衔接蛋白失能同源物2通过抑制NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3对结核性胸膜炎大鼠炎症和氧化应激的影响

目的:探讨衔接蛋白失能同源物2(DAB2)抑制NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)对结核性胸膜炎大鼠炎症和氧化应激的影响。方法:按照随机数字法将60只SPF级雄性SD大鼠分为四组,每组40只。除正常对照组外,结核性胸膜炎组、DAB2组和pcDNA-NLRP3组进行建模处理,以第2天是否抽出胸腔积液为模型建立成功。正常对照组不注射结核分枝杆菌H37RV悬液,DAB2组建模后第2天静脉注射AAV9-DAB2质粒,每天1次,连续注射7 d,DAB2+pcDNA-NLRP3组在注射AAV9-DAB2质粒500μg/L的同时注射pcDNA-NLRP380μl,正常对照组和结核性胸膜炎组的大鼠尾静脉注射0.9%氯化钠溶液。进行各组呼吸功能指标测定,收集胸腔积液,记录积液量,观察3、5、7 d的胸腔积液粘连性情况,HE染色观察胸膜组织病理学情况,Western blot检测胸膜组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)、基质金属蛋白酶1(MMP-1)和MMP-9蛋白表达,荧光探针DCFH-DA分析检测活性氧(ROS)的水平。结果:与正常组相比,结核性胸膜炎组的大鼠的胸腔积液和胸膜厚度明显增加,用力肺活量(FVC)、最大呼气流量(PEF)、用力呼气容积(FEV)0.3和FEV0.3/FVC显著降低,TNF-α、IL-8、MMP-1和MMP-9蛋白表达显著升高,基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1)蛋白表达显著降低,丙二醛(MDA)水平升高,超氧化物歧化酶(SOD)水平降低,ROS累积量明显升高(均P<0.001);与结核性胸膜炎组相比,DAB2组大鼠胸腔积液和胸膜厚度显著降低,FVC、PEF、FEV0.3和FEV0.3/FVC明显升高,DAB2组大鼠胸膜组织中的TNF-α、IL-8、MMP-1和MMP-9蛋白表达明显降低,TIMP-1水平明显升高,MDA水平降低,SOD水平升高,ROS累积量明显降低(均P<0.001);与DAB2组相比,DAB2+pcDNA-NLRP3组大鼠胸腔积液和胸膜厚度明显升高,FVC、PEF、FEV0.3和FEV0.3/FVC明显降低,DAB2+pcDNA-NLRP3组的TNF-α、IL-8、MMP-1和MMP-9蛋白表达明显升高,TIMP-1蛋白表达显著降低,MDA水平明显升高,SOD水平显著降低,ROS累积量显著升高(均P<0.001),各组大鼠在3、5、7 d的胸腔积液粘连性评分比较采用重复测量设计的方差分析,结果显示,不同时间点的胸腔积液粘连性评分比较差异具有统计学意义(均P<0.001);各组胸腔积液粘连性评分比较差异具有统计学意义(均P<0.001);各组胸腔积液粘连性评分变化趋势比较差异有统计学意义(均P<0.001);与模型组相比,DAB2组大鼠的胸膜内和肺间质内血管充血症状减轻,有少量的纤维组织增生,上皮样细胞团以及凝固型坏死也明显减少,淋巴细胞和中性粒细胞浸润也明显减少;与DAB2组相比,DAB2+pcDNA-NLRP3组大鼠的胸膜内和肺间质内血管充血症状加重,出现的纤维组织增生,上皮样细胞团以及凝固型坏死也明显增多,淋巴细胞和中性粒细胞浸润也明显增加。结论:DAB2通过抑制NLRP3的活性促进胸腔积液的吸收,降低胸膜厚度和粘连发生率,降低炎症反应和氧化应激水平,缓解结核性胸膜炎的进展。

沉默微小RNA-378靶向调节骨形态发生蛋白2/母亲DPP同源物4信号通路对大鼠胫骨骨折愈合的影响实验研究

目的:探究沉默微小RNA-378(miR-378)靶向调节骨形态发生蛋白(BMP)2/母亲DPP同源物(Smad)4信号通路对大鼠胫骨骨折愈合的影响。方法:对38只大鼠建立胫骨骨折模型,另取18只正常大鼠作为假手术组。选取胫骨骨折模型造模成功大鼠中的8只作为造模组,假手术组中的8只作为对照组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测造模组胫骨骨折部位骨组织及对照组相同部位正常骨组织miR-378与BMP2、Smad4 mRNA表达。将30只胫骨骨折模型大鼠随机分为模型组、空载质粒组和miR-378沉默组,每组10只。空载质粒组、miR-378沉默组分别经尾静脉注射1μg空载质粒或miR-378小干扰RNA(siRNA)质粒;模型组和剩余10只假手术组大鼠经尾静脉注射0.9%氯化钠溶液1μg;每2天注射1次,连续干预30 d。利用X线观察各组大鼠胫骨骨折愈合情况并进行骨折愈合评分(Lane-Sandhu评分)。采用酶联免疫吸附法检测各组血清炎症因子和骨钙素(OC)、碱性磷酸酶(ALP)水平。采用HE染色观察各组骨组织形态学变化。采用RT-qPCR检测各组骨组织miR-378与BMP2、Smad4 mRNA表达。采用蛋白印迹检测各组骨组织BMP2、Smad4蛋白表达。结果:造模组骨组织miR-378表达水平高于对照组,BMP2、Smad4 mRNA表达水平低于对照组(均P<0.05)。假手术组大鼠骨组织结构清晰;模型组和空载质粒组骨折线清晰,无骨痂出现,骨组织结构严重破坏,仅有少量成骨细胞生成;miR-378沉默组骨折线模糊,出现骨痂,骨组织破坏程度得到缓解并有大量成骨细胞生成。与假手术组比较,模型组血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、OC、ALP及骨组织miR-378表达水平升高,BMP2、Smad4 mRNA和蛋白表达水平降低(均P<0.05)。与模型组和空载质粒组比较,miR-378沉默组Lane-Sandhu评分、OC、ALP水平,以及BMP2、Smad4 mRNA和蛋白表达水平升高,血清TNF-α、IL-1β及骨组织miR-378表达水平降低(均P<0.05)。结论:沉默miR-378可能通过靶向激活BMP2/Smad4信号通路减轻胫骨骨折大鼠炎症反应,促进成骨细胞生成,加快大鼠骨折部位的愈合。

磷酸酶与张力蛋白同源物/蛋白激酶B/鼠双微体基因2信号通路相关蛋白表达及与胃癌复发转移的关联

目的探究磷酸酶与张力蛋白同源物(PTEN)/蛋白激酶B(AKT)/鼠双微体基因2(MDM2)信号通路相关蛋白表达及与胃癌复发转移的关联。方法回顾性分析2017年6月至2019年6月江苏大学附属医院收治的130例胃癌患者手术切除胃癌组织及癌旁组织。采用GEPIA数据库分析PTEN、p-AKT、p-MDM2在胃癌组织中的表达,比较癌旁组织、胃癌组织PTEN、p-AKT、p-MDM2蛋白表达水平。随访至2022年6月,按照复发转移情况将患者分为复发转移组和无复发转移组。比较两组患者胃癌组织PTEN、p-AKT、p-MDM2蛋白表达水平。采用Logistic回归分析法分析胃癌复发转移的影响因素。结果GEPIA分析TCGA数据库和GTEx项目来源的数据发现,胃癌组织的PTEN水平低于正常组织,p-AKT、p-MDM2水平均高于正常组织(P<0.05)。与癌旁组织比较,胃癌组织PTEN蛋白表达水平降低,p-AKT、p-MDM2蛋白表达水平升高(P<0.05)。与无复发转移组比较,复发转移组胃癌组织PTEN蛋白表达水平降低,p-AKT、p-MDM2蛋白表达水平升高(P<0.05)。对130例患者进行随访,随访时间36~60个月,平均随访时间(49.31±8.35)个月,中位随访时间为46个月。其中复发转移患者59例,无复发转移患者71例。与无复发转移组比较,复发转移组Ⅲ-Ⅳ期、中低分化、浸润深度T 3-T 4构成比升高(P<0.05)。Logistic回归分析显示,TNM分期(OR=2.125,95%CI:1.101~3.150)、分化程度(OR=2.659,95%CI:1.365~3.953)、浸润深度(OR=3.037,95%CI:1.254~4.821)、p-AKT(OR=3.142,95%CI:2.379~3.906)、p-MDM2(OR=6.666,95%CI:3.241~10.091)均是胃癌复发转移的危险因素;PTEN是胃癌复发转移的保护因素(OR=0.394,95%CI:0.014~0.774,P<0.05)。结论胃癌中PTEN/AKT/MDM2信号通路PTEN表达下调,p-AKT、p-MDM2表达上调,与胃癌复发转移密切相关,可能作为候选治疗靶点。

植物碱基错配修复系统中Muts蛋白家族研究进展

DNA错配修复(mismatch repair,MMR)是DNA损伤修复的一个重要途径,主要用于细胞中DNA合成和遗传重组时发生损伤过程中出现的单个或少数碱基的缺失、插入以及错配的修复,它对维持基因组稳定性和DNA复制保真度至关重要。原核生物和真核生物中都有非常保守的MMR系统。在人体DNA修复系统的研究中,发现癌症的发生与Muts蛋白家族功能缺陷密切相关。类似的在拟南芥和水稻中功能缺陷的Muts蛋白家族(同源蛋白Muts homolog,MSH)会产生增变基因表型,这将为植物的基因功能分析和育种利用奠定基础。基于此,本文综述了近年来有关植物DNA错配修复及相关基因功能的研究进展,特别是植物MMR功能缺陷导致基因突变和微卫星不稳定造成的性状畸形进行了描述,对Muts蛋白家族各个亚基功能做了分类说明,并对植物中如何利用MSH产生的增变基因突变和如何利用突变育种研究进行了展望。

烷基化修复蛋白B同源物5调控果蝇Zeste基因增强子人类同源物2对K562/阿霉素细胞耐药的影响

目的探讨烷基化修复蛋白B同源物5(ALKBH5)对K562/阿霉素(ADM)细胞耐药的影响及其作用机制。方法以人白血病细胞系K562和ADM抗性细胞K562/ADM细胞为研究对象,利用Lipofectamine;2000将K562/ADM细胞分为对照组、si-NC组、si-ALKBH5-1组、si-ALKBH5-2组、空载体组(转染pcDNA3.1)、ALKBH5-WT组(转染pcDNA3.1-ALKBH5-WT)、ALKBH5-MUT组(转染pcDNA3.1-ALKBH5-MUT)、si-ALKBH5-2+空载体组、si-ALKBH5-2+pcDNA3.1-EZH2组。采用比色法检测细胞中N6-甲基腺苷(m6A)含量;采用CCK-8法检测细胞的半数抑制浓度(IC_(50));采用荧光光度计法检测ADM外排;采用Western blot检测细胞中ALKBH5、果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)、P糖蛋白(P-gp)、多药耐药基因1(MDR1)的蛋白表达;采用RNA免疫共沉淀(RIP)实验验证ALKBH5与EZH2 mRNA的相互作用;采用甲基化RNA免疫共沉淀(MeRIP)检测EZH2 m6A水平。结果与K562细胞比较,K562/ADM细胞对ADM的耐药性及细胞中ALKBH5蛋白表达水平升高,m6A含量降低,差异有统计学意义(P<0.01);沉默ALKBH5可增加K562/ADM细胞中m6A含量,过表达野生型ALKBH5可减少m6A含量,而过表达突变型ALKBH5(H204A)对m6A含量无明显影响。与对照组、si-NC组比较,si-ALKBH5-1组、si-ALKBH5-2组细胞在450 nm处的光密度值(OD_(450nm)值)、P-gp、MDR1蛋白表达水平降低,细胞内荧光强度升高,差异有统计学意义(P<0.05)。在K562/ADM细胞中,ALKBH5蛋白能与EZH2 mRNA相互作用;沉默ALKBH5可上调K562/ADM细胞中EZH2 m6A水平,下调EZH2蛋白表达水平,过表达野生型ALKBH5则呈相反趋势;EZH2过表达逆转了沉默ALKBH5对K562/ADM细胞活力及耐药性的影响。结论沉默ALKBH5通过促进EZH2的甲基化来下调EZH2的表达,进而降低K562/ADM的耐药性。

磷酸酶张力蛋白同源物和配对盒2在子宫内膜诊刮标本中的表达及病理诊断意义

目的探讨磷酸酶张力蛋白同源物(PTEN)和配对盒2(PAX2)在子宫内膜诊刮标本中的表达及病理诊断意义。方法收集96例子宫内膜诊刮标本,根据世界卫生组织(WHO)分类标准,分为增生期子宫内膜组(n=27)、子宫内膜增生不伴非典型组(n=24)、子宫内膜增生伴非典型组(n=29)及子宫内膜样癌组(n=16),采用免疫组化染色法检测各组中PTEN和PAX2蛋白表达情况,比较各组中PTEN和PAX2蛋白缺失情况。结果子宫内膜样癌组、子宫内膜增生伴非典型组PTEN蛋白缺失率均高于增生期子宫内膜组、子宫内膜增生不伴非典型组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。子宫内膜增生不伴非典型组、子宫内膜增生伴非典型组、子宫内膜样癌组PAX2蛋白缺失率均高于增生期子宫内膜组,子宫内膜增生伴非典型组PAX2蛋白缺失率高于子宫内膜增生不伴非典型组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。良性增生子宫内膜组(增生期子宫内膜组+子宫内膜增生不伴非典型组)PTEN与PAX2蛋白同时缺失率为5.9%,明显低于癌前病变以上组(子宫内膜增生伴非典型组+子宫内膜样癌组)的55.6%,差异有统计学意义(P﹤0.01)。结论PTEN与PAX2蛋白联合检测有助于筛查良性子宫内膜,但不能判断非典型增生是否发生癌变。

乳腺癌组织中人表皮生长因子受体-2、雌激素受体、磷酸酶张力蛋白同源物的表达及其与临床病理特征和预后的关系

目的探讨乳腺癌组织中人表皮生长因子受体-2(HER-2)、雌激素受体(ER)、磷酸酶张力蛋白同源物(PTEN)的表达情况与临床病理特征的关系,以及和患者预后的关系。方法回顾性分析2018年1月至2022年1月临汾市中心医院收治的225例女性乳腺癌患者的临床资料,收集其癌旁正常组织与浸润性导管癌组织,将其分为正常组与癌化组,检测并比较两组HER-2、ER、PTEN表达情况,并分析其与患者临床病理特征的关系;随访1年,根据预后结果分为生存组(202例)与死亡组(23例),比较正常组与癌化组患者肿瘤组织HER-2、ER、PTEN表达情况;对生存组与死亡组资料进行单因素分析与多因素Logistic回归分析,筛选出影响预后生存的独立危险因素。结果癌化组HER-2和ER的阳性表达率及PTEN阴性表达率均高于正常组;HER-2、ER阳性患者中组织学分级为3级、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ、神经/脉管侵犯、淋巴结转移患者占比高于HER-2、ER阴性患者;PTEN阳性患者中组织学分级为3级、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ、神经/脉管侵犯、淋巴结转移均低于PTEN阴性患者;与生存组患者比,死亡组患者中组织学分级3级、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期、神经/脉管侵犯、淋巴结转移、HER-2阳性表达、ER阳性表达、PTEN阴性表达的患者占比均更高(均P<0.05);多因素Logistic回归模型分析结果显示,组织学分级3级、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期、神经/脉管侵犯、淋巴结转移、HER-2阳性表达、ER阳性表达、PTEN阴性表达均为影响乳腺癌患者预后生存的危险因素(OR=1.672、1.863、1.866、1.548、1.471、1.704、1.525,均P<0.05)。结论乳腺癌组织中HER-2、ER高表达,PTEN低表达,组织学分级3级、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期、神经/脉管侵犯、淋巴结转移、HER-2阳性表达、ER阳性表达、PTEN阴性表达均为影响乳腺癌患者预后生存的危险因素,检测肿瘤组织中HER-2、ER、PTEN表达情况对乳腺癌患者治疗及预后具有重要的临床价值。

微RNA-132-3p靶向第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物调控葡萄膜黑色素瘤细胞增殖与凋亡

目的 研究微RNA(miR)-132-3p在葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡中的作用及其作用机制。方法 该研究起止时间为2018年2月至2019年7月。定量聚合酶链反应(qPCR)检测正常葡萄膜上皮细胞ARPE-19和葡萄膜黑色素瘤细胞SP6.5、M23中miR-132-3p表达。SP6.5细胞中转染miR-132-3p干扰质粒(anti-miR-132-3p)、第10号染色体上缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)过表达质粒(pcDNA3.1-PTEN)或共转染anti-miR-132-3p和PTEN干扰质粒(si-PTEN),MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡,蛋白质印迹法检测PTEN、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、周期素依赖激酶抑制剂p21(P21)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,生物信息学预测结合双萤光素酶报告实验分析miR-132-3p与PTEN的靶向关系。结果 与ARPE-19细胞相比,SP6.5、M23细胞中miR-132-3p表达量(0.26±0.02比0.94±0.09、0.81±0.08)明显升高(P<0.05)。与anti-miR-132-3p阴性对照(anti-miR-NC)组相比,anti-miR-132-3p组24 h、48 h、72 h的细胞活性(0.51±0.05比0.30±0.03、0.97±0.09比0.45±0.05、1.40±0.14比0.76±0.07)、cyclin D1、Bcl-2蛋白表达量显著降低(P<0.05),细胞凋亡率[(8.03±0.68)%比(21.51±2.06)%]、P21、Bax水平明显提高(P<0.05),与过表达PTEN相同。miR-132-3p与PTEN之间有靶向调控关系。抑制PTEN能逆转抑制miR-132-3p对SP6.5细胞增殖的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用。结论 miR-132-3p通过直接靶向PTEN调控葡萄膜黑色素瘤细胞增殖与凋亡。

人MutS同源蛋白2(hMSH2)过表达的肺癌细胞模型的构建

目的构建人Mut S同源蛋白2(h MSH2)过表达的肺癌细胞模型,探究h MSH2分子介导γδT细胞杀伤肺癌细胞的效应。方法 PCR扩增h MSH2编码序列,同源重组法构建h MSH2-EGFP融合蛋白过表达载体;转染肺癌细胞系NCI-H520细胞以构建h MSH2分子过表达的NCI-H520细胞模型;Western blot检测细胞中h MSH2分子表达,流式细胞计量术检测细胞膜上h MSH2分子表达,体外扩增人外周血单个核细胞中的γδT细胞,乳酸脱氢酶释放法检测γδT细胞对过表达h MSH2的NCI-H520细胞的杀伤效率。结果获得h MSH2编码序列(2 805 bp),构建Fugw-h MSH2重组载体,酶切鉴定结果与预期目的条带大小相符;h MSH2-EGFP融合蛋白在NCI-H520细胞中得到表达,过表达h MSH2的NCI-H520细胞表面的h MSH2分子水平显著升高(P<0.001);γδT细胞对过表达h MSH2的NCI-H520细胞的杀伤效率较野生型NCI-H520细胞显著升高(P<0.05)。结论成功构建h MSH2分子过表达的肺癌细胞模型;细胞膜上表达水平上调的h MSH2分子增强了γδT细胞对肺癌细胞的细胞毒作用。

伴微量白蛋白尿2型糖尿病患者血清脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白和4和第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物蛋白的研究

目的探讨2型糖尿病(T2DM)伴微量白蛋白尿患者血清脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(FABP4)和第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)蛋白表达水平变化及两者在糖尿病肾病(DN)发生过程中的相互关系。方法收集T2DM患者120例,据尿白蛋白肌酐比值(UACR)进行分组,其中正常白蛋白尿组(D0)39例,微量白蛋白尿组(D1)81例。同时收集39例正常对照组(NC)。采用ELI-SA法检测受试者外周血清FABP4和PTEN蛋白表达的水平。结果 T2DM组血清FABP4和PTEN蛋白水平均显著高于正常对照组(P <0.001)。D1组血清FABP4和PTEN蛋白水平显著高于NC组及D0组(均P <0.05)。T2DM患者中,Log(FABP4)与PTEN蛋白(r=0.524,P <0.001)、Log(UACR)(r=0.202,P <0.05)均呈正相关。二分类Logistic回归分析显示,血清FABP4水平与T2DM患者尿微量白蛋白的出现独立相关(OR=1.147,95%CI∶1.042～1.263,P=0.005)。结论血清FABP4水平也许可作为DN患者的早期预测指标。FABP4和PTEN蛋白可能在DN的发生中存在着相互联系。

早期喉癌患者血清膜联蛋白A2、环氧合酶-2及色素框同源物7检测及意义

目的:探讨早期喉癌患者血清膜联蛋白A2(ANXA2)、环氧合酶-2(COX-2)及色素框同源物7(CBX7)的检测及意义。方法:选择64例早期喉癌患者、71例喉良性病变患者及50例健康体检者,检测其血清ANXA2、COX-2、CBX7水平,对比喉癌手术患者术前术后ANXA2、COX-2、CBX7水平;喉癌组患者血清ANXA2、COX-2、CBX7相关性分析;ANXA2、COX-2、CBX7在喉癌中的诊断评价(灵敏度、特异度)等。结果:喉癌组、喉良性病变组、健康组之间的血清ANXA2、COX-2、CBX7水平比较均有统计学意义(均P<0.05),其中喉癌组血清ANXA2、COX-2水平明显高于喉良性病变组与健康组(均P<0.05),而血清CBX7水平明显低于喉良性病变组与健康组(P<0.05)。喉良性病变组血清ANXA2水平明显高于健康组(P<0.05),而血清COX-2、CBX7水平与健康组比较无统计学差异(P>0.05);与术前相比,喉癌患者术后ANXA2、COX-2水平均降低,CBX7升高,差异均具有统计学意义(均P<0.05);经过Pearson相关性分析显示,血清ANXA2与CBX7水平在喉癌组中呈负相关(r=-0.583,P<0.05),血清COX-2与CBX7水平在喉癌组中呈负相关(r=-0.609,P<0.05),血清ANXA2与COX-2水平无相关性(P>0.05);三种指标单独检测其中CBX7灵敏度最高为46.88%,特异度最高的为COX-2为96.88%,两两联合检测灵敏度和特异度均高于单独指标检测,差异具有统计学意义(均P<0.05);三指标联合灵敏度为90.63%,均高于ANXA2联合CBX7、COX-2联合CBX7的灵敏度,特异度为89.06%,低于ANXA2联合CBX7、COX-2联合CBX7的特异度,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论:血清ANXA2、COX-2、CBX7可作为早期喉癌潜在的生物学检测参考指标。

同源物2增强子在喉癌细胞上皮-间充质转化中的作用

目的同源物2增强子(EZH2)在喉癌组织上皮-间充质转化(EMT)中的作用尚不清楚。文中旨在探讨EZH2在喉癌细胞EMT中的作用。方法根据喉癌细胞系分为:TU177、SNU46、M4E、Tu686)和人类鼻咽上皮细胞(HNPECs)NP69。选取EZH2蛋白表达较高的TU177和Tu686细胞系转染EZH2si-RNA,其中转染效果高的为EZH2-1组,转染效果较低(沉默EZH2)的为EZH2-2组,对照为转染空载体的si-NC组。通过qRT-PCR和Western blot检测喉癌组织和细胞中EZH2、分泌的卷曲相关蛋白1(SFRP1)及组蛋白H3(H3K27me3)上赖氨酸27的三甲基化的表达。转染si-EZH2、si-SFRP1、oe-SFRP1或H3K27me3上调后,通过CCK-8检测细胞活力,免疫印迹法检测E-钙粘蛋白、N-钙粘蛋白、β-连环蛋白、c-Myc和CyclinD1的蛋白水平,免疫荧光法检测波形蛋白的表达。通过qPCR检测SFRP1启动子中H3K27me3的富集水平。结果与癌旁组织相比,癌组织中EZH2的mRNA及蛋白水平升高(P<0.05)。细胞活力结果显示,si-EZH2-1组细胞活力较si-NC组有所下降(P<0.05)。Western blot和免疫荧光法检测结果显示,si-EZH2-1组E-钙粘蛋白的表达明显增加,而N-钙粘蛋白的表达明显降低(P<0.05),波形蛋白的荧光强度减弱。与si-NC组相比,si-EZH2-1组的H3K27me3蛋白水平明显降低(P<0.05)。ChIP-qPCR检测结果显示,si-EZH2-1组SFRP1启动子中H3K27me3的富集水平较si-NC组显著降低(P<0.05)。qRT-PCR和Western blot检测结果显示,si-EZH2-1组中SFRP1的表达明显高于si-NC组(P<0.05)。结论EZH2可以促进喉癌细胞的EMT发生,为喉癌临床管理提供了一种全新的策略。

果蝇zeste基因增强子的人类同源物2促进小细胞肺癌化疗耐药的作用及其分子机制

目的:观察果蝇zeste基因增强子的人类同源物2(Enhancer of zeste homologue 2,EZH2)对小细胞肺癌(Small cell lung cancer,SCLC)化疗耐药的影响并研究其潜在分子机制。方法:首先使用RT-PCR和蛋白印迹方法检测SCLC初治和耐药患者组织标本、敏感细胞株(H446)和耐药细胞株(H446DDP)的EZH2表达差异;再通过CCK8方法检测敲低EZH2后的耐药SCLC细胞株对化疗药物半抑制浓度(Half maximal inhibitory concentration,IC50)值变化;最后通过RNA测序和验证方法筛查EZH2的下游靶基因以及CHIP-qPCR方法检测EZH2敲低后其靶基因启动子区的EZH2表达变化。结果:SCLC化疗耐药患者EZH2阳性表达水平(80%)高于化疗敏感患者,耐药细胞株(H446DDP)的EZH2 mRNA和蛋白表达水平均高于敏感细胞株(H446)(P<0.01,P<0.001);敲低EZH2表达后,耐药SCLC细胞株对化疗药物IC50值降低;细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂-1A(Cyclin-Dependent Kinase Inhibitor 1A,CDKN1A)表达增加,且CDKN1A基因启动子EZH2蛋白沉积显著减少。结论:EZH2促进SCLC化疗耐药,其分子机制与EZH2靶向调控CDKN1A基因表达相关。

血UA、Smad1蛋白、尿mALB含量与2型糖尿病肾病患者达格列净治疗效果的相关性分析

目的观察2型糖尿病肾病患者血尿酸(uric acid,UA)、Smad同源物1(recombinant mothers against decapentaplegic homolog 1,Smad1)蛋白、尿微量白蛋白(urine microalbumin,mALB)含量,并分析三者与达格列净治疗2型糖尿病肾病效果的相关性。方法选取2021年6月至2022年9月皖南医学院第二附属医院2型糖尿病肾病患者纳入糖尿病肾病组(n=170),另取同期单纯2型糖尿病患者纳入单纯糖尿病组(n=120),所有患者入院时均接受血UA、Smad1蛋白、尿mALB检测,对比糖尿病肾病组与单纯糖尿病组上述3项指标水平。所有2型糖尿病肾病患者均采用达格列净治疗,随访3个月,观察患者治疗效果。依据治疗效果分为有效组(n=142)与无效组(n=28),对比有效组与无效组血UA、Smad1蛋白、尿mALB含量,分析3项指标与达格列净治疗2型糖尿病肾病效果的相关性,绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析上述3项指标对达格列净治疗2型糖尿病肾病效果的预测价值。结果糖尿病肾病组血UA、Smad1蛋白、尿mALB水平高于单纯糖尿病组(t=8.843、12.097、8.858,P<0.05);治疗3个月后,170例2型糖尿病肾病患者中有效142例(83.53%),无效28例(16.47%);无效组血UA、Smad1蛋白、尿mALB水平高于有效组(t=3.508、4.622、3.563,P<0.05);经点二列相关性分析结果显示,血UA、Smad1蛋白、尿mALB水平与达格列净治疗2型糖尿病肾病效果呈负相关(r=-0.261、-0.336、-0.265,P<0.05);经Logistic回归分析,结果显示,血UA(95%CI:1.001~1.021)、Smad1蛋白(95%CI:1.167~1.610)、尿mALB(95%CI:1.011~1.048)水平升高是达格列净治疗2型糖尿病肾病无效的危险因素(OR=1.011、1.371、1.029,P<0.05);绘制受试者工作特征曲线(receiver operator characteristic curve,ROC),结果显示,血UA(95%CI:0.622~0.793)、Smad1蛋白(95%CI:0.685~0.841)、尿mALB(95%CI:0.630~0.803)水平对达格列净治疗2型糖尿病肾病效果具有一定预测价值(AUC=0.707、0.763、0.716),联合检测(95%CI:0.734~0.881)预测价值更高(AUC=0.808)。结论血UA、Smad1蛋白、尿mALB水平与达格列净治疗2型糖尿病肾病效果密切相关,可用于预测其治疗效果。

组蛋白甲基转移酶EZH2及其抑制剂在恶性肿瘤中作用及机制的研究进展

Zeste增强子同源物2(EZH2)是一种组蛋白甲基转移酶,主要通过多梳抑制复合体2(PRC2)依赖的组蛋白H3中27位的赖氨酸三甲基化(H3K27me3)、PRC2依赖的非组蛋白甲基化、不依赖于PRC2的非组蛋白甲基化和不依赖于PRC2的转录激活4种途径调控基因表达。EZH2在多种恶性肿瘤中的表达水平明显上调,参与了肿瘤的发生与发展,与肿瘤的增殖、转移、侵袭、肿瘤分级、肿瘤耐药、不良预后等密切相关。多种EZH2抑制剂在恶性肿瘤生长方面表现出良好抑制效果,延缓了肿瘤的生长与转移,EZH2在恶性肿瘤治疗方面展现了广泛的应用前景。因此,本文对EZH2及其抑制剂在恶性肿瘤中的作用及机制的研究进展进行综述,从而为开发靶向EZH2的肿瘤治疗方法提供理论依据。

Mindbomb同源物2基因转染对人脑胶质瘤细胞U251增殖的影响及其机制

目的观察Mindbomb同源物2(MIB2)基因转染对人脑胶质瘤细胞U251增殖的影响,并探讨其作用机制。方法将U251细胞分为空白对照组、阴性对照组、实验组1、实验组2;空白对照组不作任何处理,阴性对照组转染空载体FLAG质粒,实验组1转染MIB2-FLAG质粒,实验组2转染si MIB2。用PCR法检测各组细胞的MIB2mRNA,用蛋白质印迹法检测各组细胞的MIB2、核因子κB(NF-κB)抑制性蛋白(IκB)、NF-κB蛋白,用MTT法检测各组细胞的光密度值。结果实验组1的MIB2 mRNA相对表达量为19.43±3.21、实验组2为0.43±0.17、阴性对照组为1.03±0.12;实验组1、实验组2与阴性对照组相比,P均<0.01。实验组1的MIB2、核因子κB(NF-κB)抑制性蛋白、NF-κB蛋白相对表达量分别为5.11±0.41、0.49±0.13、4.99±0.32,实验组2分别为0.43±0.17、3.12±0.36、0.49±0.14,阴性对照组分别为1.09±0.11、1.02±0.46、1.01±0.21;实验组1、实验组2与阴性对照组相比,P均<0.01;在36、48、72 h三个时点,与阴性对照组和空白对照组相比,实验组1的U251细胞光密度值升高(P均<0.01)。结论转染MIB2基因后人脑胶质瘤U251细胞的增殖能力增强,MIB2基因可能是通过MIB2蛋白调控NF-κB信号通路而发挥作用。

胃癌患者病灶组织CK7、HER2、MLH1、MSH2及MSH6的表达变化研究

目的:探究胃癌患者病灶组织角蛋白7(CK7)、人表皮生长因子受体-2(HER2)、错配修复蛋白MutL同源物1(MLH1)、错配修复蛋白MutS同源物2(MSH2)及错配修复蛋白MutS同源物6(MSH6)的表达变化情况。方法:选取2020年2月—2023年1月苏州市相城人民医院收治的120例胃癌患者为研究对象,比较病灶组织及癌旁组织的CK7、HER2、MLH1、MSH2及MSH6的表达情况,并比较不同性别、年龄、TNM分期、分化程度、淋巴结转移情况及病灶位置者的病灶组织CK7、HER2、MLH1、MSH2及MSH6表达情况。结果:胃癌患者病灶组织CK7、HER2阳性率及MLH1、MSH2、MSH6表达缺失率显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。不同性别、年龄及病灶位置病灶组织的CK7、HER2、MLH1、MSH2及MSH6表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);Ⅲ期、Ⅳ期病灶组织CK7、HER2阳性率高于Ⅰ期、Ⅱ期,MLH1、MSH2、MSH6表达缺失率均显著低于Ⅰ期、Ⅱ期,差异有统计学意义(P<0.05)。分化程度较低者病灶组织的CK7、HER2阳性率显著高于分化程度较高者,MLH1、MSH2及MSH6表达缺失率显著低于于分化程度较高者,差异有统计学意义(P<0.05)。有淋巴结转移者CK7、HER2阳性率显著高于无淋巴结转移者,MLH1、MSH2及MSH6表达缺失率显著低于无淋巴结转移者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:胃癌患者病灶组织的CK7、HER2、MLH1、MSH2及MSH6的表达相对异常,且不同TNM分期、分化程度及淋巴结转移情况者的差异较大。

水稻条纹病毒云南分离物NS2蛋白基因的分子变异

通过核苷酸测序表明,我国云南的16个RSV分离物,依据NS2蛋白基因同源性,基本按采样年份(2002、2003)分为了2组。结合已报道的日本T、O分离物,构建系统发育树,分析我国云南分离物与日本分离物可能有共同的起源。

低剂量CT结合SHOX2、RASSF1A甲基化在肺癌早期预警中的应用

目的探讨低剂量CT结合Ras相关区域家族蛋白1A(RASSF1A)、矮小同源盒基因2(SHOX2)甲基化在肺癌早期预测中的应用价值。方法选取2021年1月~2023年1月我院90例拟行肺结节手术患者,根据手术病理学分为肺良性结节组和肺癌组。2组均于术前行低剂量CT检查、SHOX2、RASSF1A甲基化检测,采用Kappa指数分析上述检查结果与手术病理学一致性,分析低剂量CT、SHOX2、RASSF1A甲基化与血清肿瘤标志物[癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21)]对肺癌诊断效能,采用Spearman低剂量CT检查、SHOX2、RASSF1A甲基化与临床病理特征相关性。结果低剂量CT、SHOX2、RASSF1甲基化及三者联合分别确定40例、43例、46例、58例肺癌,三者联合与手术病理学诊断肺癌效能一致性Kappa值为0.951;三者联合诊断肺癌敏感度96.67%、准确度97.78%均高于三者单一诊断效能(P<0.05);肺癌患者血清CEA、SCC、NSE、CYFRA21水平均高于肺良性结节患者(P<0.05);低剂量CT联合SHOX2、RASSF1甲基化诊断肺癌效能的AUC为0.983,近似于四种血清肿瘤标志物诊断肺癌效能的AUC 0.933;不同肿瘤直径、临床分期、组织学分化肺癌患者低剂量CT检出率及SHOX2、RASSF1A甲基化阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05);肺癌患者低剂量CT检出率、SHOX2及RASSF1A甲基化阳性率与肿瘤直径、临床分期呈正相关,与组织学分化呈负相关(P<0.05)。结论低剂量CT联合SHOX2及RASSF1A甲基化可用于肺癌早期预警中,临床可通过其进行早期诊断、评估病情进展程度,以针对性展开后续治疗,改善预后。

USP7-MDM2-p53信号轴对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的:探讨泛素特异性蛋白酶7(USP7)调节Mdm2 p53结合蛋白同源物(MDM2)-p53轴对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法:Western blot检测人子宫内膜癌组织、癌旁组织、人子宫内膜上皮细胞hEEC及人子宫内膜癌细胞系Ishikawa、HEC-1-A、KLE中USP7蛋白表达。将Ishikawa细胞分为NC组、P22077(USP7抑制剂)组、pcDNA组、pcDNA-MDM2组、P22077+pcDNA组、P22077+pcDNA-MDM2组,CCK-8法和克隆形成实验检测Ishikawa细胞增殖;流式细胞术检测Ishikawa细胞凋亡与细胞周期变化;Western blot检测Ishikawa细胞中USP7、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、周期素依赖性激酶2(CDK2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、MDM2、p53蛋白表达。以RG7388(MDM2抑制剂)或PFT-α(p53抑制剂)与20μmol/L P22077共处理Ishikawa细胞48 h以验证USP7-MDM2-p53信号轴上下游关系。结果:USP7蛋白在子宫内膜癌组织和细胞中高表达,且Ishikawa细胞中USP7蛋白表达量最高,因此,选择Ishikawa细胞为研究对象。与NC组比较,P22077组Ishikawa细胞OD 450值、克隆形成率、S期和G 2/M期细胞数、USP7、CyclinD1、CDK2、MDM2蛋白表达降低,细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期细胞数、p53、Bax蛋白表达升高(P<0.05);与NC组、pcDNA组比较,pcDNA-MDM2组Ishikawa细胞OD 450值、克隆形成率、S期和G 2/M期细胞数、USP7、CyclinD1、CDK2、MDM2蛋白表达升高,细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期细胞数、p53、Bax蛋白表达降低(P<0.05);与P22077组、P22077+pcDNA组比较,P22077+pcDNA-MDM2组Ishikawa细胞OD 450值、克隆形成率、S期和G 2/M期细胞数、USP7、CyclinD1、CDK2、MDM2蛋白表达升高,细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期细胞数、p53、Bax蛋白表达降低(P<0.05)。p53为USP7-MDM2通路下游分子。结论:抑制USP7表达可能通过下调MDM2来激活p53进而抑制Ishikawa细胞增殖、促进细胞凋亡及周期停滞。