基于错配识别蛋白MutS的高特异性的单碱基错配核酸检测方法

目的建立一种基于错配识别蛋白的高特异性核酸检测方法。方法利用蛋白质体外表达和纯化技术获取MutS,并对MutS的错配识别特性进行测定;利用MutS-RCA检测体系对2个碱基错配的不同DNA片段进行检测。结果 MutS蛋白能够有效区分开互补双链和非互补双链DNA,能够稳定结合在非互补双链DNA上,基于MutS的高特异性的单碱基错配核酸检测方法取得了良好的特异性。结论 MutS-RCA检测体系提高了单碱基错配核酸检测的特异性。

大肠杆菌错配识别蛋白MutS的表达与活性鉴定

目的构建表达错配识别蛋白MutS,并进行错配识别活性鉴定。方法在大肠杆菌中表达MutS蛋白,并纯化获得目的蛋白;利用凝胶滞缓实验对错配识别活性进行验证,并计算MutS蛋白降低的错配率。结果纯化的MutS蛋白具有错配识别活性,并能降低DNA双链的错配率。结论表达纯化的MutS蛋白在体外具有特异性识别、结合含有错配碱基DNA双链的生物活性,从而有助于合成生物学的发展。