Tenascin-C对胃癌SGC7901细胞锚定非依赖性生长的影响

目的探究肌腱蛋白C (TNC)对胃癌细胞SGC7901的锚定非依赖性生长的影响。方法采用免疫组化和Western blot分别检测胃癌组织和胃癌细胞系中TNC的表达;通过CRISPR-Cas9基因编辑技术敲除SGC7901细胞中的TNC基因并用软琼脂生长实验观察SGC7901和SGC7901^TNC-/-细胞的锚定非依赖性生长的情况;Western blot和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)用于分析细胞内促生长信号传导通路蛋白的表达情况。结果 TNC在检测的胃癌组织和细胞水平高表达;在SGC7901细胞中敲除TNC引起软琼脂实验中集落形成缺陷;对几种细胞内生长促进信号传导途径的分析表明,在SGC7901细胞中TNC基因敲除后,c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)和蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平降低;在SGC7901^TNC-/-细胞中,发现整合素β7(ITGB7)在mRNA和蛋白质水平均显著下降。结论 TNC在胃癌中特别是SGC7901细胞中高表达,并且可能通过ITGB7介导的信号通路调节SGC7901细胞的锚定非依赖性生长。

IL-6对人卵巢癌细胞体外增殖及锚定非依赖生长能力的影响

目的研究内源性IL-6对卵巢癌(ovarian cancer,OVCA)细胞体外增殖及锚定非依赖生长能力的影响并探讨其作用机制。方法应用前期建立的内源性过表达IL-6的人卵巢癌A2780细胞株和内源性抑制IL-6表达的人卵巢癌SKOV-3细胞株,分别采用MTT法、双层软琼脂集落形成实验、流式细胞术、RT-PCR和Western blot技术检测IL-6对OVCA增殖及锚定非依赖生长能力的影响,并对其作用机制进行研究。结果与对照组细胞相比,过表达IL-6的A2780细胞的增殖及锚定非依赖性生长能力增强(P<0.01),而IL-6抑制表达的SKOV-3细胞则降低(P<0.01)。进一步研究表明IL-6促OVCA细胞增殖作用是通过改变细胞周期分布而非抑制细胞凋亡来实现的;过表达IL-6可显著提高A2780细胞的Cyclin D1、Cyclin B1的表达水平,而抑制IL-6表达则明显降低SKOV-3细胞的Cyclin D1、Cyclin B1的表达水平;应用ERK或Akt特异性信号阻断剂可显著抑制高表达IL-6的A2780细胞增殖及Cyclin D1、Cyclin B1的表达水平。结论 IL-6能促进OVCA细胞的增殖和锚定非依赖性生长,IL-6促OVCA细胞增殖作用是通过增加Cyclin D1、Cyclin B1表达水平从而改变细胞周期分布来实现的,并与活化的PI3K/Akt、Ras/MEK/ERK信号通路有关。

人组氨酸磷酸酶蛋白PHP14的过表达及其对NIH-3T3细胞体外增殖和非锚定依赖性生长的影响

目的:获取人组氨酸磷酸酶蛋白PHP14基因,并构建其N端和C端GFP融合的真核表达载体,建立过表达PHP14的NIH-3T3细胞系,并观察其对NIH-3T3细胞体外增殖和非锚定依赖性生长的影响。方法:以HeLa cDNA为模板,PCR扩增PHP14的全长编码基因,分别克隆到pEGFP-N2和pEGFP-C3载体中,构建pEGFP-N2-PHP14和pEGFP-C3-PHP14真核表达载体,利用脂质体将构建的载体转染到NIH-3T3细胞中,MTT法检测细胞增殖,软琼脂成集落法检测体外非锚定依赖性生长能力。结果:成功构建了过表达PHP14的真核表达载体pEGFP-N2-PHP14和pEGFP-C3-PHP14,并在NIH-3T3细胞中检测到了目的基因的过表达,PHP14在NIH-3T3细胞中过表达并不影响NIH-3T3细胞的体外增殖,但赋予了NIH-3T3细胞非锚定依赖性生长的能力。结论:成功构建了过表达PHP14的NIH-3T3细胞模型,在NIH-3T3细胞中过表达PHP14并不影响NIH-3T3细胞的体外增殖,但赋予了NIH-3T3细胞非锚定依赖性生长能力。

雷公藤内酯酮抑制胃癌细胞恶性行为的作用与机理研究

目的:观察雷公藤内酯酮对人胃癌细胞恶性行为的抑制作用,并初步探讨其作用机理。方法:CCK-8法检测雷公藤内酯酮对BGC 823胃癌细胞增殖能力的影响,软琼脂集落形成法检测雷公藤内酯酮对BGC 823细胞锚定非依赖性生长能力的影响,荧光定量PCR法检测雷公藤内酯酮对BGC 823细胞中piRNA651表达的影响。结果:雷公藤内酯酮显著地抑制了BGC 823细胞的增殖能力,IC50为165.17 nmol/L;当浓度等于或大于100 nmol/L时,雷公藤内酯酮有效地抑制了BGC 823细胞的锚定非依赖性生长能力;雷公藤内酯酮有力地下调了BGC 823细胞中piRNA651的表达。结论:雷公藤内酯酮可以降低胃癌细胞中促癌的非编码RNA的表达,使其恶性行为受到显著抑制,在胃癌的治疗上具有良好的应用价值。

利用miR-17的腺病毒载体抑制肺癌细胞系增殖

miR-17是肺癌的新型调节因子,有可能在肺癌发生和进展中发挥作用,但其功能尚不完全清楚。构建miR-17的腺病毒表达载体,检测miR-17对A549细胞体外增殖、锚定非依赖性生长、侵袭和转移的调控作用。利用miR-17的腺病毒载体(Ad-miR-17)在A549细胞中过表达miR-17后,使用MTT实验检测miR-17对NSCLC细胞系A549增殖作用的影响;软琼脂成集落实验检测miR-17对A549细胞锚定非依赖性生长的作用,使用Trans-well实验检测A549细胞的体外侵袭/转移作用(in vitro invasion/in vitro migration);在此基础上共转染miR-17的inhibitor确定miR-17作用的特异性。结果表明,miR-17能够显著下调A549细胞的增殖、锚定非依赖性生长、体外侵袭/转移作用;共转染miR-17的inhibitor能够阻断miR-17的作用。