锚蛋白重复序列和细胞因子信号传导抑制因子盒蛋白13通过锌指家族核转录因子2/溶质载体家族7成员11介导的铁死亡促进动脉粥样硬化的机制研究

目的探讨锚蛋白重复序列和细胞因子信号传导抑制因子盒蛋白13(ASB13)在动脉粥样硬化(AS)进展中的作用和分子机制。方法将载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠随机分为对照组、AS组、sh-NC组、sh-ASB13组和sh-ASB13+sh-锌指家族核转录因子2(SNAI2)组。对照组小鼠给予标准饮食,其余4组均给予高脂饮食,饲喂8周。细胞实验1将HUVECs分为细胞对照组、ox-LDL组、ox-LDL+si-NC组、ox-LDL+si-ASB13组和ox-LDL+si-ASB13+Erastin组。细胞实验2将HUVECs分为ox-LDL+si-NC组、ox-LDL+si-SNAI2组和ox-LDL+si-ASB13+si-SNAI2组。采用HE染色评估组织病理学变化;采用CCK-8分析细胞活力;采用Western blot检测ASB13、SNAI2、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、GPX4蛋白表达水平;采用生化检测试剂盒检测脂质代谢物和Fe2+水平。结果动物实验结果表明,与对照组比较,AS组小鼠血清HDL-C水平及主动脉组织中SLC7A11和GPX4蛋白表达水平均降低,LDL-C、TC、TG、Glu和Fe2+水平及主动脉组织中ASB13蛋白表达水平均升高(P<0.05)。与sh-NC组比较,ASB13敲低抑制AS小鼠的动脉粥样硬化斑块形成,SNAI2敲低则作用相反。细胞实验结果表明,与细胞对照组比较,ox-LDL处理降低HUVECs细胞活力,升高ASB13蛋白表达水平,促进脂质积累和铁死亡;沉默ASB13升高细胞活力,减少脂质积累和铁死亡(P<0.05)。ASB13泛素化降低SNAI2蛋白表达水平,SNAI2与SLC7A11启动子结合促进其转录激活,上调SLC7A11蛋白表达水平。与ox-LDL+si-NC组比较,沉默SNAI2或铁死亡诱导剂Erastin处理逆转了ASB13沉默对HUVECs的保护作用(P<0.05)。结论ASB13可能通过SNAI2/SLC7A11介导的铁死亡促进AS发生与发展。

Asb2对急性髓系白血病干细胞和多能祖细胞增殖的影响及其作用机制

目的:探讨锚蛋白重复序列和细胞信号抑制因子盒蛋白2(Asb2)对急性髓系白血病(AML)干细胞和多能祖细胞增殖的影响及其相关分子机制。方法:使用重组慢病毒构建上调或下调Asb2表达的人急性髓系白血病细胞株KG-1a,CCK-8方法检测细胞存活情况。Western blot检测AML干细胞和多能祖细胞及对照组细胞中Asb2、Jak2、Jak3、Foxo1、Mcl-1和β-catenin蛋白分子的表达。在NIH3T3细胞中改变Asb2、Skp2和β-Trcp的表达,Western blot检测细胞中Foxo1、Mcl-1和β-catenin蛋白表达。结果:CCK-8结果显示,上调KG-1a中Asb2表达能够明显抑制细胞增殖(P<0.01),而下调KG-1a中Asb2表达能够明显促进细胞增殖(P<0.01);相比较于对照组细胞,Asb2在AML干细胞和多能祖细胞中表达被抑制,而Jak2、Jak3、Foxo1、Mcl-1和β-catenin蛋白表达被加强;在NIH3T3细胞中,加强Asb2的表达会导致Foxo1、Mcl-1和β-catenin表达降低,Skp2或β-Trcp与Asb2的协同表达会进一步抑制Foxo1、Mcl-1和β-catenin的表达,而shRNA-Skp2或shRNA-β-Trcp的表达会增强Foxo1、Mcl-1和β-catenin的蛋白表达量。结论:Asb2可能通过下调Jak2、Jak3、Foxo1、Mcl-1和β-catenin蛋白分子的表达影响AML干细胞和多能祖细胞增殖,Asb2是急性早幼粒细胞白血病的潜在治疗靶点。

急性淋巴细胞白血病患者 ASB2和 Jak3基因mRNA 表达的研究

目的：研究急性淋巴细胞白血病（ALL）患者骨髓中锚蛋白重复序列和抑制细胞因子信号盒蛋白2（ASB2）和 Janus 激酶3（Jak3）mRNA 的表达及其两者的相关性。方法收集初诊的48例 ALL患者（37例 B 细胞 ALL，11例 T 细胞 ALL）和34例非白血病患者（对照组）骨髓，采用实时荧光定量 PCR检测骨髓中 ASB2和 Jak3 mRNA 表达情况。结果B 细胞 ALL 和 T 细胞 ALL 患者骨髓中 ASB2 mRNA表达量相对于对照组分别升高了32．7倍和68．5倍，差异均有统计学意义（t ＝20．1，P ＜0．01；t ＝23．1， P ＜0．01），Jak3 mRNA 表达量较对照组分别升高了2336．3和7131．5倍（t ＝70．2，P ＜0．01；t ＝90．4， P ＜0．01）。ASB2和 Jak3 mRNA 表达量具有相关性（r ＝0．523，P ＜0．001）。结论ASB2和 Jak3在 ALL患者骨髓中异常表达，且具有正相关性，两者可能共同参与白血病细胞的恶性增殖和异常分化。