抗丙型肝炎病毒锤头结构核酶的计算机设计

目的设计可位点特异切割丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）５’非编码区（５’ＮＣＲ）和Ｃ区的多位点核酶（ＲＺ）．方法根据“锤头结构”ＲＺ的设计原理，以ＨＣＶＨ（１ａ）株５’ＮＣＲ和Ｃ区ＲＮＡ为靶序列，计算机预测其二级结构，运用能量最低化程序，选择理论上理想的ＲＺ切割位点，并比较５株ＨＣＶ序列ＲＺ切点两翼的同性．结果在ＨＣＶ５’ＮＣＲ和Ｃ区１２４个自然切割位点（ＣＵＸ和ＧＵＸ）中选出２１３（ＣＵＣ），２６０（ＧＵＡ），４０７（ＧＵＣ）和４９８（ＣＵＵ）４个切割位点，不同株之间切点两翼ＲＺ结合序列同源性为１００％．结论计算机可作为抗病毒ＲＺ设计的辅助工具；ＨＣＶ上述４个位点可能是最理想的切割位点．

丙型肝炎病毒锤头结构核酶的细胞内免疫

目的:探讨预先转染丙型肝炎病毒(HCV)核酶(Rz213)的人肝癌细胞对HCV再转染的抑制作用.方法:应用从前构建的HCV锤头结构Rz(Rz213),通过脂质体介导的基因转染方法,转染人肝癌细胞(HHCC),经G418筛选转染Rz213的基因克隆,应用luc报告基因的表达活性,观察该细胞克隆对靶基因(pCMVNCRluc)转染的抑制作用.结果:G418筛选能使Rz213在转染细胞内有效表达RzRNA,转染Rz的多克隆细胞能有效地阻断靶基因的再转染.结论:我们构建的Rz213真核表达载体能在HHCC细胞内有效表达,预先转染发挥细胞内免疫作用,可防止HCV感染.

63t模锻设备上锤头制造工艺研究

对受大冲击载荷的铸焊结构的大型63 t上锤头的制造工艺进行了分析研究,确定了合理可行的工艺方案,提高了上锤头的制造质量,延长了使用寿命。

PCX型可调式超高细破碎机锤头的改造

我公司2001年元月引进Ф600×400-PCX型可调式超高细破碎机，用于破碎末煤。破碎机转子上有12个交错非重叠的锤架，锤头宽度大于锤架，锤头结构见图1。

抗丙型肝炎病毒核酶的细胞内免疫及其意义

目的 探讨抗丙型肝炎病毒 (HCV)核酶 (Rz)预先转染的细胞内免疫效应 .方法 应用从前构建的 HCV锤头结构 Rz(Rz2 13) ,通过脂质体介导的基因转染方法 ,转染人肝癌细胞 (HHCC) ,经 G418筛选转染 Rz2 13的基因克隆 ,应用 luc报告基因的表达活性 ,观察该细胞克隆对靶基因 (p CMVNCRluc)转染的抑制作用 .结果 G418筛选能使 Rz2 13在转染细胞内有效表达 Rz RNA,转染 Rz的多克隆细胞能有效地阻断靶基因的再转染 .结论 我们构建的 Rz2 13真核表达载体能在 HHCC细胞内有效表达 ,预先转染发挥细胞内免疫作用 ,可防止 HCV感染 .

核酶及其分子药物设计与应用

核酶（ｒｉｂｏｚｙｍｅ）是８０年代初期发现的具有自催化活性的ＲＮＡ片段．从核酸水平来破坏对人体不利的基因（包括自身突变及外源微生物、病毒等）在人细胞内的表达，这是一种比较专一，且对人体危害相对较小的一种治疗方式经过改构的核酶不仅能起顺式（ｃｉｓ）作用，更重要的是也能以反式（ｔｒａｎｓ）作用，这样就使得人们能够设计出针对ＲＮＡ的各种具有治疗作用的核酶．该文着重介绍具锤头型结构域和发夹型结构域的２类核酶的设计，及应用核酶作为治疗药物所要考虑的一些问题．

RNA催化剂研究进展

RNA催化剂(Ribozyme)最初由美国的切克(Thomas Cech)和加拿大的阿尔特曼(Sid-ney Altman)各自独立地发现并命名,意指具有催化能力的 RNA。从而改变了生物催化剂的传统概念。为此,他们共同获得了1989年诺贝尔化学奖。从此之后的几年内。

锤头状Ribozyme在修饰核苷酸ψ3′侧的定点剪切

现有知识所知道的锤头状Ribozyme结构中,剪切是在特殊位点的3′侧发生,我们将含GTΨ的酵母丙氨酸tRNA 3′半分子(40聚)作为底物,按Haseloff-Gerlach锤头结构模型设计了一个38聚的Ribozyme分子。在镁离子存在的条件下,GTΨ的3′侧发生预期的体外剪切反应。反应的米氏动力学参数为:K_m:6.7μmol/L,k_(cat):3.4×10^(-3)/min。与此同时,合成了一个17聚的底物类似物,仅以GUU代替上述的GTΨ序列。恒态动力学分析表明,两底物的K_m值大致相同,但k_(cat)值相差达294倍。实验表明,修饰核苷酸Ψ可以是Ribozyme锤头结构中的剪切位点,但具有很低的k_(cat)。

锤式滚轴破碎机生产能力的分析计算

首先简要介绍锤式滚轴破碎机的工作原理及结构特点,并对其生产能力的计算公式进行了理论推导。结合锤式滚轴破碎机的破碎腔和辊齿的结构特点,把生产能力的计算分为三部分分别进行分析计算,并考虑了破碎过程中参数的动态变化,理论推导出了生产能力计算公式,运用该公式进行实际计算,得出的结果与实际生产能力较为接近,从而验证了此计算方法的正确性。

2’-O-甲基化修饰对Ribozyme活性的影响

锤头结构Ribozyme切割底物时的催化结构包括3个螺旋区和中间10核苷酸的单链区(编号为3～9,12～14,在我们过去文章中称3个双链区为茎区,现根据一些科学家的建议改称为螺旋区.我们原称的茎Ⅰ现称螺旋Ⅲ,原茎Ⅲ现称螺旋Ⅰ,原茎Ⅱ称螺旋Ⅱ).在我们实验室进行的机制研究表明3个螺旋区碱基配对的强弱以及螺旋的构象可影响反应的最适温度和切割效率.将螺旋Ⅰ和/或螺旋Ⅲ的RNA·RNA配对改为RNA·DNA(或DNA·DNA)配对既减弱了Ribozyme与底物的相互作用又改变了螺旋的构象,使反应的最适温度与切割效率都降低很多,有的甚至几乎看不到切割活性.将螺旋Ⅱ的RNA·RNA配对改为DNA·RNA配对只影响螺旋Ⅱ的构象而不影响Ribozyme与底物的相互作用,结果也使反应的最适温度和切割效率降低,但影响较小.为提高Ribozyme稳定性又不影响或少影响它的切割效率,我们研究了2’-O-甲基化对Ribozyme活性的影响.