尿液错误折叠蛋白与子痫前期发病风险及不良妊娠结局的关系

目的探讨尿液错误折叠蛋白与子痫前期发病风险及不良妊娠结局的关系。方法将2022年3月至2023年6月于该院进行产检的300例孕妇作为研究对象,通过刚果红斑点扩散法检测其尿液错误折叠蛋白水平。分析尿液错误折叠蛋白诊断子痫前期的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值。根据孕妇子痫前期检出情况将其分为子痫前期组和非子痫前期组,比较2组孕妇一般资料、不良妊娠结局发生情况,分析尿液错误折叠蛋白与孕妇不良妊娠结局的关系。结果300例孕妇中有50例子痫前期孕妇,纳入子痫前期组,剩余250例非子痫前期孕妇纳入非子痫前期组;子痫前期组>29~34孕周的孕妇占比较高,为44.00%(22/50)。与非子痫前期组相比,子痫前期组不良妊娠结局发生率更高(P<0.05)。尿液错误折叠蛋白诊断子痫前期的阳性预测值为62.50%(40/64),阴性预测值为95.76%(226/236),检测灵敏度为80.00%(40/50),特异度为90.4%(226/250)。尿液错误折叠蛋白阳性孕妇不良妊娠结局发生率(20.31%)明显高于尿液错误折叠蛋白阴性孕妇(9.75%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论尿液错误折叠蛋白与子痫前期发病风险及不良妊娠结局有关。

尿液错误折叠蛋白检测与子痫前期及小于胎龄儿发生的关系研究

目的探讨尿液错误折叠蛋白检测与子痫前期及小于胎龄儿发生的关系。方法回顾性分析2021年6月-2022年8月在靖江市人民医院产检的600名正常产检孕妇的临床资料,按尿液采集时间分为妊娠中期(孕13~27周)、妊娠晚期(孕28~37周)。对比不同孕期子痫前期发生情况,对比子痫前期者与正常妊娠者不同孕周尿液错误折叠蛋白定量差异,记录尿液错误折叠蛋白阳性检出率,并对比尿液错误折叠蛋白阳性者与阴性者小于胎龄儿发生情况,分析小于胎龄儿发生相关影响因素。结果600名孕妇中出现子痫前期42例(7.00%),其中妊娠中期出现18例(3.00%),妊娠晚期出现24例(4.00%)。妊娠中期与妊娠晚期早发型子痫前期者尿液错误折叠蛋白定量均高于正常妊娠者,差异有统计学意义(P<0.05)。600名孕妇中共检出尿液错误折叠蛋白阳性48例,阴性552例。阳性组中小于胎龄儿发生率为45.83%(22/48),高于阴性组的21.74%(120/552),差异有统计学意义(P<0.05)。经多因素分析显示,羊水过少、吸烟或被动吸烟、尿液错误折叠蛋白阳性是小于胎龄儿发生的独立危险因素(P<0.05)。结论子痫前期发生率随着尿液错误折叠蛋白水平增加相应升高,小于胎龄儿发生可能性明显增高。可将尿液错误折叠蛋白水平作为预测小于胎龄儿与子痫前期的生物学标志物。

尿液中错误折叠蛋白对子痫前期的预测价值

目的评估尿液中错误折叠蛋白在孕妇高危人群中预测子痫前期的价值。方法采用前瞻性研究,选择2021年10月—2022年7月在本院定期产检和分娩的孕12~27+6周的高危孕妇702例作为研究对象,收集临床信息,检测尿液中的错误折叠蛋白,随访妊娠过程和母儿结局。根据是否发生子痫前期(pre-eclampsia,PE)分为未发生PE(unaffected PE)组、早发型PE(early onset PE,ePE,在孕34周前因子痫前期进展而终止妊娠者)组和晚发型PE(late onset PE,lPE,在孕34周时或以后发生子痫前期者)组,采用方差分析、卡方检验及ROC曲线等分析其对子痫前期的预测价值。结果共有620例孕妇被纳入研究,发生PE者45例(7.3%),其中ePE为16例(2.6%),lPE为29例(4.7%)。研究发现未发生子痫前期者在服用叶酸、钙片、平均收缩压、平均舒张压(新增)、平均动脉压、子痫前期史或慢性高血压史及尿蛋白定性阳性方面和子痫前期孕妇比较,差异均有统计学意义(P<0.05),且子痫前期孕妇的妊娠并发症和新生儿并发症均高于未发生子痫前期的孕妇(P<0.05);使用母体因素、平均动脉压、错误折叠蛋白在孕12~15+6周、孕16~27+6周、ePE、lPE及整体PE中单独预测子痫前期的ROC曲线下面积中,错误折叠蛋白阳性的曲线下面积均最大,分别为0.837(95%CI:0.720~0.954)、0.859(95%CI:0.762~0.956)、0.879(95%CI:0.776~0.991),0.834(0.737~0.932)和0.849(0.774~0.924);三者联合在孕12~15+6周、lPE及整体PE中预测ROC曲线下面积高于单项指标的预测,分别为0.886(95%CI:0.792~0.980)、0.876(0.793~0.958)和0.872(0.803~0.942)。此外,虽错误折叠蛋白阳性在孕早、中期中预测PE的阳性预测值和敏感度较低,均约50%左右,但在预测PE的阴性预测值和特异度方面均达90%以上。结论孕妇高危人群中可在孕早中期行尿液中错误折叠蛋白的检测,若为阳性,孕早期可以尽早口服阿司匹林进行PE的预防,孕中期可加强监测;若为阴性,则提示发生PE的概率较低,不需要临床医生过度检查和干预。

错误折叠蛋白质的聚集效应及其对策

错误折叠蛋白质大量聚集将引发蛋白质构象紊乱症(proteinconformationaldisorder,PCD)。目前的研究发现,蛋白质聚集过程中的中间体(纤维前体,pre-fibrillar)导致细胞膜结构受损,从而诱发细胞凋亡。根据这一原理设计出的抗纤维前体抗体和干扰肽可以作为PCD治疗的一般性方法。此外,该文就消除错误折叠蛋白质聚集的研究方向作了展望。

多因素异常修饰导致体内蛋白质选择性错误折叠和功能丧失的假设

蛋白质异常修饰导致错误折叠的机制目前尚不清楚.提出如下设想:细胞内的蛋白质分子可能发生多种异常修饰,引起蛋白质选择性错误折叠和聚积而导致神经退行性疾病.

22L毒株朊蛋白错误折叠循环扩增方法的建立

参考Saborio和Soto创建的名为蛋白质错误折叠循环扩增(protein misfolding cyclic amplification,PMCA)的方法建立一种22L毒株系朊蛋白错误折叠循环扩增方法,以便研究22L毒株系异常朊蛋白(scrapie PrP,PrPSc)的合成机制。在阴离子去污剂十二烷基硫酸钠(SDS)存在的条件下,这种方法可以通过超声降解从而重复扩增产物,并在仓鼠脑匀浆中快速有效的模仿体内朊病毒PrPSc的复制,因此可以在几个小时内高浓度扩增PrPSc。已有试验结果发现,PrPSc体外转化率在使用粗提的脑组织匀浆时比使用纯化重组PrP更高,这个发现暗示着高效率的PrPSc转化可能还需要探索其他未知的宿主因素。研究结果表明,建立的这种改良的PMCA技术可用于研究PrPSc合成的生物化学机制,以此来进行诊断与治疗方法的研究。

蛋白质错误折叠相关疾病的多肽药物研究进展

蛋白质和多肽发生错误折叠形成不可溶的淀粉样纤维的过程,与阿尔茨海默病、帕金森病等多种神经退行性疾病密切相关。这些疾病可导致认知能力下降以及运动缺陷等症状。虽然已有多种相关治疗方案处于临床试验中,但目前仍无明确有效的方法可治愈或长期减缓疾病的进展。探寻和研究抑制淀粉样聚集、识别并促进毒性聚集物清除的抑制剂分子是药物研发的重要策略之一。在不同类型的抑制剂中,多肽类抑制剂因具有高特异性、低毒性、多样性,以及修饰后的抗水解稳定性和血脑屏障通透性,有望成为候选药物分子。本文总结了针对阿尔茨海默病相关的Aβ和Tau蛋白以及帕金森病相关的α-synuclein蛋白淀粉样纤维化的多肽抑制剂研究进展。基于淀粉样纤维化核心序列及纤维核心结构进行合理设计,或通过随机筛选,均可获得多肽抑制剂。这些天然和非天然的多肽分子大多具有抑制淀粉样纤维化、解聚成熟纤维和降低细胞毒性的作用,其中一些多肽在退行性疾病动物模型实验中,显示出降低脑损伤和缓解认知及运动障碍的效果。这些研究揭示了多肽作为蛋白质错误折叠和聚集相关疾病药物的特点,为研发一类新的有效药物奠定了基础。

内质网应激与蛋白质错误折叠相关疾病的研究进展

蛋白质的错误折叠会导致疾病。错误折叠蛋白质在内质网中滞留和蓄积会触发内质网应激(ERS)和未折叠蛋白反应。既往研究已经证实ERS与蛋白质错误折叠相关疾病有密切联系。本文将阐述ERS以及其在蛋白质错误折叠相关疾病中的研究进展,为临床治疗这类疾病提供新的理论依据。

蛋白质错误折叠循环扩增技术

目前发现有多种人类及动物疾病是由体内蛋白质的错误折叠引起的,其中朊毒粒病因具有传染性而备受关注。朊毒粒病研究的核心问题之一是正常细胞朊蛋白(PrPc)向异常致病朊毒粒(PrPSc)转变的机制。蛋白质错误折叠循环扩增技术(protein misfolding cyclic amplification,PMCA)就是最新发明的在体外诱导朊蛋白(PrPc)产生错误折叠生成朊毒粒(PrPSc)的技术。该文将概要介绍此项技术的原理、技术要点及在诊断与基础研究方面的应用前景。

血清淀粉样蛋白A联合错误折叠的转甲状腺素蛋白对复发/难治弥漫大B细胞淋巴瘤患者的临床价值

目的:探讨血清淀粉样蛋白A(SAA)和错误折叠的转甲状腺素蛋白(TTR)对复发/难治弥漫性大B细胞淋巴瘤(R/R DLBCL)患者的临床价值。方法:选取R/R DLBCL患者30例作为研究组,缓解/稳定DLBCL患者20例及慢性淋巴结炎患者10例作为对照组,应用SELDI技术、Tris-Tricine十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(Tris-Tricine-SDS-PAGE)技术、shotgun串联质谱混合蛋白质鉴定技术(shotgun-LTQ-MS)和生物信息学技术对鉴定蛋白质进行分析,发现R/R DLBCL血清中存在SAA和TTR蛋白。采用SPSS 21.0统计软件分析血清中高表达SAA及错误折叠TTR与R/R DLBCL患者临床病理特征、生存期的关系。卡方检验分析临床计数资料,Kaplan-Meier曲线进行生存分析,Log-Rank检验比较单因素生存差异。结果:SAA和TTR(SAA+TTR+)同时高表达与R/R DLBCL患者结外病变、高水平LDH和NCCN-IPI评分显著相关,与non-GCB分型相关。TTR+与病理组织中的CMYC蛋白相关,而SAA+与B症状相关。SAA+组、TTR+组及SAA+TTR+组患者较阴性组生存期缩短,统计分析有显著差异。结论:SAA和错误折叠的TTR均为R/R DLBCL预后不良因素。

未折叠蛋白反应及其在生理功能与疾病中的作用

未折叠或错误折叠的蛋白质在内质网(endoplasmic reticulum,ER)中聚集促使细胞做出适应性反应,包括上调位于内质网的各种酶和分子伴侣,这被称为未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)。未折叠蛋白反应存在于所有的真核细胞中,是人们了解最多的细胞器间信号传导系统模型。未折叠蛋白反应信号传导的基本机制最先在酵母中被阐明,在哺乳动物中有类似机制但表现得更为复杂。目前已经知道哺乳动物中有三条途径涉及UPR信号传导,分别是IRE1-XBP1路径,ATF6路径和PERK-elF2α磷酸化-ATF4路径。UPR在细胞生理病理中发挥重要作用。很多疾病如神经退行性疾病、糖尿病与高同型半胱氨酸血症等与蛋白折叠错误及由此引起的UPR有关。这些疾病也被称为错误折叠蛋白疾病。

蛋白质折叠与淀粉样沉积的产生

蛋白质是生物体内一切功能的执行者,而蛋白质正确折叠则是发挥其生理功能的一个重要前提条件。近年来研究发现,蛋白质的错误折叠可以形成淀粉样沉积进而导致一些疾病的产生。探讨了蛋白质折叠和淀粉样纤维产生的机制。

钴取代的链状Strandberg结构磷钼酸盐的合成及其对Aβ错误折叠聚集过程的调节

设计并合成了一例钴取代的Strandberg结构的磷钼酸盐(H_(2)en)_(6){[Co(H_(2)O)_(4)](P_(2)Mo_(5)O_(23))}_(3)·11H_(2)O(简称CoPM,en=乙二胺),其结构通过元素分析、红外光谱、热重分析以及X射线单晶衍射进行了表征。结果显示,CoPM是由磷钼氧簇[P_(2)Mo_(5)O_(23)]^(6-)和钴配合物[Co(H_(2)O)_(4)]^(2+)交替连接而形成链状结构,其中每个循环单元包含3个{[Co(H_(2)O)_(4)](P_(2)Mo_(5)O_(23))}^(4-)结构单位,它们各自的延展方向与配位环境均不相同。利用硫黄素T荧光法、比浊法、圆二色谱、NMR等研究了CoPM对淀粉样蛋白(Aβ)错误折叠过程的干预,发现CoPM能够通过调节β错误构象,从而减少有害聚集体的形成。2',7'⁃二氯荧光素(DCF)荧光及细胞毒性实验表明CoPM还可以消除由Cu^(2+)⁃Aβ所产生的活性氧物种(ROS),进而保护PC12细胞及其突触免受Aβ错误折叠聚集体及氧化应激的损害。

内质网压力响应相关的蛋白质降解

内质网相关蛋白质降解途径(ERAD),即蛋白质分泌过程中错误折叠或未折叠的蛋白质在内质网中被识别并逆向运输到细胞质经聚泛素化后由蛋白酶体降解的过程.自从发现该途径后对其机制的阐明一直处于不断探索的阶段.近年来,对ERAD底物识别、逆向运输和泛素化新组分的发现以及新技术的应用,使得该途径的具体分子机制更加清晰.本文全面梳理并综述了内质网应激响应、ERAD降解过程与机理的最新进展,并对模式蛋白底物和最新研究方法进行了总结,以期展示该领域的研究概况.

内质网相关蛋白的降解及其机制

内质网相关蛋白降解(ER-associated protein degradation,或ER-associateddegradation,ERAD)是真核细胞蛋白质质量控制的重要途径,它承担着对错误折叠蛋白的鉴别、分检和降解,清除无功能蛋白在细胞内的积累。ERAD过程包括错误折叠蛋白质的识别、蛋白质从ER向细胞基质逆向转运和蛋白质在细胞基质中的降解三个步骤。ERAD与人类的某些疾病密切相关,有些病毒能巧妙利用ERAD逃遁宿主免疫监控和攻击。

α-突触核蛋白的结构生物学研究

α-突触核蛋白(α-synuclein, α-syn)聚集形成纤维状结构,进而形成路易小体(Lewy bodies, LBs)。LBs是帕金森病(Parkinson’s disease, PD)、多系统萎缩(multiple system atrophy, MSA)和路易小体痴呆(dementia with Lewy bodies, DLB)等神经退行性疾病的典型细胞病变特征,也是发病的一个关键环节。近年来,冷冻电镜技术的进步使解析高分辨率α-突触核蛋白原纤维结构成为可能。对α-突触核蛋白不同聚集形态的深入探究,能为理解神经退行性病变的分子机制、α-突触核蛋白毒性形式的性质以及α-突触核蛋白聚集影响的信号途径等提供帮助。本文综述目前已知的不同形态α-突触核蛋白结构,阐述α-突触核蛋白单体、寡聚体和不同聚集形式原纤维的结构特征。α-突触核蛋白寡聚体由于其结构不稳定,目前尚无明确的结构信息。但目前已有多个α-突触核蛋白原纤维结构被解析,包括重组蛋白体外制备的和多系统萎缩(MSA)患者体内分离的原纤维。这些原纤维直径由5 nm的单股原纤维至10 nm的双股原纤维不等。不同的体外制备条件可生成不同构象与聚集形式的α-突触核蛋白原纤维,表现出结构异质性。部分家族性PD相关的α-突触核蛋白突变位点位于原纤丝间的相互作用界面。本文依据α-突触核蛋白原纤维中单体的结构和原纤维的组装形式,对α-突触核蛋白原纤维的结构进行分类归纳,以期为探索针对α-突触核蛋白结构的PD诊断与药物开发提供信息。

组蛋白去乙酰化酶6对畜禽热应激和脂代谢的调节作用

组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)是位于细胞质中的一种具有特殊结构和功能的去乙酰化酶,通过蛋白质泛素化以及蛋白质赖氨酸乙酰化共同调控细胞内的异常蛋白降解,影响细胞的周期、增殖、迁移和凋亡等过程。文章综述了HDAC6作为细胞内管理错误折叠蛋白质的关键者,间接调控了畜禽热应激以及脂代谢过程,为动物养殖生产过程中防治热应激以及脂肪代谢研究提供参考。

蛋白质自组装及分析应用

蛋白质分子自组装广泛存在于真核及原核细胞中,对维持生命体系正常运转、促进生命体进化至关重要。本文重点介绍了淀粉样纤维蛋白的基本特性、蛋白错误折叠循环扩增技术的研究背景、原理及其在生物活性物质检测上的应用,并对蛋白纳米材料的制备及其在生物分析、细胞成像等方面的研究进展进行了评述。

全长朊粒蛋白淀粉样纤维引发细胞毒性的机制研究

目的 朊病毒病(prion disease)是一类由朊粒蛋白(PrP)发生错误折叠、聚集形成致病性的PrPSc导致的具有高致死率的神经退行性疾病。本文在细胞和动物水平开展了PrP纤维诱导内源PrP聚集和毒性机制的研究。方法 通过超速离心结合蛋白质免疫印迹实验检测PrP聚集;通过氧化压力实验,使用Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡;运用细胞超薄切片技术检测细胞线粒体形态;在动物水平,分离新生小鼠的前额叶,进行横断切片培养,在脑片上接种PrP纤维。结果 PrP纤维种子可以诱导内源PrP聚集,PrP纤维可以诱导细胞内氧化压力升高和细胞凋亡,PrP纤维可以引起线粒体损伤,PrP纤维可以诱导小鼠前额叶内源PrP聚集。结论 本文在细胞和动物水平证实体外组装的PrP淀粉样纤维具有细胞毒性和潜在的感染性。