下调长链非编码RNA(lncRNA)锌指E-盒结合同源异形盒1-反义链(ZEB1-AS)1靶向促进miR-133a-3p体外调控口腔鳞癌细胞SCC15迁移及侵袭的分子机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(Rt-PCR)分析并检测不同的口腔鳞癌细胞HN-6、SCC15、CAL27及正常口腔上皮细胞HOK中ZEB1-AS1表达变化。将口腔鳞癌细胞SCC15分成Control组、sh-NC(转染shRNA control)组、sh-ZEB1-AS1(转染ZEB1-AS1 shRNA)组,利用CCK-8方法分析检测细胞的增殖情况,利用Transwell小室分析并检测细胞的迁移及侵袭能力变化,Western印迹并检测N-钙黏蛋白(cadherin)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、E-cadherin的表达情况。利用Starbase生物信息学软件预测ZEB1-AS1靶基因,荧光素酶报告系统鉴定二者的靶向关系。在口腔鳞癌细胞SCC15中将ZEB1-AS1 shRNA、miR-133a-3p inhibitor转染,同样分析并检测各组细胞的增殖水平及迁移、侵袭能力变化和各组细胞内N-cadherin、MMP-2、E-cadherin、MMP-9蛋白的表达情况。结果 口腔鳞癌细胞CAL27、HN-6、SCC15中ZEB1-AS1水平明显高于正常口腔上皮细胞HOK(P<0.05)。口腔鳞癌细胞CAL27、HN-6中ZEB1-AS1水平明显低于口腔鳞癌细胞SCC15(P<0.05)。与Control、sh-NC组比较,sh-ZEB1-AS1组口腔鳞癌细胞SCC15中ZEB1-AS1水平明显降低,增殖能力明显降低,同时细胞的迁移及侵袭能力也明显下降,蛋白MMP-9、N-cadherin、MMP-2的表达水平明显降低,而E-cadherin表达水平明显升高(P<0.05)。下调ZEB1-AS1靶向促进miR-133a-3p表达。miR-133a-3p inhibitor逆转下调ZEB1-AS1对口腔鳞癌细胞SCC15增殖、迁移、侵袭和MMP-2、MMP-9、N-cadherin、E-cadherin蛋白表达作用。结论 下调lncRNA ZEB1-AS1靶向促进miR-133a-3p抑制口腔鳞癌细胞SCC15增殖、侵袭和迁移。

铁皮石斛多糖通过上皮-间质转化抗肝纤维化

【目的】探讨铁皮石斛多糖(DOP)对CCl4诱导肝纤维化(HF)的影响及其作用机制。【方法】将56只雄性SD大鼠随机分为七组:正常组(NG)、模型组(MG)、秋水仙碱组(CG,0.1mg/kg)、扶正化瘀组(FG,0.45g/kg)、低剂量DOP组(LDG,0.05 g/kg)、中剂量DOP组(MDG,0.1 g/kg)和高剂量DOP组(HDG,0.2 g/kg),每组8只。采用皮下注射40%CCl4橄榄油混合液制备HF大鼠模型,每3 d注射1次,共10周。造模第6周结束后,各药物组分别给予秋水仙碱、扶正化瘀和DOP溶液灌胃处理,NG和MG大鼠给予等量0.9%生理盐水处理,每天1次,连续4周。各组大鼠肝组织病理学采用苏木精-伊红(HE)、Masson染色、天狼星红(Sirius red)染色检测;肝功能和肝纤四项指标采用血液生化法检测;肝组织中α-SMA、Col-I、E-cadherin、ZEB1基因和蛋白的表达分别采用RT-qPCR法和Western Blot法检测。【结果】HE、Masson、Sirius red染色结果显示MG大鼠肝脏组织出现典型的HF病理特征,LDG、MDG和HDG大鼠HF均出现不同程度改善。肝功能检测结果显示,LDG、MDG、HDG大鼠的血清AST、TBIL、AKP水平与MG相比均显著降低(P<0.05或<0.01),血清ALT水平除LDG外均显著降低(P<0.05或<0.01)。肝纤四项指标检测结果显示,LDG、MDG、HDG大鼠的血清HA、LN、PC-Ⅲ、COL-Ⅳ含量与MG比较均明显下降(P<0.05或<0.01)。基因、蛋白检测结果显示,LDG、MDG、HDG大鼠肝组织中α-SMA、COL-I、ZEB1的相对表达量明显降低(P<0.05或<0.01),而E-cadherin的相对表达量升高(P<0.05或<0.01)。此外,HA、α-SMA、COL-I、ZEB1、E-cadherin的表达均存在一定的DOP剂量依赖性。【结论】DOP可通过抑制大鼠肝组织的上皮-间质转化减轻CCl4诱导的HF程度。

ZEB1-AS1在结肠癌中表达及与铂类药物化疗敏感性的关系

目的探讨结肠癌组织中锌指E-盒结合同源异形盒(ZEB)1-反义链(AS)1的表达及其与铂类药物化疗敏感性的关系。方法选取结肠癌患者120例为研究组,收集患者手术过程中切除的癌组织及癌旁正常组织,实时荧光定量(qRT)-PCR法检测癌组织及癌旁组织中ZEB1-AS1的表达情况;分析ZEB1-AS1高低表达与临床病理特征的相关性;分析ZEB1-AS1高低表达与铂类化疗客观有效率的关系;Kaplan-Meier法分析ZEB1-AS1与5年生存期的关系;Cox回归模型分析影响患者预后不良的因素。结果研究组ZEB1-AS1水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结肠癌患者ZEB1-AS1表达与年龄、性别、肿瘤直径不相关(P>0.05),与TNM分期、淋巴结转移相关(P<0.05)。ZEB1-AS1低表达患者治疗有效率显著高于ZEB1-AS1高表达患者(P<0.05)。Kaplan-Meier分析结果显示,ZEB1-AS1高表达患者5年生存率显著低于ZEB1-AS1低表达患者(P<0.05)。多因素Cox分析显示,TNM分期Ⅳ期、淋巴结转移、化疗无效、ZEB1-AS1高表达均是影响结肠癌患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论ZEB1-AS1在结肠癌患者组织中表达水平升高,其高表达与TNM分期、淋巴结转移有关,ZEB1-AS1低表达者应用奥沙利铂辅助治疗有效率高,ZEB1-AS1是影响结肠癌患者预后不良的危险因素。

ZEB1的表达与肺鳞状细胞癌侵袭及转移的关系

目的:探讨锌指E-盒结合同源异形盒-1(ZEB1)在肺鳞状细胞癌组织中的表达,分析ZEB1mRNA和蛋白的表达水平与肺鳞状细胞癌侵袭及转移的关系。方法:选择45例肺鳞状细胞癌行外科手术切除的患者,根据所取组织与肿瘤的距离不同分为肺鳞状细胞癌组织和癌旁正常肺组织,采用RT-PCR和Western blotting方法检测肺鳞状细胞癌组织和癌旁正常肺组织中ZEB1mRNA和蛋白的表达情况,并分析肺鳞状细胞癌不同临床病理特征ZEB1mRNA和蛋白的表达差异;构建ZEB1特异性siRNA载体,感染肺癌NCI-H2170细胞,设未转染对照组、转染对照组和ZEB1siRNA转染组,应用Western blotting方法从蛋白质水平检测各组干扰质粒对ZEB1基因的干扰效果,通过Transwell侵袭小室观察各组NCI-H2170细胞侵袭能力的变化。结果:ZEB1mRNA在肺鳞状细胞癌组织中的阳性表达率显著高于癌旁正常肺组织(P<0.05);在淋巴结转移、远处转移阳性者肺癌组织中的阳性表达率显著高于其在淋巴结转移、远处转移阴性者肺癌组织中的表达(P<0.05);但ZEB1mRNA的表达与肺鳞状细胞癌患者的性别、年龄及肿瘤大小及分化程度无关(P>0.05)。肺鳞状细胞癌组织中ZEB1蛋白的表达与ZEB1mRNA的表达结果类似,ZEB1蛋白在肺鳞状细胞癌组织中的表达量显著高于癌旁正常肺组织(P<0.05);在淋巴结转移和远处转移阳性者癌组织中的表达显著高于其在淋巴结转移和远处转移阴性者癌组织中的表达(P<0.05)。下调NCI-H2170细胞中ZEB1蛋白的表达后,NCI-H2170细胞的侵袭及转移能力明显降低(P<0.05)。结论:ZEB1在肺鳞状细胞癌组织中高表达,其表达变化与肺鳞状细胞癌的病理特征密切相关;运用RNA干扰技术有效沉默NCI-H2170细胞的ZEB1基因后,可显著降低NCI-H2170细胞的侵袭及转移能力,提示ZEB1在肺癌的发生发展中起重要作用,抑制ZEB1的表达可能成为一种治疗肺癌的方法。

长链非编码RNA SNHG16对人宫颈癌细胞SiHa迁移侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)SNHG16通过调控微RNA(miR)-216-5p/锌指E盒结合同源框1(ZEB1)轴对人宫颈癌细胞SiHa迁移、侵袭的影响及机制。方法将对数生长期人宫颈癌细胞SiHa随机分为干扰小RNA(siRNA)组、阴性对照组和空白组。siRNA组、阴性对照组SiHa细胞应用脂质体转染法分别进行lncRNA SNHG16-siRNA、阴性对照-siRNA质粒转染,空白组细胞不作处理。转染后48 h,采用倒置荧光显微镜观察转染效率,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法测定各组SiHa细胞lncRNA SNHG16 mRNA相对表达量,生物信息学软件靶向预测和双荧光素酶实验验证lncRNA SNHG16与miR-216-5p的靶向关系,划痕实验测定各组细胞迁移能力,Transwell小室实验测定各组细胞侵袭能力,qRT-PCR测定各组细胞miR-216-5p、ZEB1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA相对表达量,Western blot法测定各组细胞ZEB1、E-cadherin相对表达量。结果转染48 h后,各组细胞转染效率均>80%;siRNA组SiHa细胞lncRNA SNHG16 mRNA相对表达量显著低于空白组和阴性对照组(P<0.05),空白组与阴性对照组lncRNA SNHG16 mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。LncRNA SNHG16与miR-216-5p基因3′UTR存在互补结合位点;siRNA组野生型荧光素酶报告质粒相对活性值显著高于空白组和阴性对照组(P<0.05),空白组与阴性对照组野生型荧光素酶报告质粒相对活性值比较差异无统计学意义(P>0.05)。siRNA组SiHa细胞迁移率显著低于空白组和阴性对照组(P<0.05),空白组与阴性对照组细胞迁移率比较差异无统计学意义(P>0.05);siRNA组每个视野平均穿膜细胞数显著少于空白组和阴性对照组(P<0.05),空白组与阴性对照组每个视野平均穿膜细胞数比较差异无统计学意义(P>0.05)。siRNA组SiHa细胞miR-216-5p mRNA相对表达量、E-cadherin mRNA及蛋白相对表达量均高于空白组和阴性对照组(P<0.05),空白组与阴性对照组miR-216-5p mRNA相对表达量、E-cadherin mRNA及蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);siRNA组SiHa细胞ZEB1 mRNA及蛋白相对表达量均显著低于空白组和阴性对照组(P<0.05),空白组与阴性对照组ZEB1 mRNA及蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论沉默lncRNA SNHG16可抑制人宫颈癌细胞SiHa的迁移与侵袭能力,其作用机制可能与调控miR-216-5p/ZEB1轴相关基因和蛋白表达有关。

SNHG6通过上调ZEB1表达促进食管鳞状细胞癌TE1细胞的侵袭和转移

目的:探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)核仁小分子RNA宿主基因6(small nuclear RNA host gene 6, SNHG6)促进食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞侵袭和转移的作用及其分子生物学机制。方法:使用实时定量聚合酶链式反应(real time quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测36例ESCC组织及其癌旁组织(标本收集自河北医科大学第四医院2019年2月至8月外科手术的ESCC患者)中SNHG6表达水平;使用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测ESCC细胞系(TE1、Yes-2、Eca9706和Kyse150)中SNHG6表达水平,选用SNHG6高表达的TE1细胞,通过转染SNHG6-siRNA敲低该细胞中SNHG6表达;通过集落形成实验、划痕愈合实验和Transwell侵袭实验分别检测SNHG6敲低前后TE1细胞克隆形成、迁移和侵袭能力的变化;采用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测SNHG6敲低前后TE1细胞中锌指蛋白E-盒结合同源异形盒-1(zinc finger E-box binding homeobox factor 1, ZEB1)、MMP-2和MMP-9蛋白表达的变化。结果:SNHG6在ESCC组织和细胞系中均呈高表达状态(均P<0.01),且在TE1细胞中高表达最为显著。转染SNHG6-siRNA后TE1细胞中SNHG6表达水平显著降低(P<0.01),si-SNHG6-1和si-SNHG6-2组TE1细胞的克隆形成、迁移和侵袭能力均显著低于对照组(均P<0.01),两组细胞中MMP-2、MMP-9和ZEB1表达水平均显著低于对照组(均P<0.05)。结论:ESCC组织中呈高表达的SNHG6可促进TE1细胞的恶性生物学行为,其机制可能涉及ZEB1表达的上调。

miR-205与乳腺癌关系的研究进展

微小RNA(miRNAs)作为一类进化保守的非编码RNAs,通过与靶基因mRNA的序列互补配对抑制其翻译或启动降解来发挥作用。越来越多的研究结果证实,miRNAs通过发挥促癌或抑癌作用参与调控多种肿瘤的发生与发展。其中mi R-205在乳腺癌组织中表达普遍降低,将miR-205在乳腺癌细胞中过表达,则其能够通过抑制表皮生长因子受体3(ERBB3)、锌指E-盒结合同源异形盒(ZEB)1、ZEB2、血管内皮生长因子A(VEGFA)等靶基因的表达,从而抑制癌细胞增殖、转移与侵袭能力,最终影响乳腺癌的治疗敏感性与预后。本综述重点阐述了miR-205在乳腺癌中对细胞增殖、凋亡、侵袭、转移等相关基因及信号通路的调控作用与机制,miR-205与乳腺癌患者治疗敏感性以及患者预后的相关性,以期为乳腺癌的诊断、治疗及预后判断提供新的思路与治疗靶点。