锌螯合肽的两端排序法定量构效关系

为了研究锌螯合肽结构与生物活性之间的关系,构建定量构效关系(quantitative structure-activity relationship,QSAR)模型。采取两端排序法将56条不同长度的合成肽规格化,采用18种氨基酸描述符,利用偏最小二乘法进行分析。发现5种氨基酸描述符对应的QSAR模型的相关系数达到建模要求,分别为描述符FASGAI、Z、HESH、C和ST,其中描述符FASGAI最优(R^2=0.827 3、Q^2=0.602 2、估计均方根误差=0.168 6、Q^2_(ext)=0.717 2、预测方根误差=0.255 8)。对描述符FASGAI所构建的模型进一步分析发现,多肽序列中的氨基酸位置对多肽锌螯合活性的影响力依次为C3>N3>C1>N1>N2>C2,同时,多肽各位置上氨基酸残基的立体属性会影响其螯合活性。该模型的成功建立为锌螯合肽定量构效关系的研究提供了探索性思路。

乳源锌螯合肽酶解制备及其螯合特性分析

为研究乳源锌螯合肽酶解制备最佳工艺条件及其螯合特性,从而为促锌吸收活性物质的研究提供基础,以牛乳酪蛋白为原料,以锌螯合率为指标,确定胰蛋白酶酶解制备锌螯合肽的最佳工艺条件,并对最优条件下酶解物的分子质量分布及氨基酸组成进行测定,同时通过傅里叶变换红外扫描和紫外扫描手段对酶解物和肽锌复合物进行结构表征对比分析。结果显示,最佳酶解条件为时间3 h,温度50 ℃,pH 8.5,底物质量浓度为70 g/L,加酶量0.6%(质量分数)。最佳条件下,酶解物的锌螯合率为87.78%,分子肽分子质量小,人体必需氨基酸含量丰富。螯合前后光谱存在明显差异,Zn^2+与羧基等进行了配位结合。乳源锌螯合肽具有较高的锌螯合活性,实验结果为补锌剂的生产应用奠定了基础。

薏米多肽-钙、锌螯合物制备及结构表征

目的:制备1种薏米多肽-钙、锌螯合物并研究其结构。方法:利用枯草芽孢杆菌和嗜热链球菌混合发酵薏米,采用葡聚糖凝胶Sephadex G-15、反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离纯化薏米发酵液得到薏米多肽(CSP),Tricine-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(Tricine-SDS-PAGE)电泳检测其分子质量。以锌螯合率和钙螯合率为指标,在单因素实验的基础上,采用响应面试验优化薏米多肽-钙、锌螯合物(CSP-Ca-Zn)的制备工艺,采用紫外光谱、红外光谱和荧光光谱表征其结构。结果:薏米发酵液经Sephadex G-15分离得到4个峰,其中A3的钙、锌螯合率最高。RP-HPLC分离A3得到的CSP纯度达93.91%,其分子质量约7.8 ku。CSP与Ca-Zn螯合的最佳制备工艺为:CSP与钙、锌质量比4.4∶1,钙、锌质量比1∶1,pH 3.7,在此条件下,锌螯合率、钙螯合率分别达到52.63%和63.79%。CSP与钙、锌螯合的主要位点是氨基氮、羧酸基,其空间结构也发生改变。结论:所确定的螯合工艺条件使CSP同时螯合钙、锌两种金属,为薏米多肽新产品的开发提供了技术参考,为制作食源性有机钙、锌补充剂提供了新思路。

灰树花多肽-锌螯合物对孕期缺锌鼠后代的改善作用

灰树花多肽-锌螯合物(Grifola frondosa Polypeptide Zinc Chelate,GPs-Zn)是灰树花多肽(Grifola frondosa Polypeptide,GPs)和锌离子的螯合产物,利用电镜扫描、X-射线粉末衍射技术、红外光谱和紫外光谱等技术对GPs-Zn进行结构分析;通过构建ICR母鼠缺锌模型,进一步探究GPs-Zn对孕期缺锌鼠后代的影响。表征结果表明,GPs和锌离子螯合成一种新的物质;红外光谱对比图发现肽链上的氨基和羧基都参与了锌离子的配位反应;紫外光谱图发现,GPs-Zn中多肽的羰基原子和锌离子结合,诱导紫外光谱的红移,表明GPs与锌离子结合形成GPs-Zn。动物实验表明:GPs-Zn可将缺锌仔鼠胸腺指数提高78.69%(雌鼠)和87.55%(雄鼠);脾脏指数提高40.28%(雌鼠)和43.22%(雄鼠);体质量提高89.98%(雌鼠)和88.30%(雄鼠);且血清的超氧化物歧化酶(SOD)活力提高了108.07%(雌鼠)和26.16%(雄鼠);锌浓度提高14.74%(雌鼠)和29.33%(雄鼠);碱性磷酸酶(AKP)水平降低52.28%(雌鼠)和62.48%(雄鼠)。综上可知,GPs-Zn对孕期缺锌鼠后代仔鼠的胸腺指数、脾脏指数、超氧化物歧化酶活力、锌浓度和碱性磷酸酶水平有一定改善作用。

酪蛋白肽锌螯合物的制备及体外消化分析

为开发安全高效且易吸收的补锌剂,利用碱性蛋白酶酶解和乳酸菌发酵相结合的方法制备生物活性肽,并以此多肽制备了酪蛋白肽锌螯合物。采用光谱法对螯合物结构进行表征,利用体外消化模型和Caco-2细胞实验对其胃肠消化特性及生物安全性进行评价。结果表明,制备酪蛋白肽的最优条件为酶解pH为9、碱性蛋白酶添加量为0.3%(w/v),乳酸菌发酵时间为12 h,此时反应体系中多肽含量为142.39±0.95 mg/g,对锌的螯合率为31.41%±0.97%。与锌螯合后,酪蛋白肽表面的致密结构遭到破坏,形成疏松的状态;光谱学分析表明,Zn^(2+)能与酪蛋白肽上的活性基团进行结合,螯合位点为羧基氧、羟基氧和氨基。体外模拟消化结果显示,酪蛋白肽锌螯合物在消化过程中锌溶解性优于硫酸锌;在胃肠消化后酪蛋白肽锌螯合物DPPH和ABTS+自由基的清除能力分别提升了26.19%±3.30%和71.96%±7.06%,而铁还原力下降了36.26%±2.80%;同时,在消化过程中肽锌螯合物的β-转角与无规则卷曲含量减少,β-折叠结构增加,Zn^(2+)起到了维持多肽结构的作用。细胞实验表明,当浓度大于0.4 mg/mL时,肽锌螯合物胃肠道消化物对Caco-2细胞表现出一定的细胞毒性。最后,利用质谱技术分别从酪蛋白水解物和肽锌螯合物中鉴定出15条和13条乳源多肽。研究结果可以为高效安全的酪蛋白肽锌补充剂的制备和应用提供科学依据。

三肽的锌螯合活性及定量构效关系分析

人工化学合成了51条三肽,测定了其锌螯合活性,形成待测数据库.分别采用18种氨基酸描述符对三肽序列进行表征,利用偏最小二乘法进行统计分析.结果表明,3种氨基酸描述符对应的定量构效关系(QSAR)模型的相关系数达到建模要求,描述符分别为FASGAI,Z和C,其中描述符FASGAI最优,R^2=0.8225,Q^2=0.5818,RMSEE=0.1628,Q^2ext=0.6760,RMSEP=0.2499.进一步分析描述符FASGAI所构建的模型发现,在三肽序列中,氨基酸位置对三肽锌螯合活性的影响力大小顺序为N_3>N_2>N_1,同时,多肽各位置上氨基酸残基的立体属性主要影响其螯合活性.

鱼蛋白小肽螯合锌对小鼠的补锌效果及抗氧化作用

以昆明种小鼠(Mus musculus)为试验材料,观察鱼蛋白小肽螯合锌对小鼠的补锌和抗氧化作用,研究鱼蛋白小肽螯合锌的生物活性。结果表明:鱼蛋白小肽螯合锌可以明显提高小鼠肝脏、血清中的锌含量,显著降低小鼠肝匀浆中丙二醛含量,提高总抗氧化能力。鱼蛋白小肽螯合锌具有明显的补锌效果和抗氧化效果,效果优于同剂量的葡萄糖酸锌或硫酸锌。

玉米肽-锌螯合物结构表征及抗氧化活性分析

以玉米肽(corn peptide,CP)为参照研究玉米肽-锌(CP-Zn)螯合物的结构表征和体内抗氧化活性变化。采用氨基酸分析、紫外扫描、红外光谱研究结构变化;对小鼠灌胃不同剂量的CP、CP-Zn(低、中、高剂量组分别为50、150、250 mg/(kg·d)),测其血清、肝脏中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力,分析比较CP、CP-Zn体内抗氧化活性。结果表明:螯合前后氨基酸组成、紫外吸收光谱、红外吸收光谱存在明显变化,Zn2+与—COOH、—NH_2、C=O进行了配位;CP高剂量、CP-Zn高、中剂量能显著降低小鼠血清、肝脏中MDA含量(P<0.05或P<0.01),提高SOD活力(P<0.01)、GSH-Px活力(P<0.05或P<0.01),CP-Zn抗氧化活性优于CP。由此可见,CP-Zn属于螯合物,同时具有增强CP抗氧化活性的作用。

罗非鱼鳞胶原蛋白肽锌螯合物制备工艺优化

为了获得罗非鱼鳞胶原蛋白肽锌螯合物的最佳制备工艺,采用响应面法进行优化其制备工艺,建立了肽锌螯合率与pH、肽锌质量比、时间和温度的数学模型。得到最佳制备工艺参数为:pH 5.0、肽锌质量比2.5∶1、时间35 min和温度54℃,肽锌螯合率的预测值为92.79%,验证试验值为91.96%,与预测值无显著性差异。

豆粕水解多肽与锌螯合物的制备方法研究

以豆粕深度水解多肽和水合乙酸锌为原料,合成多肽锌螯合物,通过正交试验优化合成工艺条件,采用红外光谱、元素分析、螯合滴定等分析方法表征其结构与组成。结果表明,在多肽与锌质量比为2∶1,反应温度60℃,pH为7,反应时间120 min的优化工艺条件下,锌的螯合率为66.16%,多肽锌螯合物的产率可达42.41%。

利用冷榨芝麻蛋白酶解物制备短肽螯合锌的条件优化

利用木瓜蛋白酶对冷榨芝麻蛋白进行水解制备短肽。采用L16(45)正交实验探究了各因素对水解度的综合影响,得出最佳工艺参数:底物浓度4%,加酶量1 500 U/g,p H 9.0,温度60℃,时间3 h,在此条件下水解度为14.98%。所得水解液与硫酸锌螯合,采用L9(34)正交实验探究了各因素对螯合率的综合影响,得出最佳工艺参数:加锌比例1∶2,p H 7,温度60℃,高速搅拌,在此条件下螯合锌得率为71.1%。采用乙醇纯化制得的螯合锌,产品纯度99.3%,锌含量达到15.62%。

酶法制备花生源锌螯合肽工艺

分别采用碱性蛋白酶(alcalase)、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶对花生蛋白进行水解,结果表明,胰蛋白酶是制备花生源锌螯合肽的最佳水解酶。基于螯合率,对胰蛋白酶酶解花生蛋白工艺条件进行优化,通过正交试验确定最佳反应条件为:底物浓度3%、酶解温度50℃、pH 6、酶解时间2 h。在该条件下,螯合率为52.71%。研究表明花生源锌螯合肽具有较高的锌螯合活性,为新型补锌剂开发提供理论依据。

纳滤技术在河豚鱼皮胶原肽螯合锌脱盐中的应用研究

采用纳滤膜技术对河豚鱼皮胶原肽螯合锌进行了脱盐浓缩试验,研究不同分子量的纳滤膜对螯合锌脱盐效果及回收率的影响,确定最佳的纳滤除盐工艺。试验结果表明,最适用膜为截留分子量700 Da的卷式纳滤膜。在渗滤过程中,当加入6倍料液体积的纯水后,河豚鱼皮胶原肽螯合锌基本达到了脱盐的效果,产品的回收率为73.82%。河豚鱼皮胶原肽螯合锌经纳滤膜脱盐后,蛋白质含量从46.6%提高到82.04%,含锌量为12.8%,去除了大量的无机盐杂质,达到了分离纯化的目的。

谷胱甘肽螯合锌对肉鸡生化指标的影响

以还原型谷胱甘肽(GSH)和硫酸锌为材料,研究谷胱甘肽螯合锌(GSH-Zn)对肉鸡血液生化指标的影响。结果表明:添加GSH-Zn能提高肉鸡血清中GSH的含量(P<0.05)及免疫球蛋白G(IgG-1)的含量,但差异不显著。

复合肽螯合锌有效螯合率测定方法研究—凝胶过滤色谱络合滴定法

本文通过模拟动物胃肠道内pH的环境来处理螯合物样品,使螯合物样品中的非络合态以及较小结合力的络合态金属元素以离子状态存在,再通过凝胶过滤法对螯合态和游离态的金属离子进行分离,测定各组分中金属元素的含量,即可计算出样品有效螯合率。具体测定方法为:样品溶解处理时pH调至3.0,离心后的上清液pH调回中性,上柱洗脱时碱性洗脱液为pH 9.0的Clark-lubs缓冲液,酸性洗脱液为pH 2.0HCl溶液。该方法得到的结果变异系数在2%2.5%之间,精密度较好。

酪蛋白肽电荷性质对其肽-锌螯合物的胃肠稳定性及吸收的影响

为研究酪蛋白肽的电荷性质对肽-锌螯合物的胃肠稳定性及生物利用率的影响,以酪蛋白为原料,经碱性蛋白酶水解后,采用Sephadex C-25阳离子交换柱分离酪蛋白肽,对分离得到的肽组分的ξ电势以及氨基酸组成进行分析,并以此酪蛋白肽制备肽-锌螯合物;随后采用体外胃液-肠液-Caco-2细胞的三段式消化吸收模型考察肽-锌螯合物的胃肠消化稳定性。研究结果表明,酪蛋白肽的表面净负电荷越多,对锌的螯合能力越强,在胃肠消化过程中也越稳定;同时,较低的ξ电势也有利于肽-锌螯合物的吸收。因此,带有负电荷的酪蛋白肽可以作为一种促锌吸收剂应用于功能性食品中。

珍珠贝外套膜胶原蛋白肽及其锌螯合物的体外抑制骨质疏松作用

研究珍珠贝外套膜胶原蛋白肽(pearl oyster mantle collagen peptide,POM-CP)及其锌螯合物(zincchelating pearl oyster mantle collagen peptide,POMCP-Zn)对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1增殖分化的影响。结果表明:噻唑蓝检测结果显示,与空白对照组相比,POMCP-Zn能够显著促进成骨细胞的增殖,而POM-CP对成骨细胞的增殖性无显著影响;与空白对照组相比,400μg/mL的POM-CP和10μg/mL的POMCP-Zn将成骨细胞的碱性磷酸酶活性分别提高到1.31倍和1.48倍;POMCP-Zn还可以提高成骨细胞分化阶段Ⅰ型胶原蛋白、骨钙素蛋白的分泌量,同时促进成骨细胞矿化阶段骨结节的形成。综上所述,与POM-CP相比,POMCP-Zn对成骨细胞MC3T3-E1的增殖和分化有较强的促进作用,POMCP-Zn有望成为预防骨质疏松症的潜在功能性食品。

河豚鱼皮胶原肽螯合锌的组成与急性毒性研究

对河豚鱼皮胶原肽螯合锌的主要成分、分子质量分布及氨基酸组成作了分析和比较,并通过急性毒性试验,初步评价其毒理学安全性。实验结果表明,河豚鱼皮胶原肽螯合锌的蛋白含量为(82.04±0.68)%,锌含量为(12.86±1.24)%,胶原肽的分子质量主要集中在600 Da附近。氨基酸分析显示,河豚鱼皮胶原肽螯合锌含有丰富的甘氨酸、羟脯氨酸以及大量的天冬氨酸和谷氨酸,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱图显示了肽-锌螯合物的生成。通过急性毒性试验,得出河豚鱼皮胶原肽螯合锌的半数致死量为6.8479 g/kg,95%的可信限为6.1224~7.6765 g/kg,根据急性毒性剂量分级标准,属于实际无毒级。

微生物法制备松仁肽-锌螯合物及其抗氧化功能的研究

实验研究了微生物法制备松仁肽-锌螯合物及抗氧化性质,利用松仁粕为原料制作培养基,选用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ls-45为发酵菌种,以硫酸锌为锌源,运用微生物法进行螯合,微生物将大分子的松仁蛋白分解为小分子肽的同时与锌离子螯合,以硫酸锌的添加量、发酵温度、发酵时间、pH 4个因素进行单因素实验和响应面实验对螯合工艺参数进行优化,以螯合率为指标,确定最佳的工艺参数为:硫酸锌添加量为0.6 g,时间为50.36 h,温度为38.46℃,pH值为7.41。得到最佳螯合率90.60%。通过体外抗氧化实验对松仁肽-锌螯合物、松仁肽、VC等物质的不同浓度进行DPPH自由基清除率、还原能力、羟自由基清除率等3个指标的测定,实验结果表明松仁肽-锌螯合物的抗氧化性均高于松仁肽,并随着质量浓度的增加而呈现量效关系,由此可以初步判断松仁肽-锌螯合物具有良好的抗氧化功能。

罗非鱼鳞胶原肽螯合锌抗氧化及抑菌活性研究

以罗非鱼鳞为原料,制备了胶原肽及胶原肽螯合锌,研究并比较了其体外抗氧化及抑菌活性。基质辅助激光解析电离飞行时间质谱图表明了罗非鱼鳞胶原肽螯合锌的生成。氨基酸分析显示,罗非鱼鳞胶原肽富含羟脯氨酸、甘氨酸以及天冬氨酸,与锌离子螯合后,氨基酸的组成与比例有所变化,其中天冬氨酸与谷氨酸占总氨基酸的比例分别由19.72%和8.79%增加到22.73%和9.71%。体外抗氧化实验表明,罗非鱼鳞胶原肽螯合锌对DPPH自由基、羟自由基的清除率IC_(50)值分别为3.69和6.59 g/L,并且具有较强的Fe^(3+)还原能力,螯合锌的抗氧化活性明显优于胶原肽。抑菌实验显示罗非鱼鳞胶原肽螯合锌对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色假丝酵母等4种指示菌均表现出明显的抑制作用,而罗非鱼鳞胶原肽无抑菌效果。由此可见,罗非鱼鳞胶原肽螯合锌有望作为一种潜在的抗氧化、抑菌剂。