锌诱导的金属硫蛋白在大鼠高血压发病中的保护作用

目的：观察金属硫蛋白（ｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ，ＭＴ）对高血压发病的防治作用。方法：采用腹主动脉狭窄－高盐摄入性高血压模型，事先给予氯化锌诱导内源性金属硫蛋白，观察心肌组织的ＭＴ和丙二醛（ＭＤＡ）的水平以及血压的变化。结果：心脏及肾脏组织的ＭＴ水平在锌诱导组较高血压组各增加１．７倍（Ｐ＜０．０１）及２．４倍（Ｐ＜０．０１），而丙二醛水平则分别下降８０％（（Ｐ＜０．０１）和４４％（Ｐ＜０．０１），锌诱导组的血压较高血压组血压下降２８％（Ｐ＜０．０５），并且观察到心肌ＭＴ水平与ＭＤＡ含量呈明显负相关（ｒ＝－０．９５，Ｐ＜０．０１）。结论：ＭＴ清除自由基作用可能在高血压发病中具有一定的保护意义。

热休克蛋白72对大鼠急性高眼压性视网膜神经节细胞损伤的保护作用

目的探讨热休克蛋白72(heat shock protein,HSP 72)对大鼠急性高眼压性视网膜神经节细胞(RGCs)损伤的保护作用。方法右眼前房内灌注平衡盐溶液制作大鼠急性高眼压性 RGC 损伤模型;用热休克反应或腹腔内注射硫酸锌诱导模型大鼠 RGCs 中 HSP 72表达,观察 HSP72表达以后,模型大鼠 RGC 密度的改变情况,并与未处理的模型大鼠 RGC 密度相比较。结果正常大鼠 RGC 密度为2 504±181个/mm^2;急性高眼压模型大鼠 RGC 密度为2 015±111个/mm^2。热休克反应组和硫酸锌注射组 RGC 密度分别为2207±200个/nm^2和2262±155个/mm^2,显著高于模型组(P_(热体克)=0.036,P_(硫酸锌)=0.019);HSP 72阴性对照组与模型组 RGC密度差异无显著意义(P_(槲皮黄酮+热休克)=0.260,P_(槲皮黄酮+硫酸锌)=0.748)。结论热休克反应和腹腔内硫酸锌注射在急性高眼压模型大鼠 RGCs 中诱导产生的 HSP 72;可能对急性高眼压性 RGC 损伤具有保护作用。

锌——热休克蛋白诱导剂对鼠肝低温保存作用的实验研究

1.材料与方法:雄性Wistar大鼠(体重250±20 g)根据术前预处理因素及剂量不同随机分为五组:对照组(C 组):无预处理;锌组-1(Zn-1组)、锌组-2(Zn-2组)、锌组-3(Zn-3组),均于术前24 h腹腔注射0.5% ZnSO4注射液,剂量分别为Zn2+ 5 mg/kg、10 mg/kg、15 mg/kg;热休克组(H组):术前24 h接受热休克(42.5℃×15 min).采用单纯低温保存模型,每组按不同保存时限分3个亚组,即6 h、12 h、24 h,每亚组6只大鼠.检测移植肝脏灌注液中AST、LDH值.利用免疫印记(Western Blot)方法检测预处理24 h后肝脏组织中HSP含量,并利用凝胶成像及半定量分析系统进行半定量分析.光镜HE染色观察组织形态学的变化.统计学处理采用方差分析,q检验,结果采用盨表示.

蛹虫草金属硫蛋白分离纯化及性质研究

研究探讨锌离子胁迫下蛹虫草Cordyceps militaris金属硫蛋白的产生及性质。蛹虫草菌丝体以15g/L Zn2+在10L发酵罐中诱导培养56h后收集,产率为每升发酵液收集12.021g菌丝体(干重),细胞破碎取上清液通过两次凝胶柱层析,冷冻干燥得到蛹虫草金属硫蛋白纯品。利用Bradford法进行蛋白质含量测定,用银饱和分析法结合原子吸收光谱(AAS)测定MT含量,发酵终点处金属硫蛋白含量为12.876mg/g菌丝体(湿重)。用电喷雾质谱法测得金属硫蛋白的分子量为7 390Da,用Ellman’s方法和火焰原子吸收法分别测得每分子蛋白质含有14个巯基、结合5个Zn原子。氨基酸组成分析结果显示,每分子蛋白质共含57个氨基酸,其中含有13个半胱氨酸,疏水氨基酸占29.8%,且含有组氨酸。以上表明,研究中的蛹虫草金属硫蛋白与哺乳动物金属硫蛋白结构差异较大,但与酵母菌金属硫蛋白结构组成类似。

亚香棒虫草菌丝体金属硫蛋白的提纯及性质

【目的】探讨锌离子诱导亚香棒虫草(Cordyceps hawkesii)菌丝体金属硫蛋白的产生及性质。【方法】亚香棒虫草菌丝体以18 g/L Zn2+在10 L发酵罐中诱导培养64 h后收集菌丝体,产率为每升发酵液收集12.2 g菌丝体(干重),细胞破碎取上清液通过2次凝胶柱层析,冷冻干燥得到亚香棒虫草菌丝体金属硫蛋白纯品。利用考马斯亮蓝法(Bradford法)进行含量测定,用银饱和分析法结合原子吸收光谱(AAS)测定MT含量,用Ellman’s方法和火焰原子吸收法分别测得巯基含量和结合锌原子数,用电喷雾质谱仪测得分子量,全自动氨基酸分析仪测氨基酸组成。通过对羟基自由基、DPPH自由基和超氧阴离子自由基的清除率试验探讨亚香棒虫草金属硫蛋白的抗氧化活性。【结果】发酵终点金属硫蛋白产量为15.3 mg/g菌丝体湿重。金属硫蛋白的分子量为7 680 Da,每分子蛋白质含有18个巯基、结合4个Zn原子。氨基酸组成分析结果显示,每分子蛋白质共含60个氨基酸,其中含有15个半胱氨酸,且含有组氨酸和芳香族氨基酸。亚香棒虫草金属硫蛋白的抗氧化活性稍强于谷胱甘肽,弱于动物金属硫蛋白。【结论】亚香棒虫草在Zn2+胁迫下能够大量合成金属硫蛋白,且其金属硫蛋白的性质与哺乳动物金属硫蛋白有相似性。